T淋巴細胞亞群及細胞因子檢測在結核病診治中的應用

薛祖洪,劉燦均,周明先,陶 嵐

(江蘇省靖江市人民醫院,江蘇靖江,214500)

結核病(Tuberculosis,TB)已成為威脅全球公共健康的傳染病之一。近年來,結核病的發病率呈上升趨勢。然而,人類感染結核分枝菌后,僅有少數人發病,其中部分發病者呈隱性感染且能自愈[1],表明機體存在著有效的抗結核保護性免疫反應,這種反應主要是細胞免疫反應。為此,我們檢測了62例結核病患者外周血T淋巴細胞亞群和血清相關細胞因子水平,旨在探討其與結核病發病、發展、診治及轉歸之間的關系。

1 臨床資料

活動性結核組:選自我院門診或住院的結核病患者62例(男 35例,女27例)年齡16～65歲,平均38.5歲,其中原發性肺結核3例,血行播散性肺結核12例,繼發性肺結核33例,結核性胸膜炎9例,肺外結核5例。患者根據2008年衛生部發布的《中華人民共和國衛生行業標準》進行分類。所有肺結核患者均痰菌涂陽或結核分枝菌培養陽性;結核性胸膜炎和肺外結核依據患者病史,臨床癥狀及輔助檢查等綜合進行判斷。

結核病康復組:上述結核病患者經標準抗結核化療一年后,隨訪到38例病人,根據胸片吸收好轉、痰菌陰轉、癥狀改善、血沉正常等確定為治療康復者。

健康對照組 選自來我院健康體檢者25例(男13例,女 12例)年齡 18～ 63歲,平均 36.0歲,入選者肝功能、腎功能、胸片等所有檢查結果均正常,且近期無結核病接觸史。

方法:所有入選者空腹采靜脈血4 mL,分成二管,其中一管用肝素抗凝,用流式細胞術分別檢測結核病患者活動期和康復期及健康者外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+FoxP3+調節性T細胞(Treg)比例;另一管及時分離血清,貯存-80℃低溫冰箱,用ELISA法集中檢測血清中干擾素-γ(IFN-γ)、可溶性白細胞介素 2受體(sIL-2R)、白細胞介素4(IL-4)水平,試劑盒購自法國DIACLONE公司,用BIO-RAD 550型酶標儀測定,并與25例健康人作比較。

1.3 統計學處理

2 結 果

結核病患者活動期和康復期外周血T淋巴細胞亞群檢測結果見表1;結核病患者活動期和康復期血清相關細胞因子檢測結果見表2。

表1 結核病患者活動期和康復期外周血T淋巴細胞亞群檢測結果(±s)

表1 結核病患者活動期和康復期外周血T淋巴細胞亞群檢測結果(±s)

注:與健康對照組比較,＊P>0.05;與健康對照組比較,△P<0.01;與健康對照組比較,△△P<0.05。

組別 例數 CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+CD25+Foxp3+(%)活動性結核組 62 71.9±9.2＊ 36.5±10.6△△ 34.8±9.5△△ 2.63±1.52△結核病康復組 38 73.2±6.8＊ 38.9±9.2＊ 32.5±8.6＊ 2.16±1.33＊健康對照組 25 74.2±5.5 42.2±8.3＊ 29.7±6.1 1.71±0.68

表2 結核病患者活動期和康復期血清細胞因子檢測結果(±s)

表2 結核病患者活動期和康復期血清細胞因子檢測結果(±s)

注:與健康對照組比較,＊P>0.05;與健康對照組比較,△P<0.01;與健康對照組比較,△△P<0.05。

組別 例數 IFN-γ(ng/L) sIL-2R(U/mL) IL-4(ng/L)活動性結核組 62 10.12±4.95△△ 231±121△△ 1.36±1.02△結核病康復組 38 11.21±5.25＊ 259±95＊ 0.96±0.65＊健康對照組 25 12.66±3.98 296±89 0.75±0.46

3 討 論

結核分枝桿菌是一種胞內寄生菌,結核病是結核分枝桿菌在體內的一個慢性、持續的刺激過程,使機體表現為一種持續性的免疫應答。機體在抵抗結核分枝桿菌感染的過程中,細胞免疫應答發揮著重要作用,決定細胞免疫強弱的主要因素是血液中T淋巴細胞亞群比例及相關細胞因子的作用。Treg細胞是CD4+T細胞的亞群,許多研究表明,T reg細胞在預防自身免疫病方面起著重要作用并與多種腫瘤及慢性感染性疾病的免疫抑制有關[2-5]。本研究結果顯示,與健康對照組相比較,結核病患者在活動期外周血CD3+細胞比例無顯著差異(P>0.05);CD4+細胞比例顯著下降(P<0.05);CD8+細胞比例顯著增加(P<0.05);CD4+/CD8+比值顯著下降;CD4+CD25+FoxP3+調節性T細胞比例顯著增加(P<0.01);結核病患者康復期外周血淋巴細胞亞群比例與健康對照組無明顯差異。表明Treg細胞可能參與結核分枝桿菌感染后的免疫調節和免疫監視過程,并與結核病的發生、發展和活動有關。而外周血中 CD4+比例下降、CD8+比例升高、CD4+/CD8+比值下降可能是由于Treg細胞導致機體細胞免疫功能下降并紊亂,進而導致結核分枝菌在體內的慢性持續感染。經過抗結核化療后,如T淋巴細胞亞群比例恢復正常,則該患者康復快,預后好,而部分病例治療后,T淋巴細胞亞群比例不能恢復正常,則病程長,預后差,且有反復發作的可能。

本研究還對結核病患者相關細胞因子進行了測定,結果顯示,結核病患者在活動期IFN-γ、sIL-2R水平顯著下降,IL-4水平顯著上升,康復期基本恢復正常。有學者對活動性結核病人血漿中幾種標志物研究發現,未治療的肺結核病人Th1活性下降,Th2活性升高,而經抗結核治療后Th1活性升高,Th2活性下降[6],IFN-γ是一個由Th1細胞分泌的重要免疫調節因子,不僅具有直接抗病毒和抗細菌的活性,而且能調節免疫系統其它細胞的反應,IFN-γ還能激活巨噬細胞,增加它們對結核分枝菌的殺菌能力,在局部抗結核感染的防御機制中起重要作用[7]。結核菌進入巨噬細胞后,巨噬細胞產生IL-12和IL-18等細胞因子,促使Th0細胞轉化為 Th1細胞,產生IFN-γ和IL-2從而介導細胞免疫反應。sIL-2R在人類免疫應答和免疫調節中也起重要作用,sIL-2R由正常淋巴細胞通過刺激產生。本研究顯示,結核病患者活動期血清IFN-γ、sIL-2R水平比健康對照組顯著下降,治療康復后血清濃度趨于正常。表明結核病患者發病期可能存在IFN-γ分泌減少,IL-2分泌缺陷及IL-2受體表達缺陷。結核菌進入機體后,自然殺傷或肥大細胞可產生IL-4,并促進 Th0細胞轉化為Th2細胞,產生 IL-4等細胞因子,誘導B細胞增殖分化,從而介導體液免疫反應。Th2細胞的增高可下調Th1反應,抑制IFN-γ產生。因此不利于結核感染控制。

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[7] Aoe K.Hiraki A,Murakami T,et al.Diagnostic signtificance of interferon-γtuberculou pleural effusions[J].chest,2003,133(3):740.