822例地中海貧血患者基因檢測結果分析

藍柳燕，王 君，林漫燕

(汕頭大學醫學院第二附屬醫院檢驗科，廣東 汕頭 515041)

據WHO估計，全世界約有4.5%的人攜帶有血紅蛋白病致病基因，每年出生的各類重型地貧患兒數至少有20萬。地中海貧血(以下簡稱地貧)是我國南方各省影響最大、發病率最高的遺傳病之一，其主要發病機制是由于人體基因突變或缺失而導致α與β珠蛋白肽鏈合成速率的不平衡，從而引起的溶血性貧血。目前該病尚無理想的治療方法，預防與監控是降低地貧發生率的有效方法。而預防與監控的關鍵是對婚前、育齡男女進行地貧篩查，從遺傳角度來阻斷地貧兒的繁殖。本地區屬于地貧高發區域，我們對822例疑診為α、β地中海貧血患者進行基因檢測，結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

1.1 .1對象 自愿參加地貧篩查的新婚或育齡夫婦及來本院就診懷疑為α、β地中海貧血患者共822例。

1.1 .2對照 陰性對照為正常人全血提取DNA、陽性對照為Markers，均由深圳亞能公司提供。每次實驗均同時做陰、陽性對照。

1.2 檢測方法

1.2 .1外周血DNA提取 抽取患者外周血2ml，EDTA抗凝，嚴格按試劑盒說明書進行，快速從抗凝全血中抽提DNA。

1.2 .2 檢測試劑 用α、β地中海貧血試劑盒，由我院檢驗科基因診斷中心嚴格按照說明書統一操作和判斷結果。

1.2 .3儀器 儀器采用杭州博日公司生產的Linegene擴增儀，并嚴格按照以下條件進行擴增：α-地貧：96℃ 15min 變性；98℃ 45s、64℃ 90s、72℃ 3min擴增 35個循環；72℃延伸 5min，取 2～8μl PCR 擴增產物+2μl 6×溴酚藍上樣緩沖液，混和均勻后經1.2%的瓊脂糖凝膠于電壓5V/cm電泳約60～90min，

圖1 α-地中海貧血 (-SEA/aa正常對照 -a4.2/-SEA)

即可在凝膠成像儀(美國BIO-RAD生產)上掃描，結果見圖 1；β-地中海貧血：50℃ 15min；95℃ 10min；94℃ 1min、55℃ 30s、72℃ 30s，共 35 個循環；72℃延伸5min。取全部擴增產物加緩沖液5ml于雜交儀上雜交，經顯色判斷結果，如圖2。

圖2 β-地中海貧血CD(654M/N正常對照)

2 結果

檢測 447例 α-地中海貧血中異常 101例(22.6%)，其中靜止型占15.9%、標準型占56.4%、血紅蛋白H病占27.7%。β-地中海貧血375例中異常65 例(17.3%)，其中以 654M/N(38.5%)、CD41-42M/N(20.07%)為主，見表1、表2。另外α、β地中海貧血合并異常為4例：2例為-SEA/654M、1例為-a4.2/41-42M、1例-a3.7/17M。

表1 101例α-地中海貧血患者的基因類型分布

3 討論

正常成人血紅蛋白中的珠蛋白，是由四條肽鏈所組成的，組成珠蛋白的肽鏈有4種，即 α、β、γ、δ鏈，分別由其相應的基因編碼，這些基因的缺失或點突變可造成各種肽鏈的合成障礙，致使血紅蛋白的組分改變。地貧就是由于珠蛋白基因的缺失或點突變所致。通常將地中海貧血分為α、β、γ和δ等4種類型，其中以β和α-地中海貧血較為常見。α-地中海貧血分為最輕型、輕型、中間型及重型；β-地貧又分為輕、中、重型。大部分中間型和所有重型地貧病人要靠輸血來維持生命，在精神上和經濟上給社會和家庭帶來極大的負擔。α、β-地中海貧血攜帶者在長江以南各省人群中普遍存在，廣東省發生率為8%～10%，廣西和海南更高[1]。

表2 65例β-地貧患者的基因類型分布

本文收集了2005年1月至2010年12月至本院檢查疑為α、β地中海貧血共822例，其中α-地中海貧血447例中異常101例(22.6%)，以標準型(-SEA/aa)為主、β-地中海貧血375例中異常65例(17.3%)，以CD654M/N為主，與胡志恒等的以CD41-42為主有差異[2]，這可能與區域性有關。α、β地中海貧血合并異常為4例占2.4%(4/166)。本文檢測結果表明地貧占20.2%(166/822)，遠高于全國平均水平(2.64%)，也高于廣東省(8.3%)[3]，低于文獻資料中杜娟的(38.8%)[4]及黃凌的(36.9%)[5]。這可能與本地區只有本實驗室有開展地中海貧血檢測，部分婚前檢查、產檢夫婦及外院懷疑地貧患者均來本院檢查有關。

地貧是一種遺傳性溶血性貧血，遺傳后代不分男女，機會均等。夫婦雙方都帶有地中海貧血基因，即兩人都是輕型地貧，他們的子女就會有25%的可能性是重型地中海貧血和50%的可能是輕型地中海貧血，只有25%的可能是正常；如果只有一方是輕型地中海貧血者，他們的子女有50%的可能是正常和50%的可能是輕型地貧，不會有重型地中海貧血小孩，對于一方已確診攜帶有標準型(-SEA/aa)或β-地中海貧血基因的夫婦，另一方必須進行地貧的基因檢測，以防止中重型地貧患兒出生。

目前對地貧的治療尚無較好的辦法，對重型地貧需大量輸血聯合去鐵治療是基本的治療措施。造血干細胞移植手術是目前根治本病的唯一治療方法。但不易找到配型合適的干細胞，移植手術價格昂貴，普通老百姓難以承受，所以做好婚育前地貧篩查對預防本病具有重要意義。由于諸多原因，使本地區的地貧篩查還未大規模展開，廣大人民對于地中海貧血的危害性不夠了解，婚前、產前地貧檢查也只有少數主動要求檢查。作為地貧高發區域，政府部門及廣大醫療衛生工作者應該加大地貧宣傳力度，建立地貧防治專項基金，以防止地貧患兒的出生，做好優生優育，使提高全民人口素質真正落到實處。

[1]杜傳書.地中海貧血研究的現狀與未來[J].中華醫學遺傳雜志,1996,13:257-258.

[2]胡志恒.地中海貧血篩查及基因檢查的結果分析[J].華南國防醫學雜志,2010,24(1):63-64.

[3]陳世新.地中海貧血與婚前保健[J].中國婦幼保健,2010,25;1921-1922.

[4]杜 娟.16443例地中海貧血結果分析與研究 [J].中國婦幼保健,2008，23(32):4435-4436.

[5]黃 凌.917例血紅蛋白電泳檢查結果分析 [J].實驗與檢驗醫學,2009,27(3):226-227.