風濕免疫性疾病患者血清骨橋蛋白的檢測及意義

【關鍵詞】骨橋蛋白;系統性紅斑狼瘡;類風濕關節炎

【中圖分類號】R392.7【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)16-066-2

骨橋蛋白(Osteopntin，OPN)是一種由多種細胞分泌的細胞外基質磷酸化糖蛋白，參與多種生物學過程，包括細胞的趨化、聚集、粘附、增殖和遷移、免疫調節和信號傳導等。OPN被認為是一種與炎癥過程有關的促炎細胞因子，在Th1細胞的表達是Th2細胞的19倍，因此在系統性紅斑狼瘡(SLE)等自身免疫性疾病的發展中也發揮了重要作用。我們檢測了SLE和類風濕性關節炎(RA)患者血清中的骨橋蛋白水平，以探討其臨床意義。

1資料與方法

1.1研究對象2007年10月至2008年12月我院住院或門診隨訪的風濕性疾病患者109例，男38例，女71例，年齡12～73歲。其中SLE62例，RA47例，臨床診斷參照美國風濕協會1997年修訂的SLE分類診斷標準[1]和1987年RA分類診斷標準[2]。根據SLE疾病活動指數(DAI)，SLE患者中活動期(≥10分)34例，非活動組(<10分)28例;有臟器損害者33例(腎臟損害以持續性蛋白尿，尿蛋白定量>0.5g/24h，伴或不伴血清肌酐升高為準;肺間質病變以肺CT為準;心包炎以心臟彩超為準，胃腸道病變以胃腸CT或彩超為準)，無臟器損害者29例。正常對照組42例為健康體檢者，男15例，女27例，年齡17～55歲。兩組均于清晨采取空腹靜脈血3ml，離心分離血清置-20℃凍存待檢。

1.2檢測方法血清OPN水平檢測采用ELISA法進行，試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司，操作嚴格按說明書進行。大致步驟是:取出已包被抗人OPN單抗的酶標板，設置標準孔和待檢血清孔，分別加入不同的標準品和待測血清100μl，放置37℃水浴箱中孵育120min，洗板5次后，每孔加入生物素化的抗人OPN抗體工作液100μl，放置37℃水浴箱中孵育60min，洗板后每孔加親和素化辣根過氧化物酶結合物100μl，37℃水浴箱中孵育60min，洗板后每孔加100μl顯色劑TMB顯色15min，終止反應并用酶標儀在450nm處讀取各孔OD值，建立標準曲線，計算待測血清的OPN含量。

1.3統計學處理測定數據±s以表示，兩組間比較用t檢驗，率的比較用χ2檢驗，采用SPSS10.0軟件計算。

2結果

2.1病例組與正常對照組血清OPN陽性率如表1所示，病例組血清OPN陽性率為71.56%(79/109)，其中SLE中OPN陽性率為79.03%(49/62)，RA中OPN陽性率為63.83%(30/47)。對照組OPN均為陰性。病例組與對照組的陽性率比較，差異具有顯著性(P<0.05)。

表1 SLE和RA患者血清OPN檢測結果

組別n陽性數陽性率(%)±s(ng/ml)

病例組1097971.565.01±1.92

SLE624979.035.81±2.22

RA473063.833.01±1.92

對照組4202.01±0.95

2.2病例組與正常對照組血清OPN水平如表1所示，病例組OPN水平為5.01±1.92ng/ml，其中SLE患者血清OPN為5.81±2.22ng/ml，RA患者OPN為3.01±1.92ng/ml，均明顯高于正常對照組的2.01±0.95ng/ml，差異具有顯著性(P<0.05)。

表2 SLE患者OPN水平與臨床資料的關系

組別nOPN(ng/ml)

活動期346.51±2.37

非活動期285.23±1.99

有臟器損害336.81±2.96

無臟器損害295.01±1.82

2.3OPN水平與臨床資料的關系將OPN與DAI積分、24h尿蛋白定量進行相關性分析，發現血清OPN水平與SLE的DAI積分和24h尿蛋白定量均呈正相關均為P<0.01，結果見表2。

3討論

OPN在自身免疫及其它炎癥過程中作為一種潛在的促炎癥細胞因子起作用，且能促進Th1免疫反應而抑制Th2免疫反應。多種自身免疫性疾病，特別是SLE疾病的活動與Th1/Th2的比率有關。Th1細胞因子水平升高可介導炎癥反應，導致不可逆的器官損害。SLE和RA是與大量免疫復合物和自身抗體存在有關的復雜的自身免疫性疾病，在其病理損害中可見大量淋巴細胞、單核細胞和巨噬細胞的浸潤。雖然OPN對SLE和RA以及其它一些自身免疫性疾病診斷的特異性如何的相關文獻報道并不多，但是Ohshima等[3]分別比較了OPN在RA和骨關節炎(OA)患者及正常對照組的滑膜細胞、滑膜液、血漿中的水平，發現在滑膜細胞和滑膜液中RA患者的OPN水平明顯高于OA患者，且與血漿C反應蛋白水平相關，但三組的血漿OPN水平無顯著差異，表示OPN在類風濕關節中呈局灶性表達增加，而在血漿中OPN的表達不增加，提示血清OPN對SLE的診斷有一定價值。本文研究發現，SLE和RA的患者的OPN陽性率和血清水平均高于正常對照組，SLE患者的OPN的陽性率和血清水平也高于RA患者。結果提示，OPN作為一種與炎癥過程有關的促炎癥細胞因子，在自身免疫性疾病的發病過程中可能起一定的作用。

李龍等[4]研究發現狼瘡性腎炎(LN)患者腎小管上皮細胞OPN表達明顯增高，并與腎間質巨噬細胞浸潤數、浸潤部位及腎間質病變明顯相關，提示OPN在導致LN腎間質損害中起重要作用，從而推斷血清OPN水平可能在一定程度上反映了SLE患者有無腎臟損害，提示血清OPN對SLE腎臟損害的診斷和監測上可能有一定的價值。其它文獻也報道了OPN與SLE的腎臟損害、活動程度及疾病進展情況有一定的相關性[4-6]。本文結果顯示，SLE患者血清OPN水平與患者DAI積分及24h尿蛋白定量等呈明顯的正相關性，提示血清OPN水平不僅與蛋白尿有關，而且能反映蛋白尿的程度，也能在一定程度上間接反映腎臟損害的程度，證實血清OPN與SLE的活動度及臟器損害有關。

由于許多自身免疫性疾病的發病機制復雜，病因未明，病情反復，可能有多種細胞因子或其它成分參與。OPN與SLE等疾病的關系如何，OPN的診斷意義如何，都需要進一步深入研究。

參考文獻

[1] Hochberg MC.Updating the American college of rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus reythemrmatosus.Arthritis Rheum，1997，40(9):1725.

[2] Arnett FC，Edworthy SM，Bloch DA，et al.The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritisArthritis Rheum.1988，31(3):315-24.

[3] Ohshima S，Yamaguchi N，Nishioka K，et al.Enhanced local production of osteopontin in rheumatoid joints#8239;J Rheumatol.2002，29(10):2061-7.

[4] 龔穎，鐘清，譙林.系統性紅斑狼瘡患者血清骨橋蛋白表達的變化及臨床意義[J].重慶醫科大學學報，2008，35(11).

[5] 馬瑞霞，王祥花，劉雪梅.骨橋蛋白及白細胞介素-18在系統性紅斑狼瘡患者血漿中的表達及意義[J].中國中西醫結合腎病雜志，2008，9(2):622

-623.

[6] 樓波，呂晶，鄭敏.血漿骨橋蛋白水平與系統性紅斑狼瘡活動性的關系[J].中華皮膚科雜志，2006，39(6):320-321.