七腎湯對羥基脲腎虛大鼠生育力影響的實驗研究

【摘要】目的:觀察七腎湯對羥基脲腎虛大鼠生育力的影響。方法:用羥基脲造成雌、雄性生殖功能障礙大鼠模型，觀察七腎湯對雌性模型大鼠動情周期變化，卵巢、子宮重量;雄性模型大鼠睪丸、附睪重量，精子密度與活率。結果:七腎湯使雌性模型大鼠動情周期較正常大鼠數量增加，子宮重量明顯升高;使雄性模型大鼠睪丸、附睪重量、精子密度與活率明顯升高，與模型組相比有顯著性差異(P

【關鍵詞】七腎湯;生殖功能障礙;動物模型;實驗研究

【中圖分類號】R285.5【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)16-032-2

男女不育不孕病因很多，臨床上因腎精不足、腎氣虧虛導致的不育不孕尤為常見，七腎湯為溫州民間經典驗方，以補益腎氣、補腎生精為治療大法，臨床療效肯定[1]。為進一步探討該方的作用機理，本研究采用羥基脲致雌、雄性大鼠生殖功能障礙的模型來評價七腎湯對生育力的影響。

1材料與方法

1.1材料

3月齡SD(Sprague-Dawley)大鼠雄性、雌性各4O只，體重250±20g。購自溫州醫學院實驗動物中心。七腎湯由菜頭腎、紅葉對腎、白葉對腎、龍芽腎、荔枝腎、棉花腎、花麥腎組成，由溫州醫學院制劑室煎制，每mL含生藥2.34g。(提取工藝流程:藥材洗凈，第1次加10倍量水浸泡0.5h，提取2h，濾過;第2次加8倍量水提取2h，濾過，合并2次濾液，真空濃縮，真空度:0.08～0.085mPa;濃縮至1.5倍藥材體積時，高速離心，轉速15000r/min上清液濃縮至相對體積質量為1.18;噴霧干燥，參數為:溫度180℃，出風溫度90℃，流量500mL/min。最后得膏8.5kg，得膏率為25.9%(8.5/32.76)。大鼠每種藥物的用量根據大鼠用藥人鼠換算公式計算而得;羥基脲:濟南制藥廠產品，規格:0.5克/片。批號:20020。克羅米芬由上海衡山藥業有限公司生產，產品批號000401。

1.2方法

1.2.1分組及造模雄、雌性大鼠隨機各取1O只動物作為正常組，其余大鼠予羥基脲片500mg/kg/d灌胃，連續30d，造模成功后，分別將雌、雄動物隨機分為3組;模型組，克羅米芬組，七腎湯組。

1.2.2給藥方法正常組:以生理鹽水lmL/100g灌胃，1次/d，連續60d。模型組:造模結束后，以生理鹽水lmL/100g灌胃，1次/d，連續30d。克羅米芬組:造模結束后，用克羅米芬4.5mg/kg/d灌胃。雌性動物于每個動情周期的動情前期給藥，治療30d。雄性動物1次/d給藥，連續30d。七腎湯組:造模結束后，用七腎湯lmL/100g灌胃，1次/d，連續30d。

1.2.3雌性大鼠動情周期觀察[2]用生理鹽水浸潤的棉簽輕輕插入動物陰道內，稍轉一下后抽出，將取得的陰道分泌物涂在玻璃片上，用5%美藍溶液染色lOmin，用水輕輕洗去多余染色液，待干，用普通光學顯微鏡觀察脫落細胞，根據脫落細胞變化判定動情周期。

1.2.4雌性大鼠子宮指數及卵巢指數測定實驗結束時，各組大鼠稱體重，斷頸處死，立即摘取子宮、左側卵巢，用濾紙吸干，以分析天平稱其濕重，計算各組大鼠子宮、卵巢重量平均值及臟器指數。臟器指數=(臟器重÷體重)×100%。

1.2.5雄性大鼠睪丸重量、睪丸指數測定實驗結束時，各組大鼠稱體重，斷頸處死，立即摘取左側睪丸、附睪，用濾紙吸干，以分析天平稱其濕重，觀察睪丸、附睪狀態，計算各組大鼠睪丸、附睪重量平均值及臟器指數。

1.2.6雄性大鼠附睪精子數量、活率測定實驗結束時，各組大鼠斷頸處死，立即摘取右側附睪，置于2ml生理鹽水中，放置30min，并輕輕振蕩，再加入5ml生理鹽水稀釋，在血小球計數板上計算精子數，以×106/m1表示，在顯微鏡下觀察精子的活動，計算精子活動百分率。

1.3統計學處理

雌性大鼠動情周期數據用χ2檢驗進行統計分析，其余數據均以-x士s表示，用T檢驗進行統計分析。

2結果

2.1七腎湯對雌性大鼠動情周期的影響模型組大鼠動情周期缺失、不完整、延長(7～9d)，動情周期正常(4～5d)大鼠數量減少，與正常組比較有顯著性差異(P

表1 各組對雌性大鼠動情周期的影響(x±s)

組別n動情周期在4～5d的動物數

正常組1010

模型組104△

克羅米芬組107*

七腎湯組108*

與正常組比較△P

2.2七腎湯對雌性大鼠子宮指數及卵巢指數的影響

卵巢重量各組間無顯著性差異。模型組子宮重量明顯下降，與正常組比較有顯著性差異(P

(下轉第37頁)

(上接第32頁)

腎湯組子宮重量明顯增加，與模型組相比有極其顯著性差異(P<0.01)。見表2。

2.3七腎湯對雄性大鼠睪丸指數及附睪指數的影響

模型組睪丸、附睪較小且蒼白，表面晦暗無光澤，彈性差，睪丸與附睪系數均小于正常組，兩者比較有顯著性差異(P

2.4七腎湯對雄性大鼠附睪精子數量、活率的影響

模型組附睪精子數量、活率明顯低于正常組，與正常組相比有極其顯著性差異(P<0.01)，克羅米芬組附睪精子數量、活率低于正常組，與正常組相比有顯著性差異(P

表4 各組對雄性大鼠附睪精子數量、活率的影響(x±s)

組別n精子密度(×106/ml)精子活率(%)

正常組1065.07±12.7381.33±6.51

模型組107.06±3.22△△41.44±7.54△△

克羅米芬組1011.44±4.59△57.86±7.62△

七腎湯組1059.23±11.24**73.51±5.74**

3討論

實驗復制的雌性模型大鼠動情周期缺失、不完整、延長，子宮重量減輕;雄性模型大鼠睪丸、附睪重量減輕，精子密度與活率明顯低于正常組，與文獻報道一致。在性周期中，由于卵巢激素的周期性變化，大鼠可通過檢查陰道涂片的方法來觀察性周期中陰道上皮細胞的變化，以確定動物性周期活動的情況，性周期異常說明卵巢功能受損，生殖功能異常。子宮是孕育后代的器官，子宮的重量關系到孕育質量。實驗結果顯示，雌性模型大鼠動情周期缺失、不完整、延長，子宮重量減輕;七腎湯能使動情周期正常大鼠明顯增加、子宮重量明顯升高。

睪丸精曲小管的上皮是產生精子的部位，精曲小管約占睪丸總體積的9O%以上，睪丸精曲小管質量決定了睪丸的重量。附睪為暫時貯存精子的器官，其分泌的附睪液給精子提供營養，促進精子進一步成熟。因此，睪丸、附睪的重量可反映睪丸生精功能。而精液質量的檢測能直接反映雄性大鼠生育力。實驗結果顯示，雄性模型大鼠睪丸、附睪重量明顯減輕，精子密度與精子活率明顯低于正常組，七腎湯能明顯提高模型大鼠睪丸、附睪重量，提高精子密度與精子活率。

子宮通過沖脈隸屬于腎，由胞絡與腎相聯，因此子宮重量減輕為腎虛表現。腎氣盛則沖任通盛，血海如時滿溢，月事以時下，性周期正常。若腎氣不足，則沖任失養，血海不能按時滿溢，則影響胞宮的發育，性周期異常。實驗復制的大鼠生殖功能障礙模型，雌性大鼠動情周期缺失、不完整、延長，說明腎氣虧虛。精子屬中醫生殖之精的范疇，腎精是產生生殖之精的物質基礎，腎精的盛衰影響生殖之精的生成，腎精旺盛充沛，則生殖之精健全;腎精虛弱匱乏，生殖之精質量則差，實驗雄性模型大鼠精子數量減少則屬中醫腎精不足，精子活率降低則為腎精虛弱表現。睪丸為外腎，睪丸重量減輕為腎虛表現。因此，實驗復制的生殖功能障礙模型屬腎氣虧虛型。

從實驗結果來看，克羅米芬、七腎湯都能提高雌、雄性模型大鼠生育力，但七腎湯組療效優于克羅米芬組。七腎湯方用菜頭腎、紅葉對腎、白葉對腎、龍芽腎、荔枝腎、棉花腎、花麥腎等均有補腎健脾，通絡止痛之功，用于腎虛所致腰酸背痛、腰部扭傷、腰肌勞損、遺精盜汗、沖任不固等，方中滋補陰精，溫補陽氣，配伍應用，滋陰而不損陽，溫陽而不耗陰，相須為用，陰陽并補，共奏補腎生精之功。

參考文獻

[1] 張薔蓉.溫州民間補腎草藥和驗方七腎湯[J].中草藥，2008，39(6):954-955.

[2] 陳奇.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛生出版社，1994:83.