HPLC測定腎石通顆粒中延胡索乙素含量

2010-09-19 07:58:16文才華涂文升

中國醫藥指南 2010年34期

文才華涂文升

廣西醫科大學附屬腫瘤醫院（530021）

腎石通顆粒由金錢草、王不留行（炒）、萹蓄、延胡索（醋制）、丹參、雞內金（燙）等10味中藥組成的復方制劑，具有清熱利濕，活血止痛，化石、排石功效。用于治療腎結石，腎盂結石，膀胱結石，輸尿管結石。據文獻報道[1-3]該制劑的含量檢測為槲皮素，另有文獻報道[4]測定丹參素，但尚未見有有關測定延胡索乙素的報道。為進一步及更全面控制腎石通顆粒的質量，本文初步建立了HPLC測定腎石通顆粒中延胡索乙素含量的方法，結果表明該方法分離效果好、靈敏、準確，可用于腎石通顆粒中延胡索乙素含量的測定及質量控制。

1 儀器與試劑

島津LC-10AVP高效液相色譜儀、SPD-10AVP紫外外-可見檢測器、WML-2010色譜工作站，甲醇（高效液相色譜醇；上海國藥集團化學試劑有限公司）、磷酸（分析純）。

延胡索乙素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110726-200409）；腎石通顆粒為XX藥業有限公司產品（批號：100401N、091012N、100506N）

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Shim-pack ODS柱（250mm ×5.0mm，5μm），以甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調pH值至6.0）（55∶45V/V）為流動相，流速0.8mL/min；檢測波長280nm，柱溫40℃。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取延胡索乙素對照品9.3mg，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（93mg/L）。

2.3 供試品溶液的制備

取腎石通顆粒，研磨，精密稱取1.0g至50mL具塞三角燒瓶中，加入1.0mL三乙胺，加70%乙醇20.0mL，超聲提取60min，過濾，取續濾液1.0mL，離心15min（15000r/min），上清液即為供試品溶液。

2.4 陰性干擾實驗

按處方比例取處方中除延胡索以外的藥材，制備缺少延胡索的陰性樣品，按2.3項下方法制備陰性對照品溶液，分別精密吸取對照品溶液、陰性樣品溶液及供試品溶液各10.0μL，注入到高效液相色譜儀中。結果可見，在陰性樣品溶液色譜圖中與對照品溶液色譜圖相應處無吸收峰，在供試品溶液色譜圖中延胡索乙素的峰與其他成分峰達到基線分離（圖1）。

圖1-A 延胡索乙素標準品HPLC色譜圖

圖1-B 腎石通顆粒HPLC色譜圖

圖1-C 缺延胡索的HPLC圖譜

2.5 標準曲線考察

精密吸取延胡索乙素對照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5μL，分別注入高效液相色譜儀，測定峰面積，以對照品進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程（Y=2.80×106+7.9×104Cr=0.999 5 n=7），結果表明延胡索乙素，在23.25～162.75ng的線性范圍線性關系良好，最低檢出限為23.25ng。

2.6 精密度實驗

取同一對照品溶液，分別精密吸取7.5μL，注入到高效液相色譜儀中，進樣6次。結果RSD值為0.54%，提示所使用儀器的精密度良好。

2.7 穩定性實驗

取同一供試品溶液，每隔2h進樣1次，連續6次，RSD為1.40%，表明供試品溶液在12h 內穩定性良好。

2.8 回收率實驗

取已知延胡索乙素含量為39.8μg/g的樣品適量，研磨，精密稱取1.0g，共9份，分別加入標準品溶液0.10mL、0.20mL、0.30mL，按2.3項下方法進行提取，進樣測定，計算回收率。結果示平均回收率為99.81%，RSD值為0.66%，見表1。