慢性乙肝患者外周血CD4+T細胞蛋白表達及ACTA、TNF-α水平變化的臨床診斷意義

郭永全

(重慶市榮昌縣人民醫院,重慶榮昌,402460)

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的免疫相關性疾病,目前其確切發病機制不清。現代研究表明,HBV感染機體后并不直接對肝細胞造成損傷,是通過誘發機體免疫效應間接損傷肝細胞,同時乙肝病毒得以清除。這種免疫反應主要是通過CD4+T細胞的FasL和Bcl-2蛋白表達變化得以實現[1-2]。另外,慢性肝病絕大多數都有肝纖維化,其中25%～40%最終發展為肝硬化及肝癌,早期診斷及逆轉肝纖維化已成為慢性肝病防治研究中的一個重要課題[3-4]。本研究對128例慢性乙肝患者進行肝組織活檢、檢測其CD4+T細胞的FasL和Bcl-2蛋白表達變化,血清ACTA、TNF-α含量,分析其與肝纖維化的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

128例慢性乙型肝炎均為本院附屬醫院2004年1月～2009年12月間收治的患者(乙型肝炎組),平均年齡43.6(21～64)歲,其中男72例,女56例。根據診斷均符合2000年西安會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》診斷標準。慢性乙肝輕度41例,中度39例,重度 28例,乙肝肝硬化 20例。正常對照組35例,為我院體檢中心健康體檢者。

1.2 方法

所有樣本為清晨空腹采血5 mL,分成2管,其中1管肝素抗凝,以淋巴細胞分離液分離得淋巴細胞,溶血素溶解細胞,經T細胞分離富聚柱得純化的T細胞,然后用PBS洗滌并調整至1×106個/mL,分別加入FasLFITC/CD4-PE和Bcl-2-FITC/CD4-PE兩組單抗。另一管37℃水浴30 min,3 000 r/min離心10 min,吸取血清置-70℃凍存備檢。采用 ELISA法測定血清ACTA、TNF-α含量,試劑由美國Genzyme公司提供。肝組織病理選用美國Temno活檢針單操作法取肝組織送病檢,肝組織標本采用HE染色。

2 結 果

2.1 慢性乙肝患者CD4+T細胞蛋白表達情況及血清ACTA、TNF-α水平

FasL是表達于活化免疫細胞的膜分子,它與相應受體結合,通過Fas-FasL信號途徑可介導細胞凋亡[5],而Bcl-2是體內重要的抗凋亡蛋白分子,能阻斷凋亡信號傳遞的最后通路而抑制凋亡[6]。由表1可見,各期慢性乙型肝炎CD4+T細胞FasL與健康對照組相比差異有顯著性(P<0.05),而慢性乙型肝炎患者CD4+T細胞Bcl-2表達與健康對照組差異不具顯著性(P>0.05)。各組慢性乙肝患者血清ACTA、TNF-α含量在慢性乙肝輕度組即明顯升高,并隨著慢性乙肝的發展而呈逐漸增高趨勢,在慢性乙肝重度及肝硬化組達最高水平,各組與對照組比較差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。

表1 慢性乙肝患者CD4+T細胞蛋白表達情況及血清ACTA、TNF-α水平(±s)

表1 慢性乙肝患者CD4+T細胞蛋白表達情況及血清ACTA、TNF-α水平(±s)

與對照組比較,＊P<0.05,＊＊P<0.01。

組別 例數 FasL(%) Bcl-2(%) ACTA(mg/L) TNF-α(pg/mL)正常對照組 35 24.3±8.4 35.9±9.8 0.62±0.19 6.79±2.11乙型肝炎組 128輕度 41 31.5±10.6＊ 33.6±7.3 1.31±0.37＊ 11.38±1.57＊中度 39 34.7±13.1＊ 32.7±8.3 3.74±0.97＊ 81.49±7.64＊＊重度 28 39.4±13.8＊＊ 31.5±7.9 5.89±1.17＊＊ 104.73±10.58＊＊肝硬化 20 46.3±12.7＊＊ 28.1±8.3 9.78±2.16＊＊ 186.51±24.76＊＊

2.2 肝組織病理分期與CD4+T細胞蛋白表達及血清ACTA、TNF-α含量的關系

肝組織病理纖維化分期與CD4+T細胞蛋白表達及血清ACTA、TNF-α含量的關系見表2。各期慢性乙型肝炎CD4+T細胞FasL和Bcl-2表達與SI比較不是很明顯,僅見S4期(P<0.05)。血清ACTA、TNF-α含量從S1到 S4有不同程度升高,其含量在S4達到最高水平,差異有顯著統計學意義(P<0.01)。

表2 肝組織病理分期與CD4+T細胞蛋白表達及血清ACTA、TNF-α含量的關系(±s)

表2 肝組織病理分期與CD4+T細胞蛋白表達及血清ACTA、TNF-α含量的關系(±s)

與 S1期比較,＊P<0.05,＊＊P<0.01。

分期 例數 FasL(%) Bcl-2(%) ACTA(mg/L) TNF-α(pg/mL)S1 27 32.4±10.8 35.7±6.9 1.24±0.47 12.58±1.49 S2 35 34.9±12.7 34.3±7.3 3.58±0.79＊ 82.84±8.18＊S3 41 38.6±14.9 32.6±7.6 6.13±1.07＊ 119.65±10.78＊＊S4 25 45.3±12.4＊ 28.1±8.3＊ 9.62±2.16＊＊ 174.55±23.46＊＊

3 討 論

慢性乙型肝炎是臨床常見病,目前認為其與宿主機體免疫狀態特別是細胞免疫功能失調密切相關[7]。現有研究表明,慢性乙肝患者外周血CD4+T細胞絕對數和相對數(CD4+/CD8+)都明顯降低[8]。這意味著慢性乙肝患者細胞免疫缺陷,而CD4+T數量和質量的異常是導致免疫缺陷的原因之一,它在慢性乙型肝炎進展中起重要的作用。本研究結果顯示慢性乙肝患者CD4+T細胞表面FasL的表達與健康人群組存在顯著性差異(P<0.05),尤其是重度乙肝患者和肝硬化患者,其陽性率達46.3%,而健康人群的陽性率為24.3%,差異非常顯著(P<0.01)。其表達情況呈有急性肝炎、慢性肝炎輕度、慢性肝炎中度、慢性肝炎重度、肝硬化的趨勢;而Bcl-2在慢性乙肝患者與健康人群表達差異不是很顯著。根據FasL主要表達于活化細胞表面和CD4+T細胞的生理功能,外周血CD4+T細胞表面FasL表達量和細胞數量聯合檢測可能有如下幾點臨床意義:①細胞數量正常,FasL表達量上升表明機體針對乙肝病毒免疫力增強,病情較輕。②細胞數量下降而FasL表達量增加,表明機體免疫系統在對乙肝病毒實行細胞免疫同時,引起自身凋亡,導致效應細胞數量減少。③細胞數量和FasL表達量均下降,說明效應細胞數減少且細胞免疫功能低下,病情有可能惡化[3]。本研究結果表明,其FasL表達隨病癥的嚴重程度呈增高趨勢,故顯示機體免疫系統正在進行免疫調節。

ACTA 屬于轉化生長因子-β(TGF-β)超家族,是由2個亞單位(βAβB)組成的二聚體糖蛋白,根據亞單位組成的不同分為 ACTA(βAβA)、ACTB(βBβB)、ACTAB(βAβB), 其中以 ACTA 最為重要[9]。近年來研究表明,ACTA在慢性肝炎、肝纖維化及肝功能衰竭等疾病發生發展過程中均有ACT A異常表達,ACT A具有抑制肝細胞生長、誘導其發生調亡,同時促進HSC分泌膠原等作用[10]。肝纖維化、肝硬變時ACTA表達增高,ACTA可能通過抑制肝實質細胞增生,促進間質細胞分泌ECM而參與肝纖維化、肝硬化的形成。本研究同時比較肝組織在不同肝纖維化分期血清ACTA 、TNF-α含量,結果顯示 :血清 ACTA 、TNF-α水平隨肝組織纖維化程度加重而升高,在S4處于最高水平,說明ACTA、TNF-α水平與肝纖維化程度相關,這恰好與多數文獻報道相一致[11-13]。TNF-α最早被認為是單核巨噬細胞產生的炎性細胞因子,因與腫瘤患者消瘦密切有關,以前曾被作為惡液質(cachexia)因子,TNF-α通過其胞膜受體TNF-α RⅠ和TNF-α RⅡ發揮其生物學效應。既往大量臨床和實驗研究表明,肝炎等肝臟疾病患者肝內有大量TNF-α產生并參與肝損傷的病理發生發展,與肝炎和肝硬化及肝癌發生發展密切相關[11]。

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