針灸對血管性癡呆大鼠行為學及組織內乙酰膽堿酯酶含量的影響*

楊春壯，李明秋，王 瑩，夏珊珊，劉靜男

(牡丹江醫學院，黑龍江牡丹江157011)

血管性癡呆(Vascular Dementia，VD)屬于中醫“呆病”、“文癡”、“健忘”、“郁證”等的范疇。VD 在亞洲國家占老年期癡呆的68．5%，在我國也占據了老年期癡呆的首位。由于VD患者的生活能力下降，嚴重威脅著老年人的健康和生存質量。大量的臨床實驗表明，針灸治療VD具有眾多優點，針灸作為一種行之有效的治療手段也逐漸被人們接受。本研究通過動物實驗，探討針刺百會、大椎、人中穴的獲效機制。

1 材料與方法

1．1 材料和設備 健康Wistar大鼠80只，雌雄各一半，體重200～350 g，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供，實驗動物合格證號:SCXK(黑)2008004，室內常溫下配料飼養，自由飲食水。對比西藥采用都可喜(法國施維雅藥廠生產)，配成濃度為0.2 mg·mL－1的藥液。ZH－200型大鼠光電刺激跳臺(安徽省淮北正華生物儀器設備有限公司)，Multiskan MK3酶標儀(Thermo熱電上海儀器有限公司)，大鼠乙酰膽堿酯酶(AChE)酶聯免疫試劑盒(上海勁馬生物科技有限公司)，電動玻璃勻漿儀(廣州市海輝實驗儀器有限公司)，G6805－2A型電針治療儀(廣州市穗鑫醫療器械有限公司)。

1．2 動物模型的制備方法 大鼠造模前禁食水12 h，以10%水合氯醛按400 mg/kg腹腔注射麻醉，仰臥位固定于手術臺，頸部皮膚剪毛備皮，75%酒精消毒頸部皮膚后，頸正中切口，鈍性分離暴露雙側頸總動脈，適時給以創口止血，穿線備用。硝普鈉按3.5 mg/kg腹腔注射造成低血壓。立即關閉雙側頸總動脈10 min，再通10 min，如此反復3次，撤線，縫合。放回籠中飼養。注意:盡量采用鈍性分離，可減少手術對實驗結果的影響。術中動作要輕柔，避免鉗夾和過分牽拉迷走神經。注意試驗中的無菌保護和術后的創口消毒。常規飼養、觀察。于造模后第5天測試學習成績，24 h重復測試，作為判斷動物記憶成績的指標，檢驗造模是否成功。

1．3 跳臺實驗方法 實驗時，將大鼠放入跳臺裝置中適應3 min，然后通以40 V交流電，動物受電擊后，其正常反應是跳到安全臺躲避電擊，記錄通電后其跳到安全臺上的時間，作為反應期，以反應期作為其學習成績。

1．4 實驗步驟

1．4．1 動物分組 將造模后的大鼠隨機分為正常組、模型組、西藥組和針灸組，每組各15只。

1．4．2 治療方法 針灸組用28號1寸不銹鋼毫針，頭部“百會”、“人中”分別斜刺0.5寸，“大椎”直刺0.5 寸［1］，連接電針儀，施以連續波，頻率 120 次/s，強度以大鼠安靜耐受為度(約為2.0 mA)，每天針刺1次，留針20 min，連續30 d。西藥組采用都可喜溶液灌胃，2 mg·kg－1·d－1。模型組在同等條件下飼養，不給予任何治療。

1．4．3 實驗方法 治療30 d后，隔日測試學習成績，24 h重復測試，作為判斷動物記憶成績的指標。測試完畢后大鼠禁食水過夜。次日尾靜脈取血樣。2 000 r·min－1離心 20 min，分離血清;取大腦海馬組織，制成組織勻漿，酶免法測AchE。

2 結果

2．1 治療后各組大鼠學習成績

表1 治療后各組大鼠學習成績的比較(±s，單位:s)

注:與模型組比較，△P＜0.05;與正常組比較，▲P＜0.05。

組別 例數 反應期正常組15 4．65 ±9．71模型組 15 11．68 ±12．96▲西藥組 15 6．76 ±11．65針灸組 15 5．91 ±10．21△

2．2 治療后各組大鼠血和海馬AchE含量的原始值比較

表2 治療后各組大鼠血和海馬AchE含量的原始值比較(±s，n=15)

表2 治療后各組大鼠血和海馬AchE含量的原始值比較(±s，n=15)

注:與模型組比較，△P＜0.05;與正常組比較，▲P＜0.05。

組別 血清 海馬正常組0．674 ±0．204 0．830 ±0．036模型組 1．554±0．836▲ 1．024±0．130▲西藥組 1．030 ±0．193 0．875 ±0．066△針灸組 0．847±0．183△ 0．847±0．011△

3 討論

血管性癡呆(Vascular Dementia，VD)作為老年性癡呆這一家族的重要成員，已經得到了人們的高度重視，流行病學研究表明，在中國65歲以上老年人癡呆發病率為39%，VD發病占68.5%，居首位［2］。而近年來的針灸療法，因其具有刺激經氣、通經活絡、醒腦開竅的獨特作用，已經得到人們的認可。早期的針刺治療，對語言障礙、肢體功能的改善較為明顯，尤其是對肢體功能恢復期，針灸更能發揮其疏通經絡、調和氣血的作用。近5年來，針灸治療血管性癡呆已經得到廣大針灸工作者的廣泛應用［3～4］，各種針灸治療方法均取得了較好的療效。《難經·二十八難》有云:“督脈者，……上致風府，入屬于腦。”百會和大椎均屬督脈穴位，百會為“三陽五會”，大椎為“諸陽之會”，為手足諸陽之會。督脈與腦密切相關，督脈通于腦。中醫認為VD的病機為氣血兩虧、肝腎不足或氣滯血瘀、痰阻脈絡而導致氣血不能上養腦竅，進而髓海失聰所致。故針刺百會、大椎可以統督醒腦，改善VD大鼠的學習記憶能力。從現代醫學的角度講，VD是指由于腦血管疾病和心血管病變的原因，因缺血性組織缺氧和出血性腦損傷所導致的認知喪失［5］。現階段普遍認為，VD額葉皮質及海馬膽堿能神經元的損傷可能是認知功能受損的形態學基礎［6］，尤其腦海馬組織是學習、記憶的高級神經活動中樞［7］，而腦內海馬乙酰膽堿(acetyl－choline，Ach)的含量與記憶功能是密切相關的［8］。海馬組織的Ach存在于膽堿能神經元囊泡中，Ach由膽堿在膽堿乙酰轉移酶(choline acetyltrans－ferase，ChAT)的催化下合成，一旦由囊泡中釋放便被膽堿脂酶(acetylcholinesterase，AchE)迅速水解為膽堿和醋酸。ChAT和AchE共同維持著Ach的動態平衡，也是維持哺乳動物正常進行學習記憶的必要條件。由于大鼠海馬組織是對缺血最為敏感的腦組織之一，所以反復的短暫腦缺血就會對海馬組織產生累計損傷效應［9］，從而使膽堿能神經元損壞，Ach被釋放并被AchE分解，腦內Ach含量減少，大鼠的學習記憶能力隨之下降。Tayebai等［10］的研究表明，抑制海馬組織Ach的分解，即增加海馬組織Ach的含量，有助于VD大鼠海馬組織神經元遞質的傳遞，從而改善大鼠的學習能力。本實驗結果表明，針灸組大鼠海馬及血內AchE活性低于模型組，說明經過針灸治療后可以降低VD大鼠腦和血內AchE活性，改善膽堿能系統的功能，調節Ach生理代謝。所以針灸治療可以改善認知功能，治療VD。而從模型組大鼠海馬及血內AchE活性明顯高于正常組，腦缺血時膽堿能神經元蛻變，使Ach釋出，組織中AchE活性升高，導致了Ach水平進一步降低，可以看出腦缺血是加重學習記憶功能的缺損、引起 VD 的重要原因之一［11～12］。

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