ELISA檢測(cè)HBsAg影響因素的分析

韓文明 黃 燕

（1 中國(guó)航天科技集團(tuán)公司七三八療養(yǎng)院醫(yī)療部檢驗(yàn)科，江蘇 無(wú)錫 214081；

2 無(wú)錫市南長(zhǎng)區(qū)南禪寺街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗(yàn)科，江蘇 無(wú)錫 214007）

ELISA檢測(cè)HBsAg影響因素的分析

韓文明 黃 燕

（1 中國(guó)航天科技集團(tuán)公司七三八療養(yǎng)院醫(yī)療部檢驗(yàn)科，江蘇 無(wú)錫 214081；

2 無(wú)錫市南長(zhǎng)區(qū)南禪寺街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗(yàn)科，江蘇 無(wú)錫 214007）

ELISA；HBsAg；影響因素

ELISA即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。Engvall和Perlmann于1971年最先應(yīng)用該法進(jìn)行了IgG定量測(cè)定，并命名為“enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）。由于ELISA方法靈敏，特異性強(qiáng)不需要特殊設(shè)備，所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定[1]。本文以ELISA方法檢測(cè)HBsAg為例，從邊緣效應(yīng)、外源物質(zhì)（如溶血、EDTA、肝素等）的干擾和內(nèi)源物質(zhì)（包括乳糜血清、RF、AFP、補(bǔ)體、自身抗體等）的干擾方面探討ELISA的影響因素。

1 材料與方法

1.1 材料

HBsAg ELISA試劑盒由上海華泰生物工程實(shí)業(yè)有限公司提供，批號(hào)：201006011；HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品由衛(wèi)生部臨檢中心提供，批號(hào)1011。檢測(cè)儀器使用BioTek-ELX800酶標(biāo)儀、BioTek-ELX50洗板機(jī)。

1.2 方法

參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》ELISA雙抗夾心法，按試劑盒說(shuō)明書操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，各組A值的比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 邊緣效應(yīng)

以2μg/LHBsAg標(biāo)準(zhǔn)品作樣品，采用37℃水浴1h，37℃孵箱1h兩種不同溫育法，檢測(cè)HBsAg，讀取吸光度A值。將周圍孔（96孔板周邊38孔）和中央孔的A值分組t檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 邊緣效應(yīng)的比較

2.2 外源物質(zhì)的干擾

2.2.1 溶血的影響

取HBsAg強(qiáng)陽(yáng)性樣品，分離血清350μL（不溶血）用干凈竹簽人為破壞RBC，制備溶血血清（Hb240g/L），分離350μL，同時(shí)檢測(cè)HBsAg，測(cè)吸光度值（A），將兩組A值作t檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.2 分離EDTA、肝素抗凝的正常人血漿和5μg/LHBsAg標(biāo)準(zhǔn)品1∶1稀釋，再用5μg/L HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品和相應(yīng)未抗凝血清1∶1稀釋作對(duì)照。檢測(cè)HBsAg，測(cè)吸光度值（A），兩組A值作配對(duì)t檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 內(nèi)源物質(zhì)的干擾

3 討 論

從表2可見(jiàn)，溶血和非溶血、EDTA抗凝和非抗凝兩組樣品A值無(wú)顯著性差異，肝素抗凝的樣本則有顯著性差異。

從表3可見(jiàn)，乳糜血清對(duì)檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有影響。AFP、補(bǔ)體、RF、自身抗體陽(yáng)性標(biāo)本的A值明顯高于對(duì)照組，有顯著性差異，既具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是AFP、RF、補(bǔ)體和某些自身抗體（如抗ENA抗體、ANA及抗ds-DNA抗體等）能夠與固相一抗，標(biāo)記二抗Fc結(jié)合或影響它們的結(jié)合而造成假陽(yáng)性[3,4]。

[1]宋炳榮,杜彩霞,崔娜等.ELISA一步法檢測(cè)乙型肝炎病毒標(biāo)志物影響因素的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2004,9(11):65.

[2]徐志峰,李惠,王淑艷等.ELISA檢測(cè)影響因素分析[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志,2001,1(4):584.

[3]Fernando SA,Wilson GS.Studies of the “hook” effect in the one-step sandwich immunoassay[J].J Immune Meth,1992,151(1/2):47.

[4]Boscato LM,Stuart MC.Incidence and specificity of interfere

R512.6+2

B

1671-8194（2011）04-0047-02

表3 內(nèi)源物質(zhì)對(duì)吸光度（A）的干擾

表2 外源物質(zhì)對(duì)吸光度（A）的干擾