復發性流產與男性精液常規及動態的相關性研究

劉新 陳志云

復發性流產是指與同一性伴侶連續發生3次或3次以上自然流產，其中50%以上患者不存在染色體、解剖、內分泌、自身免疫異常和生殖道感染等常見病因，臨床上稱為原因不明復發性流產。在生育年齡的婦女中發生率為1% ～2%，且有逐年增加趨勢。過去25年間中國有生育力男性精液參數中精子密度和精子總數呈現下降［1］，精子質量下降是否增加流產率目前研究并不多見。本文對56例不明原因復發性流產患者丈夫精液常規檢查情況進行回顧性分析，試圖為復發流產的病因提供部分理論依據。現報告如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇本院門診就診的56例孕早期習慣性流產患者，孕齡＜12周，均為流產3次或3次以上者。患者排除存在染色體、解剖、內分泌、自身免疫異常和生殖道感染等常見病因。取56例患者丈夫精液為研究組，同時隨機取56例已育男性精液作為對照組。

1.2 實驗室指標評定標準 按照WH/《人類精液及精子－宮頸黏液相互作用實驗室檢驗手冊》中的標準評定。正常值:精液量2～6 ml，pH 值7.2～8.0，液化時間 ＜ 60 min，精子密度≥20×106/ml或更多，精子活率＞60%，精子活力a級≥25%或a級+b級≥50%，正常精子形態≥30%。在上述指標中，只要有一項異常時則判定精液質量異常。若各項指標均在參考值范圍內，則判定精液質量為正常。

2 研究方法

2.1 標本采集 禁欲4～7 d在取精室手淫法取精液于干燥經消毒的潔凈廣口杯內，置于37℃水浴箱內使之完全液化后轉移至刻度離心管內測量體積，37℃水浴中待檢。

2.2 操作方法 按WHO的操作方法，分析精液量液化時間、pH值、黏稠度以及精子形態等。精液完全液化后，先取一滴約10 μl精液滴在載玻片上，拉薄涂片，用改良巴氏染色法染色待檢。

2.3 精液動態分析 采用西班牙SCA－LIT彩色精子質量檢測儀對精子進行動態分析。按照《WH/人類精液及精子－宮頸黏液相互作用實驗檢驗手冊》的相關要求分析精液。

2.4 檢測指標 精液pH、精液量、總數、密度、液化時間、a+b級精子率、正常精子率。精液動態分析指標:直線速度(VSL)、曲線速度(VCL)、平均路徑速度(VAP)、直線性(LIN)、前向性(STR)、擺動性(WOB)、精子平均側擺幅(ALH)、平均移動角度(MAD)、精子平均鞭打頻率(BCF)。

2.5 質控方法 室內質控采用質控珠(QC-BesdsTM，Bioscreen Inc)進行每天密度質控，檢測人員每周進行隨機標本的質控(密度和活動力質控)。

2.6 統計學方法 按統計學要求處理各組參數，使用SPSS 13.0統計軟件進行統計分析，定量資料均以(±s)表示，定量資料組間比較采用t檢驗，定性資料組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 兩組精液的量、pH值、精子總數、a+b級比率及液化時間差異無統計學意義(P＞0.05)，在畸形率差異有統計學意義(P＜0.05)。研究組精液畸形率明顯高于對照組。見表1。

3.2 與對照組比較，研究組精液VCL、VSL、MAD、ALH、VAP、WOB無明顯統計學差異，BCF、LIN、STR有顯著性差異(P＜0.05)。見表2。

表1 兩組精液檢測結果比較

表2 兩組精液運動參數比較

4 討論

復發性流產的病因十分復雜，涉及遺傳、內分泌、解剖、感染和環境因素等多因素。目前研究大多數集中女性因素，既然由于胚胎染色體的一半是由男性提供，復發性流產也有可能是男性因素引起的。本研究對復發性流產丈夫精液與正常男性精液常規分析結果顯示:兩組精液的量、pH值、精子總數、a+b級比率、液化時間及正常精子形態百分率無明顯差異。與以往研究相似［2］。畸形精子指數兩組有明顯差異，畸形指數也稱多種異常指數(TZI)用缺陷總數除以畸形精子數目，數值介于1.00和3.00之間。是不育男性精液檢查的一個重要參數，有研究顯示TZI與精液常規中其他參數間無相關性［3］。畸形精子很難結合到卵透明帶上，當精液中正常形態精子百分率＜14%時，精子體外受精率顯著減少［4］。兩組正常精子百分率無明顯差異，畸形精子指數高是否作為一個影響自然妊娠的因素還有待于繼續研究。

Templado等［5］的研究表明，即使精子密度正常，畸形精子癥和弱精子癥男性的精子染色體異常顯著增高。吳大鵬等［6］觀察了58例復發性流產患者的丈夫和50例正常生育男性對照組，得出精子DNA完整性損傷可能是復發性流產的原因的結論。Carrell等［7］發現原因不明性復發性流產的精子較普通人群精子的非整倍性高，并且非整倍性的比率與精子凋亡的比率成正相關。Kahraman等［8］采用熒光原位雜交技術對接受卵胞漿內單精子注射(ICSI)治療的畸形精子癥的研究結果顯示，39%存在精子非整倍體，顯著地高于對照;同時在對121例前期輔助生殖技術失敗的回顧中，發現50%分裂期胚胎中發現有染色體異常，其中34%為復合性染色體缺陷。這些結果提示:導致自然流產及胎兒發育異常的染色體異常有可能來源于精子的染色體異常，從而導致妊娠失敗。畸形精子指數高與精子染色體異常是否有相關性還有待于繼續研究。

精子的動態參數是評估精液質量的重要指標，將其與精液常規分析相結合，可為男性生育能力評價提供有效的依據［9］。參數 VCL、VSL、VAP 反映了精子的運動速度，LIN、WOB、MAD、ALH、STR參數反映了精子運動的直線性和前向性。與對照組比較，研究組精液BCF(精子平均鞭打頻率)、LIN(直線性)、STR(前向性)、VSL(直線速度)、ALH(精子平均側擺幅)、WOB(擺動性)、VAP(平均路徑速度)均有明顯統計學差異，反映研究組精子的運動速度及前向性差。正常的受孕需要精子特征性的微細運動以穿透卵丘和透明帶，快速、直線、前向運動的精子是提高受孕概率的保證。精子的動態參數客觀地反映了精子微細運動特點，并與受精率顯著相關。一般一次射精后僅1%～6%精子可以進入宮腔，能到達輸卵管的精子更少，進入陰道的精子靠自身運動經子宮頸到達輸卵管與卵細胞結合，旅途長達17 cm，是精子自身長度的3000倍，因此成功受孕精子功能尤為重要。兩組精子動態分析差異是否與畸形精子指數高相關還需進一步證實。

［1］梁小薇，盧文紅，陳振文，等.過去25年中國有生育力男性精液參數變化的回顧性研究.中華男科學雜志，2008，14(9):775-778.

［2］岳煥勛，李福平，蔣敏，等.復發性流產及胎兒發育異常與男性畸形精子的相關性探討.實用婦產科雜志，2008，24(10):624-626.

［3］姜彥嘉，王奇玲，馬春杰，等.畸形精子指數和精子畸形指數與男性不育癥患者精子密度、活動率及精子形態的關系.廣東醫學，2006，27(2):231-233.

［4］MortimerD，MenkveldR.Sperm morphology assessment-historical perspectives and current opinions.Androl，2001，22(2):192-205.

［5］TempladoC，HoangT，GreeneC.Aneuploid spermatozoa in infertile men:teratozoospermia.Mol Reprod Dev，2002，61(2):200-204.

［6］吳大鵬，吳齊飛，李旭東.反復自然流產與精子DNA完整性的相關研究.現代泌尿外科雜志，2008，13(2):132-134.

［7］CarrellDT，W ilcoxAL，Lowy L.Elevated sperm aneuploidy and apoptosis in patientswith unexplained recurrent pregnancy loss.Obstet-Gyneco，2003，101:1229-1235.

［8］KahramanS，FindikliN，BiricikA.Preliminary FISH studies on spermatozoa and embryos in patientswith variable degrees of teratozoosper-mia and a history of poor prognosis.Reprod Biomed Online，2006，12(6):752-761.

［9］余玲玲，陳小劍，江明華，等.精子動態參數在精液質量分析中的應用.醫學研究雜志，2008，37(6):108-110.