血清胱抑素C對外周動脈粥樣硬化診斷的潛在價值

夏宇

(湘潭市第二人民醫院檢驗科，湖南 湘潭 411100)

動脈粥樣硬化(Artherosclerosis)是西方發達國家人民的主要死亡原因。隨著我國人民生活水平提高和飲食習慣改變，該病也逐漸成為我國人民的主要死亡原因。目前，臨床通常以檢測血液中脂蛋白、甘油三酯和膽固醇的濃度，結合X射線檢查、動脈造影或多普勒超聲波檢查來診斷外周動脈粥樣硬化。

此診斷方式存在一定的弊端，尤其難以診斷早期的外周動脈粥樣硬化病變。近年來，隨著對動脈粥樣硬化分子病理學機理的研究發現，組織蛋白酶和其內源性胱抑素C(Cys C)表達的失衡，是造成動脈粥樣硬化的重要因素[1]；同時，Cys C作為診斷外周動脈粥樣硬化、冠心病等一些心血管疾病的實驗室指標，備受國內外研究者的關注[2]。為了探討Cys C在臨床診斷外周動脈粥樣硬化的應用價值，本文對100例外周動脈粥樣硬化患者血清中Cys C、IL-6、hs-CRP和腎小球濾過率進行了檢測，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 對象

1.1 .1 患者資料 選取外周動脈粥狀硬化患者共100例。選取標準：男性，年齡大于45歲，包括有間歇性跛行史、踝/臂血壓指數(ABI)小于0.9；排除由截肢等其他原因引起的有間歇性跛行史的患者；排除伴隨I型糖尿病、房顫或心肌萎縮癥狀的患者。

1.1 .2健康對照 選取臨床體檢正常的健康人95例作為對照。選取標準：男性，年齡區間與實驗組一致；無任何原因引起的間歇性跛行史；無I型糖尿病、房顫或心肌萎縮癥狀；踝/臂血壓指數(ABI)大于0.9。

1.1 .3標本采集 受試者空腹，抽取靜脈血液樣品約5ml于EDTA-K2真空采血管，測定肌酐和糖化血紅蛋白組分 (HbA1c)；另取靜脈血約5ml于真空采血管，用于測定血清Cys C、hs-CRP和IL-6。

1.2 測定方法

1.2 .1空腹抽血做肌酐和糖化血紅蛋白(HbA1c)分析 肌酐清除率以Cockcroft’s公式計算；腎小球濾過率以MDRD公式通過血肌酐、年齡、種族和性別計算得出。根據全國腎臟基金會建議，將腎小球濾過率的預估值分為四個范圍 (少于45.0m l/min/1.73m2，45.0ml/min/1.73m2～59.9ml/min/1.73m2，60.0ml/min/1.73m2～74.9mL/min/1.73m2， 高 于 75.0m l/min/1.73m2)。

1.2 .2血清胱抑素C、血清超敏C反應蛋白和白介素6檢測 血清胱抑素C和血清超敏C反應蛋白的檢測按照試劑盒使用說明以顆粒增強免疫透射比濁法進行，血清胱抑素C的總體變異系數 (CV)為1.2mg/L小于3.5%；血清超敏C反應蛋在10mg/L以下時總體變異系數為3.9%。白介素6的檢測用高靈敏度的ELISA試劑盒，檢測靈敏度達到0.1 pg/mL。檢測結果表明：白介素6的總體變異系數小于7%。以高效液相色譜法檢測糖化血紅蛋白，其參考區間小于5.2%，總體變異系數小于3%。

1.2 .3動態血壓的測量 通過無創示波法血壓檢測系統進行動態血壓的檢測。血壓和心跳的值可以在24h內每15min自動檢測和記錄一次。

1.3 統計分析

1.3 .1通過t檢驗和相關系數分析 分別對實驗組和對照組的血清胱抑素C、內生肌酐清除率、腎小球濾過率進行比較。由于白介素6和血清超敏C反應蛋白水平顯著的不對稱，利用非參數統計(曼-惠特尼U檢驗)進行分析。

1.3 .2反向逐步多重回歸分析 血清胱抑素C作為總體的因變量，外周動脈疾病、腎小球濾過率、身體質量指數、年齡、臀圍、糖化血紅蛋白、24h脈搏壓和白介素6的對數值作為自變量，進行回歸分析。

1.3 協方差分析 將外周動脈疾病和不同分級的腎小球濾過率作為自變量，年齡和白介素6的對數值作為因變量。由統計軟件(STATISTICA，第七版)完成所有統計分析和數據管理。被用來檢驗外周動脈疾病在血清胱抑素C一項中的檢出效率以及分析外周動脈疾病與腎臟損害可能的相互作用。

2 結果

2.1 各項基本生理特性和各項血液特定組分 外周動脈粥樣硬化患者血清中Cys C的濃度非常明顯高于健康人群(P＜0.01)。而在所選取的樣本中，肌酐清除率或腎小球濾過率在實驗組和對照組之間無統計學上的差異(P＞0.05)，從而基本排除了因腎小球病變對試驗結果的影響。外周動脈粥樣硬化患者的IL-6和CRP的濃度均非常顯著高于健康對照組 (P＜0.01)，此結果和以前文獻報道一致[3]，見表1。

2.2 血清Cys C濃度與其他各基本生理特性和血液特定組分濃度的相關性分析結果表明，在實驗組和對照組中Cys C濃度與肌酐清除率、腎小球濾過率均呈負相關(γ＝-0.44～-0.78，P＜0.001)；Cys C 濃度與hs-CRP、IL-6 濃度的對數值呈正相關(γ＝0.30～0.38，P＜0.01～0.001)，見表 2。

2.3 多元回歸分析 將Cys C的濃度作為因變量動脈粥狀硬化癥狀、GFR、Log IL-6進行回歸分析，結果顯示，Cys C濃度可以用于預期外周動脈粥樣硬化(見表3)。在協方差分析中，當腎小球濾過率或者肌酐清除率、白介素6作為相關變異加入時，外周動脈粥樣疾病組的血清胱抑素C的值依然很高 (見圖1)。2.4腎小球濾過率評估腎功能損害情況 根據腎小球濾過率的數值，將所選取的實驗對象的數值分為嚴重、中度、輕度腎臟病變和無腎臟病變四組。根據此分組，同樣將IL-6濃度的對數值，年齡作為相關變異加入時，對Cys C濃度進行協方差分析，結果顯示外周動脈粥狀硬化患者和各種級別的腎小球清除率之間的Cys C濃度之間具有顯著的相關性(圖2)。

表1 患者組與健康組的各項基本生理指標和血液特點組分比較(±s)

表1 患者組與健康組的各項基本生理指標和血液特點組分比較(±s)

外周動脈粥樣硬化組(實驗組,n=100)健康組(對照組,n=95) P＞0.05＞0.05＞0.05＜0.05＜0.001＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＞0.05＜0.001＞0.05＜0.001年齡體重ABI血壓(收縮壓/舒張壓)高血壓史Ⅱ型糖尿病史心肌萎縮肌酐清除率(ml/min)腎小球濾過率(ml/min1.73m2)Cys C濃度(ng/L)hs-CRP濃度(mg/L)IL-6濃度(mg/L)HbA1c濃度(%)膽固醇濃度(mmol/L)HDL濃度(mmol/L)LDL濃度(mmol/L)甘油三酯(mmol/L)68±8 26.6±3.2 0.66±0.19 0.96±0.05 61 16 44 81±27 76±21 68±8 25.7±3.7 1.11±0.11 0.94±0.05 17 70 82±22 79±14 1.09±0.40 2.63 1.60 4.8 5.4±0.9 1.2±0.3 3.4±0.8 1.7 0.95±0.17 1.45 0.98 4.7 5.5±0.9 1.3±0.3 3.5±0.8 1.3

表2 Cys C濃度與其他臨床指標之間的單變量相關性分析[γ(p)]

圖1 以腎小球率過濾和白介素6的對數值作為共變量，用協方差方法分析實驗組與對照組中Cys C濃度，結果如上。F(1.191)=9.50，P≤ 0.01。

表3 全部受試人群(n=95)中的逐步多元回歸分析

表4 腎小球濾過率評估腎功能損害情況(n、%)

圖2 外周動脈粥狀硬化患者和各級別范圍的腎小球清除率患者Cys C濃度的相關性。以年齡、白介素6的對數值作為共變量，對Cys C濃度進行協方差分析。結果如上。豎線表示0.95的置信區間。

3 討論

由于血清中Cys C濃度易于快速、準確測定，所以在臨床上被推薦為監測腎功能濾過率的一個可靠指標[4]。然而，最近的研究發現血清中Cys C的濃度可能會被其他一些與腎功能無關的因素所影響，如年齡、性別、體重、體內炎癥情況和心血管疾病等[5]。動脈粥樣硬化是一種較為常見的心血管疾病，同時其發生的機理也和炎癥反應有關，所以其可能會影響血清中Cys C的濃度，從而干擾對腎功能的評估。但國內外關于外周動脈粥樣硬化和血清中Cys C濃度之間關系的報道并不多，而且其結論也不是十分明確[6]。我們通過對100例外周動脈粥樣硬化病例的研究分析，發現和健康對照組相比，實驗組中血液Cys C的濃度存在著顯著的升高；然而腎小球濾過率或肌酐清除率在實驗組和對照組中并沒有明顯的差異。這可能是由于和肌酐相比，Cys C用以評價腎小球濾過率無論是敏感度還是特異性都很高。我們將腎小球濾過率或肌酐清除率作為一個共變量，對Cys C濃度進行協方差分析后，實驗組中血清Cys C濃度仍然比健康對照組有顯著提高。因此，在外周動脈粥樣硬化患者人群中，血清Cys C濃度的升高不僅僅與腎功能的下降有關，并且可以將其作為判斷外周動脈硬化的重要指標。

動脈粥狀硬化通常被視為與炎癥反應相關的心血管系統疾病，其病理機制為：血管內毒素物質的沉積對血管造成傷害，引起體內炎癥反應，使免疫系統的淋巴細胞、T細胞在受損部位集結，同時引起相應部位的血管平滑肌增生；如果這種傷害因素一直存在，就會使體內的炎癥反應持續激活，隨著時間的推進，就會在血管的相應部位出現斑塊、結締組織等異常的組織形態，最終導致血管的硬化。IL-6和hs-CRP作為誘導炎癥反應的重要分子，其水平的變化通常在臨床上用于檢測體內炎癥反應的情況，所以也被作為一類重要的血清標記物來判斷動脈粥樣硬化。本文研究發現，將IL-6或hs-CRP的水平作為共變量加入進行多變量分析，實驗組中血清Cys C濃度仍然顯著高于健康對照組，此結果表明Cys C可能可以作為一個獨立的血清標志物用于檢測動脈粥樣硬化。同時，在動脈粥樣硬化患者中Cys C濃度的異常升高，可能反映了體內組織蛋白酶和其抑制分子Cys C表達水平之間失衡，成為動脈粥樣硬化另一主要誘因。

通過對血清中Cys C濃度和外周動脈粥樣硬化的研究，初步闡明了其相互之間存在一定的相關性；結合腎小球濾過率、IL-6和hs-CRP等指標的測定，Cys C對于診斷外周動脈粥樣硬化具有潛在的價值，并且可以用于衡量患者不同的動脈粥狀硬化程度。但由于我們在選擇樣本時規定了年齡、性別等因素，所以對于Cys C水平的上升和動脈粥樣硬化的發生之間是否存在著一定的因果關系，或Cys C水平的上升是否可以用作動脈粥樣硬化的風險評估指標等問題有待進一步研究。

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