HPLC法測定木豆葉中牡荊苷的含量

廣州市藥品檢驗所三分所（510700）肖佳尚

木豆葉為豆科植物木豆Cajanus cajan(L.)Millsp.的干燥葉，具有清熱解毒、消腫止痛功效，用于小兒水痘、癰腫瘡癤[1]。木豆葉主要含以牡荊苷為主的黃酮類等有效成分[2]。本試驗采用HPLC法測定木豆葉中牡荊苷的含量，以控制其藥材的質量，現將結果報道如下：

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（HP1050），紫外檢測器；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；牡荊苷對照品（購自Zigma公司，經面積歸一化法處理含量為92.6%）；木豆葉藥材購自廣州致信藥業中藥飲片廠。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Nucleodur C18Gravity（250mm×4.6mm，5μm）；流動相采用梯度洗脫：0min時甲醇-1%冰醋酸（30:70）；20min時甲醇-1%冰醋酸（40:60）；流速：1ml/min；檢測波長：339nm；在上述條件下牡荊苷與其他成分分離度良好。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取牡荊苷對照品2.92mg，置100ml量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度。

2.3 線性關系考察 精密吸取上述對照品溶液4、8、12、16、20μl注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件測定，測定結果以進樣量（μg）為橫坐標，以色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y＝2404.628X－44.552，r=0.9999，線性范圍為0.108～0.541μg。

2.4 供試品溶液的制備 取本品粉末2.5g，精密稱定，精密加入50%甲醇25ml，超聲處理30 min，用50%甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液，即得。

2.5 精密度試驗精密吸取對照品溶液10μl，重復進樣5次，峰面積積分值的RSD為0.52%。

2.6 穩定性試驗 對同一供試品溶液每隔2h測定一次，結果牡荊苷在12h內較穩定。

2.7 重復性試驗 取同批樣品5份，按含量測定項平行試驗，測得樣品中牡荊苷的含量平均為0.315mg/g，RSD為2.74%。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品約1.25g，精密加入牡荊苷對照品溶液（0.0792mg/ml）5ml，按供試品溶液的制備及樣品測定項操作，結果見附表1。

2.9 樣品測定 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀中，測定峰面積，按外標法計算含量，結果見附表2。

附表1 加樣回收率試驗結果

附表2 樣品含量測定結果(mg/g，n=2)

3 討論

牡荊苷的50%甲醇液經紫外掃描在268nm和339nm波長處有最大吸收，339nm波長的響應值大于268nm，故選擇339nm作為檢測波長。試驗用甲醇和50%甲醇超聲提取效果好。經超聲處理20、30、40、50min試驗，結果超聲30min即可提取完全，提取時間選擇30min。經試驗，采用本文的梯度洗脫可將牡荊苷與其他黃酮類成分較好地分離。