HPLC測定金剛藤顆粒中薯蕷皂苷元的含量

朱祥松 張德軍

1 武漢大學（430000）

2 湖北省鄂州市藥品檢驗所（436000）

金剛藤顆粒為我市某醫院制劑，由百合科植物菝葜Smilas China L.的根莖經加工制成，具有清熱解毒，消腫散結的功效，臨床用于附件炎和附件炎性包塊的治療。菝葜屬植物中含有甾體皂苷、黃酮、植物甾醇等多種化學成分[1]。該制劑的質量標準中含量測定采用薄層掃描法，操作繁瑣，專屬性不強，且使用毒性較強的苯作為溶劑。本文參考文獻[2]采用了HPLC法對其中薯蕷皂苷的水解產物薯蕷皂苷元進行含量測定，方法簡單，結果準確，重現性好，為該制劑質量控制提供了有效方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2000型高效液相色譜儀，包括P2000輸液泵、UV2000紫外檢測器、TJ2000色譜工作站（北京創新通恒有限公司）；BS21S電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；SK-3300超聲儀（功率300w，頻率40kHz,上海科導超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

薯蕷皂苷元對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號1359-200001）；金剛藤顆粒（鄂州市某醫院，批號為20090321、20090615、20091216）；乙腈為色譜純；水為二次重蒸水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適應性

色譜柱：Kromasil-100 C18 （250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（90∶10）；檢測波長：203nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；進樣量：20μL。理論塔板數按薯蕷皂苷元峰計算應不少于4000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取經60℃干燥至恒重的薯蕷皂苷元對照品適量，加乙腈超聲使溶解，制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

圖1 HPLC圖譜

表1 加樣回收試驗結果（n=5）

表2 樣品含量測定結果

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品，研細，稱取粉末約10g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醇適量，浸漬過夜，加熱回流至提取液近無色，回收溶劑至約100mL，加熱回流水解2.5h，放冷，用石油醚（60～90℃）振搖提取4次，每次40mL，合并石油醚提取液，回收溶劑至干，殘渣加乙腈溶解并轉移至10mL量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備

按處方比例和制法制成不含金剛藤的陰性樣品，按照上法制備陰性樣品溶液。

2.3 干擾試驗

在上述色譜條件下，供試品溶液與對照品溶液主峰的保留時間一致，薯蕷皂苷元峰與其它峰完全分離、峰形較理想，陰性樣品無干擾。見圖1。

2.4 線性關系考察

精密稱取薯蕷皂苷元對照品12.05mg，置25mL容量瓶中，加乙腈超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。分別量取儲備液1.0、2.0、3.0、4.0mL至5mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻。取上述4種濃度的溶液及儲備液，共5個梯度濃度的溶液，用定量環分別進樣20μL，記錄色譜圖，以進樣量（X，μg）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，方程為：Y=3.5689×104X+4.2868×103，r=0.9998。結果表明：在1.928～9.640μg范圍內，薯蕷皂苷元的進樣量與峰面積呈現良好線性關系。.

2.5 精密度試驗

取對照品溶液，連續進樣5次，每次20μL，測定薯蕷皂苷元峰面積，RSD為0.9%（n=5）。

2.6 穩定性試驗

將供試品溶液常溫放置，分別于0、2、4、6、8、12h進樣20μL，測定薯蕷皂苷元峰面積，RSD為1.5%（n=5）。結果表明，供試品溶液在12h內基本穩定。

2.7 重復性試驗

取批號為20091216供試品5份，分別按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按照上述相同色譜條件測定，計算，薯蕷皂苷元含量的RSD為1.9%（n=5）。

2.8 加樣回收試驗

精密稱取重復性試驗項下各份余下的已測定含量的金剛藤顆粒5份，每份約5g，分別加入對照品約2mg，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，進樣20μL，結果見表1。

2.9 樣品含量測定

取金剛藤顆粒，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，取對照品溶液與供試品溶液分別進樣20μL，測定，以外標法（峰面積）計算含量，結果見表2。

3 討 論

3.1 菝葜的質量標準[2]中供試品回流時間為2h，本試驗中由于供試品量的增加，為考察水解是否完全，選用了2.0、2.5、3.0h進行水解，結果三者測定值分別為0.36、0.45、0.44mg/g，故選擇2.5h。

3.2 為考察供試品是否提取完全，分別進行了4、5、6次提取，結果三者測定值分別為0.43、0.44、0.43mg/g，說明4次已基本提取完全，故選擇提取4次。

3.3 薯蕷皂苷元在乙腈中振搖溶解不太理想，通過超聲處理可得到較好溶解。

[1]趙鐘祥,馮育林,阮金蘭等.菝葜化學成分及其抗氧化活性的研究[J].中草藥,2008,39(7):975-977.

[2]國家藥典委員會.中國藥典2005年版一部[S].北京:化學工業出版社,2005:216.