一次微生物實驗室室間比對的報告和體會

紀靜

(廈門市翔安區疾病預防控制中心[廈門市翔安區公共衛生大樓]，福建 廈門 361102)

實驗室室間比對試驗是判定實驗室檢驗能力的一個重要的評價方法，是按照預先規定的條件，由兩個或多個實驗室對相同或類似的測試樣品進行檢測的組織、實施和評價，從而確定實驗室能力、識別實驗室存在的問題與實驗室間的差異，是判斷和監控實驗室能力的有效手段之一。為確保微生物實驗室檢測質量，提高實驗室人員的細菌鑒定水平，2010年7月26日我中心參加了廈門市疾病預防控制中心主辦的廈門市區級疾控機構微生物實驗室室間比對質控考核。現將我室參加此次室間比對質控考核的結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1 半固體瓊脂管1支，編號B.檢驗項目：常見食源性致病菌 (提示兩種混合菌)方法 按GB/T4789-2008及 GB/T4789-2010方法進行檢測。

1.1 .2 檢驗培養基與試劑 所用分離、增菌、選擇、鑒定培養基系北京陸橋技術責任有限公司產品。ID32E、ID32STAPH鑒定系統系法國生物梅里埃公司產品。沙門菌O和H診斷血清由衛生部蘭州生物制品研究所提供。所有培養基和試劑均在有效期內使用。

1.1 .3主要儀器 電熱恒溫培養箱ATB Expression自動細菌鑒定儀由法國生物梅里埃公司生產。

1.2 檢測方法 GB/T4789-2008及 GB/T4789-2010“食品衛生檢驗方法微生物部分”。

1.2 .1分離培養 半固體瓊脂考核樣劃線接種XLD平板、TCBS平板、MAC平板、SMAC平板、血平板、BP平板。37℃18h后。

1.2 .2 菌落特征 TCBS平板上無可疑菌落生長，XLD平板上有粉色、中等大小，中心帶黑色菌落。MAC平板上有無色半透明菌落，SMAC平板無可疑菌落生長，血平板上有兩種不同菌落，中等大小為無色半透明不溶血菌落，較小菌落為白色圓形，光滑凸起，周圍有透明溶血圈。BP平板上的菌落呈黑色，周圍為一混濁帶，外層有一透明圈。

1.2 .3分別挑取血平板上無色不溶血菌落(樣品B-1菌)及白色周圍有透明溶血圈菌落(樣品B-2菌)分別涂片做革蘭染色鏡檢。樣品B-1菌為革蘭陰性無芽胞桿菌。樣品B-2菌為革蘭陽性葡萄狀球菌。根據各培養基平板上菌落特征、革蘭染色結果及作業指導書提示兩種混合菌初步判定兩菌可疑為沙門菌及葡萄球菌。

1.2 .4生化反應分別挑取可疑菌接種營養瓊脂平板和三糖鐵瓊脂，B-1菌同時接種賴氨酸脫羧酶試驗培養基，37℃培養18h。

1.2 .5血清學鑒定 分別挑取XLD平板上有粉色、中心帶黑色菌落、MAC平板上疑有無色半透明菌落、血平板上半透明不溶血菌落做沙門血清凝集試驗。

樣品B-1菌株：沙門菌診斷血清A-F群多價O凝集，O4凝集，第1相HI凝集，第2相不凝集，生理鹽水對照不凝集。由于第2相不凝集，用簡易平板法做位相變異實驗。方法：將0.35%～0.4%半固體瓊脂平板烘干表面水分，挑取HI因子血清1環，滴在半固體平板表面，放置片刻，待血清吸收到瓊脂內，在血清部位的中央點種B-1菌株，培養24h后，在形成蔓延生長的菌苔邊緣取菌檢查。結果第2相H1，2凝集。查常見沙門菌抗原表，結果為鼠傷寒沙門菌。樣品B-2菌株：血漿凝固酶陽性(玻片法試管法均陽性)。

2 結果

根據兩種菌的革蘭染色鏡檢結果、在分離選擇培養基上的菌落特征、生化反應和血清凝集實驗結果判定：B-1為鼠傷寒沙門菌，B-2為金黃色葡萄球菌。

細菌鑒定儀(ATB Expression)鑒定

與手工鑒定結果一致。

3 討論

開展微生物實驗室室間比對考核，是對實驗室的儀器設備，實驗試劑及人員操作能力的綜合檢測。有益于提高檢驗人員的業務素質和實驗室的檢測能力。

要做好實驗室室間質控應先做好平時的室內質控，儀器設備應定時檢查維護，做好使用記錄。培養基在使用前做無菌試驗并按培養基的用途做生長試驗，注意保存條件；診斷血清注意保質期和效價。主要試劑要注意保質期，看是否失效。對實驗步驟，人員操作做必要的記錄，以保證實驗結果的可靠性。

做室間比對要有一個清晰的思路，采用合適的分離選擇培養基，根據培養基上的菌落特征挑取可疑菌，然后做革蘭染色鏡檢，TSI、氧化酶動力、觸酶等初步生化實驗，初步的血清學試驗，最后做完整的生化鑒定及血清學試驗以鑒定可疑菌。

本次室間比對過程中，做沙門菌診斷血清凝集試驗時只出現單相H抗原凝集現象，檢出第1相H抗原而未檢出第2相，在瓊脂斜面移種1～2代再檢查仍未檢出第2相。最后做位相變異實驗才檢出第2相。本實驗對培養基的要求較高，要有一定的耐心和細心。

[1]陳 昕,黃振華,朱 瑩.微生物實驗室室間比對的結果分析[J].中國衛生檢驗雜志,2008,18(3):554-555.