HPLC法測定加味香連丸中芍藥苷的含量

徐 力

（長春中醫藥大學附屬醫院，吉林 長春 130021）

HPLC法測定加味香連丸中芍藥苷的含量

徐 力

（長春中醫藥大學附屬醫院，吉林 長春 130021）

目的建立加味香連丸中芍藥苷的含量測定方法，用于加味香連丸質量標準的研究。方法本實驗采用HPLC法測定芍藥苷含量，使用C18色譜柱，甲醇∶水∶冰醋酸（25∶75∶0.1）為流動相，檢測波長為230nm。結果芍藥苷在0.42～2.1μg與峰面積呈良好的線性關系（r=0.9999，n=5），平均回收率為98.92%（RSD為1.56%，n=6）。結論該法簡便、快速、穩定、可靠，可用于測定加味香連丸中芍藥苷的含量。

加味香連丸；芍藥苷；HPLC法

加味香連丸由木香、黃連、黃芩、黃柏、白芍、當歸等藥物組成，本品祛濕清熱，化滯止痢，主要用于慢性結腸炎、潰瘍性結腸炎、產后痢疾等[1]。其中白芍為其主要成分，但其質量標準中未收載白芍含量的測定方法，且未見采用HPLC法測定加味香連丸中芍藥苷含量的相關文獻報道。為能更好的控制其質量，本文采用HPLC法對加味香連丸中芍藥苷進行含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；METTLER–AE240型電子分析天平（瑞士METTLER公司），KQ-250B型超聲清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）等。

1.2 試劑

芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110529-200531）；水為蒸餾水；甲醇為色譜純（美國Fisher公司）；加味香連丸（規格：6g/100丸）。其他試劑均為分析純。

1.3 方法

色譜條件 Agilent-C18（5μm，4.6mm×250mm）；甲醇∶水∶冰醋酸（25∶75∶0.1）為流動相；檢測波長為230nm；流速1mL/min，柱溫40℃[1]。

1.3.1 對照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷對照品，加稀乙醇溶解，制成每1mL含0.2mg芍藥苷的對照品溶液。

1.3.2 供試品溶液的制備

精密稱取本品25g，研細，置250mL容量瓶中，加稀乙醇200mL溶解，超聲提取30min，放冷后加稀乙醇定容至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜過濾，所得續濾液即為供試品溶液。

1.3.3 含量測定方法

精密吸取對照品與樣品溶液各20μL，注入高效液相色譜儀中，測定峰面積，用外標法計算芍藥苷含量。

2 方法學考察

2.1 標準曲線的繪制[2]

精密量取對照品溶液（0.5mg/mL）1、2、3、4、5mL分別置10mL容量瓶中，用稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取上述溶液各20μL，注入高效液相色譜儀中，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：y=16598.35x + 68.356（r=0.9999），含量在0.42～2.1μg間呈良好的線性關系。

2.2 精密度試驗

精密吸取對照品溶液20μL注入液相色譜儀中，重復進樣6次，記錄峰面積，計算峰面積的RSD=0.187%，表明精密度良好。

2.3 穩定性試驗

取同一批次的加味香連丸供試品溶液，分別于配制后0、2、4、8、12、16、20h按上述方法測定峰面積，結果表明樣品在20h內穩定性良好。

2.4 重復性試驗

取同一批次的加味香連丸，分別精密稱取6份，按1.3.2項下供試品制備方法制備，精密吸取上述溶液各20μL，注入高效液相色譜儀中，計算峰面積RSD=0.478%，說明重復性良好

2.5 回收率試驗

精密稱取同一批號的樣品6份，每份5g，研細，同時加入芍藥苷對照品4.00mg，置50mL容量瓶中，加稀乙醇40mL，超聲提取30min，放冷后加稀乙醇至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜過濾，精密吸取續濾液20μL，注入高效液相色譜儀中，測定，即得。計算芍藥苷平均回收率為98.92%，相對標準偏差RSD=1.56%（n=6）。結果見表1。

2.6 樣品測定

取加味香連丸3批，按“1.3.2”項下方法平行制備3份供試品溶液，測定含量，見表2。

3 討 論

表1 回收率試驗（n=6）

表2 加味香連丸中芍藥苷的含量（mg/25g）

芍藥苷對照品與加味香連丸樣品在230nm處均有特征吸收，同時按照同樣方法制備空白樣品溶液，在200～600nm的波長范圍內掃描，結果顯示在230nm處無吸收，因此空白樣品溶液不干擾芍藥苷的含量的測定，故選擇230nm作為芍藥苷的檢測波長。

同時參照藥典對流動相進行了篩選，分別考察了乙腈∶水∶冰醋酸、甲醇∶水∶冰醋酸、乙腈∶水∶磷酸與甲醇∶水∶磷酸等系統，通過結果對比，并考慮到經濟條件，最終選擇價位相對低廉的甲醇作為流動相。同時冰醋酸和磷酸對于芍藥苷的分離效果基本相同，考慮到色譜柱的使用壽命最終選擇冰醋酸為流動相。

加味香連丸的原標準中無芍藥苷的含量測定，因此無法更精準的控制該品種的質量。經多次測定，加味香連丸中芍藥苷的含量限度為不低于21mg/25g。通過上述方法學考察，建立了加味香連丸中芍藥苷的含量測定方法，使其質量標準更趨嚴謹科學完整，并且該方法簡便快捷，結果準確，重現性、回收率好，能有效控制加味香連丸的質量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (一部) [S].北京:中國醫藥科技出版社,2010.

[2]張建中,呂遷洲.HPLC測定抗敏Ⅱ號中連翹苷、芍藥苷的含量[J].中成藥,2003,25(9):723-725.

Determination of Paeoniflorin in Jiawei Xianglian Pills by HPLC

XU Li
(Affi liated Hospital of ChangChun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130021 China)

ObjectiveA method of determination of paeoniflorin in jiawei xianglian pills, to s tudy on quality standard for jiawei xianglian pills.MethodsPaeoniflorin was determined by HPLC, and use of C18column, Methanol∶Water∶Acetic acid (25∶75∶0.1) as mobile phase, detection wavelength 230nm.ResultsIn the 0.42 ～ 2.1μg paeonifl orin peak area was a good linear relationship (r=0.9999, n=5), the average recovery was 97.91% (RSD was 1.56%, n=6).ConclusionThe method is simple, fast, stable, and reliable and can be used to determine the increase in jiawei xianglian pills paeonifl orin.

Jiawei xianglian pills; Paeonifl orin; HPLC

R282.710.3

B

1671-8194（2011）03-0013-02