乙型肝炎病毒核酸DNA定量檢測與標志物酶免檢測的相關(guān)性分析

周 洪

重慶市渝北區(qū)人民醫(yī)院檢驗科（401120）

中國是乙型肝炎病毒感染率較高的國家，已知的傳播途徑有多種[1-3]。乙型肝炎病毒治療周期較長，病毒對藥物也存在耐受性，乙型病毒肝炎如果治療不規(guī)范、及時和徹底，可以引起肝硬化、轉(zhuǎn)化為慢性肝肝纖維化、肝癌的可能。乙型肝炎病毒患者的診斷、治療、療效觀察離不開對病毒的檢查。現(xiàn)目前大多（尤其在區(qū)縣級醫(yī)療機構(gòu)）首選乙型肝炎病毒標志物酶免五項（兩對半）測定，病毒標志物酶免測定不能直接真實地反應(yīng)體內(nèi)乙型肝炎病毒含量情況，乙型肝炎病毒核酸DNA定量測定才能直接反應(yīng)乙型肝炎病毒存在、活動性復(fù)制及具傳染性的可靠指標[4]。乙型肝炎病毒核酸DNA定量檢測與乙型肝炎病毒標志物酶免檢測不同模式之間的相關(guān)性評價已有文獻報道[5,6]，本實驗以核酸DNA擴增量級分組，不以組合模式分析結(jié)果，而分別以HBsAg（s/co）、HBeAg（s/co）、HBeAb（s/co）、Pre-S1（s/co）單獨分析各項之間的關(guān)系，希望能為乙型肝炎患者、臨床提供更多的、有價值的信息。現(xiàn)將134例乙型肝炎患者同時作乙型肝炎病毒核酸DNA定量檢測和病毒標志物酶免檢測的相關(guān)性分析報道如下。

1 資料與方法

1.1 檢測對象

隨機留取重慶市渝北區(qū)人民醫(yī)院檢驗科乙型肝炎病毒標志物檢測HBsAg陽性患者標本134例。

1.2 儀器及試劑

中山達安DA7600基因擴增儀，中山達安HBV核酸DNA擴增試劑；上海科華實業(yè)公司乙型肝炎病毒標志物檢測酶免兩對半試劑。

1.3 方法

對134例血清標本分別進行HBV DNA基因擴增（熒光定量PCR法）和酶免標志物HBsAg、HBeAg、HBeAb、Pre-S1四項檢測。以HBV DNA基因擴增數(shù)量級分組：DNA＜1×103為A組，1×103～1×104為B組、1×104～1×105為C組、1×105～1×106D組、1×106～1×107為E組、＞1×106為F組。HBV DNA基因擴增數(shù)取對數(shù)值表示，其他項值為s/co值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SAS 6.12版統(tǒng)計學(xué)軟件；HBV DNA基因擴增數(shù)取對數(shù)值，HBsAg、HBeAg、HBeAb、Pre-S1取“s/co”值，以χ—±s表示，行每組各項分別與A組比較進行t檢驗（表1）；列HBV DNA項各組分別與其他項各組進行相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 134例乙型肝炎HBsAg陽性血清標本，HBV DNA＞1×103有100例，陽性率74.6%。

2.2 HBV DNA各組別與DNA＜1×103比較有極顯著性差異，P＜0.01。

2.3 標志物HBsAg酶免檢測各組無顯著性差異P＞0.05。

2.4 HBeAg、HBeAb和Pre-S1各項HBV DNA＜1Х105以下各組無顯著性差異，HBV DNA＞1×105以上各組有顯著性或極顯著性差異P＜0.01或P＜0.05。

2.5 HBV DNA值與HBsAg（s/co）不相關(guān)r=0.091；HBV DNA值＜1×105以下組與HBeAg（s/co）、HBeAb（s/co）、Pre-S1不相關(guān)r＜0.100；HBV DNA值＞1×105以上組與HBeAg（s/co）、HBeAb（s/co）、Pre-S1相關(guān)r＞0.600，與HBeAb（s/co）呈負相關(guān)。

表1 乙型肝炎病毒DNA核酸擴增定量檢測與酶免標志物檢測結(jié)果 （±s）

表1 乙型肝炎病毒DNA核酸擴增定量檢測與酶免標志物檢測結(jié)果 （±s）

注：1.各組分別與A組比較：*表示 P＜0.01，⊿表示 P＜0.05，t、檢驗；2.DNA對數(shù)均值項各組分別與HBsAg（s/co）、HBeAg（s/co）、HBeAb（s/co）、Pre-S1（s/co）各項各組進行相關(guān)性分析：r表示P＜0.01，y表示P＜0.05

組別例數(shù) DNA對數(shù)均值 HBsAg（s/co） HBeAg（s/co） HBeAb（s/co） Pre-S1（s/co）A 34 2.03±0.64 17.4±6.36 0.14±0.13 0.41±0.77 0.81±2.36 B 26 3.50±0.29* 17.9±7.09 1.85±3.92 1.64±2.96 2.29±4.17 C 12 4.25±0.15* 20.7±1.82 ⊿ 0.10±0.05 0.11±0.11⊿ 0.18±0.075 D 65.55±0.40* 24.9±2.66 9.44±9.33y 0.64±0.58 9.87±9.77*y E 24 6.51±0.29* 19.9±3.63 16.7±4.60*r 6.54±4.95*y 12.3±8.62*r F 32 7.37±0.24* 18.5±4.30 13.6 ±6.98 *r 4.83 ±2.67*y 10.9 ±7.81*r

3 討 論

3.1 乙型肝炎病毒HBsAg為病毒蛋白質(zhì)外殼、1963年在澳大利亞土著人血中發(fā)現(xiàn)，又稱為澳大利亞抗原，HBV感染后，大多數(shù)感染者外周血中可出現(xiàn)HBsAg，它不能直接真實地反應(yīng)乙型肝炎病毒體內(nèi)復(fù)制和存活病毒情況，有的僅僅就一蛋白外殼，根本就無病毒核酸存在，也存在體內(nèi)血液循環(huán)中，HBsAg僅為乙型肝炎病毒感染的標志，不能反應(yīng)病毒有無復(fù)制、復(fù)制程度、傳染性強弱及預(yù)后，而HBV DNA為乙型肝炎病毒核酸。HBsAg與HBV DNA檢測的不一致性可也排除標本脂血、溶血等的影響[7]。HBV DNA檢測與HBsAg酶免檢測不一致性有兩種情況：一是HBsAg陰性，而HBV DNA檢測陽性，這種情況可能是HBsAg酶免檢測靈敏度低的原因造成的；另一種是HBsAg陽性，而HBV DNA檢測陰性的原因：一是HBV DNA含量低，低于1×103以下，二是血中存在的HBsAg是由HBV DNA整合到人染色體與宿主基因共同表達所致，測不到血清中的DNA[8]。故HBsAg陽性血清HBV DNA核酸定量檢測不一定都＞1×103。HBV DNA核酸定量檢測與酶免HBsAg檢測無相關(guān)性。

3.2 HBeAg 為HBcAg的可容部分，二者有75%共同的氨基酸序列。HBeAg與病毒Dance顆粒、HBV DNA具有伴隨關(guān)系，是HBV復(fù)制活躍的血清學(xué)指標，所以，HBeAg項HBV DNA高低載量有極顯著性差異。有文獻報道，HBsAg/HBeAg/抗-HBc陽性模式與HBV DNA存在相關(guān)性，HBeAg陽性血清HBV DNA PCR檢測幾乎全為陽性，并且大部分含量＞107[9]。所以，HBeAg含量與HBV DNA高載量有相關(guān)性。

3.3 當(dāng)血清HBeAg轉(zhuǎn)陰后，可出現(xiàn)HBeAb，說明病毒復(fù)制減少，傳染性減弱，HBeAb為病情好轉(zhuǎn)的指標，也是乙型肝炎病毒治療血清學(xué)轉(zhuǎn)型的一個標準。所以HBeAb與HBV DNA負相關(guān)。

3.4 由以上實驗結(jié)果可以得出，僅僅依靠乙型肝炎病毒標志物抗原抗體的檢測，不能準確判斷病毒復(fù)制的程度及傳染性的強弱，也不是體內(nèi)病毒的真實反應(yīng)；可能存在的因試劑方法的局限性、病毒變異等所致假陰性和假陽性，以及對檢測結(jié)果的進一步確認和適當(dāng)?shù)慕忉孾10]，對HBV感染血清標志物檢測的正確使用有重要意義PCR方法動態(tài)檢測HBV DNA是評價病毒載量，療效觀察的最可靠方法。

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