NK細胞比例增高的初治肝癌患者群體存在價值分析

趙玉梅，張金嶺，王守峰

(1.山東大學附屬臨沂市人民醫(yī)院腫瘤二科，山東臨沂276000; 2.山東大學附屬臨沂市人民醫(yī)院藥學部，山東臨沂276000)

NK細胞比例增高的初治肝癌患者群體存在價值分析

趙玉梅1，2，張金嶺1，王守峰1

(1.山東大學附屬臨沂市人民醫(yī)院腫瘤二科，山東臨沂276000; 2.山東大學附屬臨沂市人民醫(yī)院藥學部，山東臨沂276000)

目的 探討NK細胞比例增高的初治肝癌患者群體存在的意義。方法 采用流式細胞術(shù)分析初次治療的45例肝癌患者NK細胞和CD4+T/CD8+T的比例。結(jié)果 45例中38例NK細胞比例(5.72%)和CD4+T/CD8+T的比例(0.60)顯著低于正常人水平(13.18%和0.70)，7例NK細胞比例(28.78%)和CD4+T/CD8+T的比例(2.00)顯著高于正常人水平(P＜0.05)。結(jié)論 NK細胞比例增高的初治肝癌患者群體是確實存在的，其原因可能是處于疾病的早期，免疫系統(tǒng)正處于清除腫瘤細胞階段。

肝癌;NK細胞;流式細胞術(shù)

NK細胞構(gòu)成了機體抗腫瘤的第一道防線，其活性與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預后關(guān)系極大。肝癌患者外周血NK細胞的比例報道不一，多數(shù)監(jiān)測結(jié)果顯示肝癌患者NK細胞的比例低于正常人群［1］，但是在我們臨床工作中發(fā)現(xiàn)，少數(shù)初次治療的肝癌患者NK細胞比例遠遠高出正常界限，并且這些肝癌患者在治療過程中有相對較好的療效，作者應用流式細胞術(shù)檢測了45例肝癌患者的NK細胞比例和CD4+T/CD8+T的比例，探討NK細胞比例增高的肝癌患者群體存在的依據(jù)以及在肝癌診治中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2008年11月至2009年3月經(jīng)肝穿刺細胞學檢查確診為肝癌的初次住院患者45例(肝癌組)，健康體檢者30例(對照組)。肝癌組45例，男性26例，女性19例;年齡39～70歲，中位年齡55歲;均無明顯癥狀和典型體征。對照組30例:男性16例，女性14例;年齡42～67歲，中位年齡52歲;無癥狀和體征，肝功能正常。

1.2 主要儀器和試劑 鼠抗人CD34-PECY5/CD3-FITC/CD56-PE三色標記、CD3-PE/CD4-FITC/CD8-PECY5三色標記和同型對照鼠抗人IgG1-PC5/IgG1-FITC/IgG-PE均購自法國Immunotech公司，EPICSXL型流式細胞儀為美國Beckman-Coulter公司產(chǎn)品。

1.3 方法 抽取靜脈血1 mL于EDTA-K3抗凝管中，充分搖勻 。在測定管中加入 CD34-PECY5/CD3-FITC/CD56-PE和 CD3-PE/CD4-FITC/CD8-PECY5各20 μL，待測全血標本100 μL，調(diào)節(jié)細胞濃度1×106L－1。對照管中加入鼠抗人 IgG1-ECY5/IgG1-FITC/ IgG1-PE 20 μL，設(shè)鼠抗人同型對照，混勻后室溫避光反應20 min，以Q-Prep儀溶血后，上機檢測。

1.4 檢測 FCM激光為冷亞激光，波長488 nm，采用flow-check調(diào)整光路，用同型對照調(diào)電壓，以SSC橫座標，F(xiàn)SC為縱座標，構(gòu)建散點圖，在散點圖上采用設(shè)門技術(shù)分析標本中NK細胞比例及CD4+T/CD8+T的比例。每份標本計數(shù)2×104個細胞。

1.5 結(jié)果判定 正常NK細胞比例的范圍為4.80%～10.10%，其比例超過10.10%為增高，大于20.20%為明顯增高;其比例低于4.80%為減低。

1.6 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料以±s表示，比較采用t檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 肝癌組與正常對照組的NK細胞百分率比較肝癌組A代表高NK細胞組，肝癌組B代表低NK細胞組;對照組為健康體檢者。肝癌組A與肝癌組B和對照組的NK細胞水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 肝癌組與對照組NK細胞比較

2.2 肝癌組與對照組外周血中NK細胞百分率檢測的結(jié)果 橫坐標為CD3陰性的細胞亞群，縱坐標為CD56陽性的細胞亞群，CD3陰性、同時CD56陽性的細胞亞群為NK細胞亞群，見圖1。

圖1 肝癌組與對照組外周血中NK細胞百分率的檢測

3 討論

NK細胞在抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要的作用［1］。但是在腫瘤免疫中，患者往往存在著低免疫狀態(tài)。其可能的機制:腫瘤細胞不但可以直接或者通過分泌可溶性配體的形式間接引起NK細胞表面活化性受體的下調(diào)，進而影響NK細胞的活化程度［2－5］。肝癌患者體內(nèi)NK細胞的表達水平是正常偏低或者低于正常的［6］。但是在我們的臨床研究中發(fā)現(xiàn)了肝癌A組患者NK細胞的表達水平是明顯高于正常的，達到近30%左右，并且排除了實驗技術(shù)誤差。在臨床療效觀察中肝癌A組患者治療過程中整體療效和生存時間均好于或長于肝癌B組患者。而且在肝癌A組患者中，接受化療和介入治療后有不同的療效(接受介入治療4例，接受化療3例)，其中接受介入治療的患者療效相對更好。并且相對于接受化療治療患者，接受介入治療的患者NK細胞的水平治療前后一直明顯高于正常，少數(shù)初治肝癌患者NK細胞的表達水平高于正常，這一少見群體是客觀存在的。

用腫瘤免疫編輯學說來解釋此現(xiàn)象［7－8］:該學說認為在腫瘤的發(fā)展過程中，機體免疫系統(tǒng)和腫瘤細胞之間存在著相互影響:免疫系統(tǒng)重塑了腫瘤細胞的免疫原性，腫瘤細胞則影響了免疫系統(tǒng)的功能。在腫瘤發(fā)生發(fā)展的整個過程中免疫系統(tǒng)發(fā)揮著雙重作用:不斷的消滅腫瘤細胞，同時也在和腫瘤細胞作斗爭的過程中篩選出了低免疫原性腫瘤細胞亞克隆，使其成為腫瘤進展的根源。該學說將免疫系統(tǒng)和腫瘤細胞之間的相互作用分為3個階段［9］:免疫系統(tǒng)清除腫瘤細胞階段、雙方對峙階段、腫瘤細胞逃逸免疫系統(tǒng)攻擊階段。應用腫瘤免疫編輯學說來分析我們監(jiān)測到的高NK比例肝癌患者群體，也許此時患者的免疫系統(tǒng)正處于清除腫瘤細胞階段。因為我們觀測到伴隨高NK細胞比例的初治肝癌患者CD4+T/CD8+T比例也較高，CD4細胞亞群為抗原提呈T細胞為主體的淋巴細胞亞群，CD8細胞亞群為細胞毒性T細胞為主體的淋巴細胞亞群，兩者比例升高提示免疫系統(tǒng)有較活躍的增殖和分化活性，CD4+T/CD8+T比例增高從側(cè)面提示了免疫系統(tǒng)可能正處于清除腫瘤細胞階段［9－10］。

從臨床療效方面我們也觀測到伴隨高NK細胞比例的初治肝癌患者整體生存周期較長、黃疸和腹水出現(xiàn)時間較晚、接受介入治療的療效好于接受化療的療效等現(xiàn)象，證實NK細胞比例增高的初治肝癌患者群體是確實存在的，提示我們采用新的視角和觀點來看待這群相對特殊的肝癌患者診療方案的選擇和增加對腫瘤與免疫系統(tǒng)關(guān)系的理解，為提高肝癌患者治療療效和延長肝癌患者生存時間提供幫助。

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R735.7

B

1673－5412(2011)03－0242－02

趙玉梅(1963－)，女，主管藥師，主要從事腫瘤藥學研究。

張金嶺(1980－)，男，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤細胞免疫學研究。E-mail:jl_zhang@yahoo.cn

2011－03－21)