國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口奧美拉唑腸溶膠囊在健康人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究

袁曉瓊，楊 輝，周遠(yuǎn)大

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，重慶 400016)

奧美拉唑(omeprazole)為苯并咪唑類化合物，能選擇性抑制胃壁細(xì)胞膜的H+-K+-ATP酶活性，對(duì)于基礎(chǔ)胃酸分泌和各種刺激引起的胃酸分泌具有強(qiáng)而持久的抑制作用，臨床主要用于治療胃潰瘍、十二指腸潰瘍、應(yīng)激性潰瘍、反流性食管炎和卓-艾綜合征(胃泌素瘤)等[1-2]。奧美拉唑在酸性條件下不穩(wěn)定，為避免其在胃中分解，故制成腸溶制劑。為評(píng)價(jià)國(guó)產(chǎn)制劑的質(zhì)量，筆者參照相關(guān)文獻(xiàn)建立了測(cè)定奧美拉唑血漿濃度的高效液相色譜法[3-5]，比較了國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口奧美拉唑腸溶膠囊在健康人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程。

1 儀器與試藥

Agilent1100系列高效液相色譜儀，Agilent1100泵系統(tǒng)，Agilent 1100可調(diào)波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和Agilent 1100工作站。受試制劑(T制劑)為重慶蕓峰藥業(yè)有限公司研制的奧美拉唑腸溶膠囊，規(guī)格為20 mg/粒，批號(hào)為050102，含量為100.4%;參比制劑(R制劑)為阿斯利康制藥有限公司生產(chǎn)的奧美拉唑腸溶膠囊(商品名洛賽克)，規(guī)格為20 mg/粒，批號(hào)為0502019;奧美拉唑?qū)φ掌?重慶市華鼎現(xiàn)代生物制藥有限責(zé)任公司);替硝唑(內(nèi)標(biāo)，中國(guó)藥品生物制品檢定所)。甲醇、乙腈為色譜純，磷酸二氫銨為分析純，所有試驗(yàn)用水均為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 血藥濃度測(cè)定

2.1.1 色譜條件

色譜柱:Phenomenex? C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);固定進(jìn)樣環(huán):100μL;流動(dòng)相:甲醇-0.1 mol/L乙酸胺緩沖液-二乙胺(62 ∶38 ∶0.5);流速:0.8 mL/min;紫外檢測(cè)波長(zhǎng):302 nm;柱溫:室溫。在此條件下，奧美拉唑與內(nèi)標(biāo)替硝唑及血漿中內(nèi)源性雜峰分離良好(圖 1)。

2.1.2 溶液配制

精密稱取奧美拉唑13.45 mg，用適量甲醇溶解后，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即得質(zhì)量濃度為538μg/mL的奧美拉唑標(biāo)準(zhǔn)貯備液。使用時(shí)以甲醇稀釋為53.8μg/mL的奧美拉唑標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密稱取替硝唑標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品29.3 mg，用適量甲醇溶解，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即得質(zhì)量濃度為586μg/mL的替硝唑標(biāo)準(zhǔn)貯備液。使用時(shí)以甲醇稀釋為3.516μg/mL的替硝唑標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.1.3 血漿樣品處理

取受試者血漿1.0mL，加入替硝唑標(biāo)準(zhǔn)溶液50μL和0.1mol/L氫氧化鈉適量，混勻，加4 mL乙醚，旋搖1 min，靜置，取乙醚層，于40℃水浴中用氮?dú)獯蹈桑?00μL流動(dòng)相復(fù)溶，進(jìn)樣分析。

2.1.4 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:在空白血漿中添加奧美拉唑使血藥濃度分別相當(dāng)于 4.8，4.0，1.0，0.25，0.062 5，0.015 6，0.003 9 μg/mL，按血漿樣品的處理與測(cè)定方法進(jìn)行處理和測(cè)定，所得數(shù)據(jù)經(jīng)回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 Y=7.924 6 X-0.082 90，r=0.999 93(n=7)。

回收率及精密度試驗(yàn):按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法，采用高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度，結(jié)果血漿中奧美拉唑含量的回收率見表1，日內(nèi)、日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)見表2，最低定量質(zhì)量濃度為0.003 9μg/mL，RSD=7.50%(n=5)。

表1 高效液相色譜法測(cè)定血漿中奧美拉唑含量的回收率(n=5)

表2 日內(nèi)和日間精密度測(cè)定結(jié)果(n=5)

穩(wěn)定性試驗(yàn):將奧美拉唑和替硝唑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液于室溫放置，0，5，10，24，48 h時(shí)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得奧美拉唑質(zhì)量濃度分別為0.14，0.14，0.14，0.15，0.13 μg/mL，平均(0.14 ±0.007 1)μg/mL，RSD=5.05%(n=5)，結(jié)果表明室溫放置48 h穩(wěn)定性良好。將含藥血漿反復(fù)冷凍(-20℃)、融化，按血漿樣品的處理與測(cè)定方法進(jìn)行處理和測(cè)定，3 d內(nèi)測(cè)定5次，測(cè)得奧美拉唑質(zhì)量濃度分別為0.41，0.38，0.41，0.40，0.42μg/mL，平均(0.40±0.0152)μg/mL，RSD=3.75%(n=5)，結(jié)果表明血漿樣品3 d內(nèi)反復(fù)凍融穩(wěn)定性良好。

2.2 血藥濃度測(cè)定方法與結(jié)果

20名健康志愿者均為男性，年齡(22.8±2.09)歲，體重(61.2±6.5)kg，身高(168.5±5.41)cm，經(jīng)血尿常規(guī)、肝腎功能及心電圖檢查均示健康，且試驗(yàn)前2周內(nèi)未服任何藥品，均簽署知情同意書并經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。隨機(jī)分成兩組，每組10名，分別單劑量給予進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)奧美拉唑 60 mg，在給藥后 0.5，1，2，3，4，5，6，8，10，12，24 h 各取前臂靜脈血3 mL，離心分離血漿0.5mL，于-18℃保存待測(cè)。20名受試者用藥后各時(shí)間點(diǎn)平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖2。

2.3 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

健康志愿者不同時(shí)間測(cè)得的血藥濃度數(shù)據(jù)用3P97程序經(jīng)計(jì)算機(jī)迭代擬合，結(jié)果顯示兩種奧美拉唑腸溶膠囊分別口服60 mg后的體內(nèi)過程均符合一室開放模型(表3)，兩種腸溶膠囊主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。結(jié)果表明，國(guó)產(chǎn)奧美拉唑腸溶膠囊在健康人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程與進(jìn)口制劑相似，主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[4]。

圖2 受試者用藥后各時(shí)間點(diǎn)平均血藥濃度-時(shí)間曲線圖

表3 兩種奧美拉唑腸溶膠囊的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較(n=20)

2.4 生物等效性評(píng)價(jià)

將 AUC0-∞，tmax，Cmax分別經(jīng)三因素方差分析，國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口制劑間、周期間差異均不顯著(P＞0.05)。國(guó)產(chǎn)制劑與進(jìn)口制劑的 AUC0-∞分別為(7.31±6.98)μg·h/mL 和(7.10±6.45)μg·h/mL，國(guó)產(chǎn)制劑相對(duì)生物利用度為(103.61±16.14)%。方差分析結(jié)果經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，兩種制劑間無(wú)顯著差異，F(xiàn)(1，18)=0.208 5，P＞0.05;雙單側(cè) t檢驗(yàn) t1=6.338，t2=5.424，等效;(1-2α)置信區(qū)間為[95.3%，108.7%]，等效。國(guó)產(chǎn)制劑與進(jìn)口制劑的 AUC0-t分別為(7.18±6.86)μg·h/mL 和(6.93±6.37)μg·h/mL，國(guó)產(chǎn)制劑相對(duì)生物利用度為(95.54±10.99)%。方差分析結(jié)果經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，兩種制劑間無(wú)顯著差異，F(xiàn)(1，18)=0.453 4，P ＞0.05;雙單側(cè) t檢驗(yàn) t1=6.917，t2=5.570，等效;(1-2α)置信區(qū)間為[96.3% ，109.0%]，等效。國(guó)產(chǎn)制劑與進(jìn)口制劑的 Cmax分別為(2.19±1.53)μg/mL和(2.13±1.48)μg/mL。方差分析結(jié)果經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，兩種制劑間無(wú)顯著差異，F(xiàn)(1，18)=0.057 2，P ＞0.05;雙單側(cè) t檢驗(yàn) t1=2.839，t2=2.361，等效;(1-2α)置信區(qū)間為[88.0%，118.5%]，等效。國(guó)產(chǎn)制劑與進(jìn)口制劑的 tmax分別為(2.30±0.73)h和(2.20±0.89)h，經(jīng)非參數(shù)統(tǒng)計(jì)方法(Wilcoxon法)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩種制劑間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。結(jié)果表明，兩種腸溶膠囊為生物等效制劑。

3 討論

奧美拉唑經(jīng)肝細(xì)胞P450酶系催化代謝，主要代謝途徑為羥化代謝。從血藥濃度測(cè)定結(jié)果可以看出，奧美拉唑在體內(nèi)消除迅速，受試者血藥濃度個(gè)體差異較大，其原因可能是人群中存在著與 s-美芬妥英代謝表型相關(guān)的羥化代謝多態(tài)性，表現(xiàn)為某些個(gè)體對(duì)藥物的羥化代謝能力低下或發(fā)生缺陷，使原型藥物消除減慢，消除半衰期延長(zhǎng)和 AUC明顯增加，從而使個(gè)體差異增大。由于奧美拉唑的療效與血藥濃度之間無(wú)直接關(guān)系，因此這兩種制劑的臨床療效比較有待于進(jìn)一步研究。

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