尖銳濕疣局部皮損內的白介素2、白介素4、白介素10和白介素12水平的研究

應作霖 黨宏 李曉杰 徐曉寅 程斌 王豐

尖銳濕疣(CA)是由人乳頭瘤病毒(HPV)感染引起的一種性傳播疾病。近年來我國尖銳濕疣的發病率呈明顯上升趨勢，而且治療后復發率很高，成為性病臨床工作中的一個重點和難點。一些研究表明CA的發生、消退、復發及癌變都與機體的免疫功能有關［1］。白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、白介素10(IL-10)和白介素12(IL-12)等細胞因子與機體的免疫狀況密切相關。為探討疣體皮損局部的免疫狀態在尖銳濕疣發病機制中的作用，我們對CA患者局部疣體組織內的IL-2、IL-4、IL-10和IL-12等細胞因子的水平進行了研究，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 病例資料 患者均來自我院皮膚性病科就診的初發CA，根據2000年我國衛生部制定的尖銳濕疣診斷標準確診。患者3個月內未接受免疫療法及其他治療，且排除自身免疫性疾病、嚴重系統性疾病和感染性疾病。共收集60例男性CA患者的典型皮損標本，年齡19～47歲，平均31.5歲;病期3 d～6個月，平均1.8月。所有CA患者均經治療清除所有疣體皮損，隨訪觀察共6個月，分為復發組和未復發組(16例患者的疣體經治療完全消失后，在隨訪期間又在局部重新出現新發的疣體皮損者定為復發;44例未出現者定為未復發)。另取14例健康男性包皮環切術的包皮組織作為正常對照組。

1.2 實驗步驟

1.2.1 標本制備 常規消毒局部皮膚，切取CA患者的部分疣體皮損，稱重后用生理鹽水沖洗3次，再以50 mg/ml比例加生理鹽水，置于組織研磨器內研磨成勻漿后離心，取上清液分裝，置-30℃冰箱內保存待測。

1.2.2 對組織標本內的IL-2、IL-4、IL-10和IL-12的水平進行檢測。按照ELISA檢測試劑盒說明書操作，使用雙抗體夾心ELISA方法，將標準品倍比稀釋，用酶標測定儀分別在波長450 nm處測定各孔的OD值，繪制標準曲線;測定各個實驗標本的OD值，從中求出每個標本的各細胞因子的濃度水平。ELISA檢測試劑盒由晶美生物工程有限公司提供。

1.3 統計學分析 應用SPSS 13.0統計軟件包對實驗結果進行統計處理。檢測的計量資料用均數±標準差(±s)表示;使用方差分析和LSD檢驗等方法對實驗數據進行統計分析。P＜0.05為有統計學意義。

2 結果

我們對尖銳濕疣患者局部疣體組織內的細胞因子檢測結果顯示，CA患者的IL-2和IL-12的水平都明顯低于正常對照組，而IL-4和IL-10水平都明顯高于正常對照組，具有顯著的統計學差異(P＜0.05)。復發組CA患者疣體組織內的IL-2和IL-12的水平都明顯低于未復發組，而IL-4和IL-10水平都明顯高于未復發組，在統計學上也有顯著性差異(P＜0.05)，見表1。

表1 尖銳濕疣患者疣體組織內的IL-2、IL-4、IL-10和IL-12的檢測結果± s，pg/ml)

表1 尖銳濕疣患者疣體組織內的IL-2、IL-4、IL-10和IL-12的檢測結果± s，pg/ml)

組別 例數IL-2 IL-4 IL-10 IL-12 CA復發組16 1.93±0.48 3.62±0.91 4.89±1.23 1.16±0.34 CA未復發組 44 3.79±1.01 1.99±0.54 3.21±0.88 3.14±0.81正常對照組14 6.68±1.79 0.62±0.16 1.14±0.31 4.97±1.25

3 討論

近年來的研究發現尖銳濕疣的發生、消退、復發及癌變與患者的免疫功能有關，尤其與細胞免疫功能下降有密切關系［2］。Th1 淋巴細胞分泌細胞因子 IL-2、IL-12、IFN-γ 和 TNF-α等，主要介導細胞免疫;而Th2淋巴細胞分泌細胞因子IL-4、IL-5、IL-6和IL-10等，主要介導體液免疫。IL-2屬于Th1型細胞因子，可增強Th細胞的活性，刺激NK細胞生長，還可誘導NK細胞和淋巴因子激活的殺傷細胞的分化和效應功能，具有廣泛的抗病毒活性。IL-12也屬于Th1型細胞因子，可促進T細胞和NK細胞增殖，增強T細胞和NK細胞活性并誘導γ干擾素產生，而對IL-4的產生起抑制作用。IL-12誘導免疫反應朝Th1型方向發展，并刺激Th1細胞的發育和增殖，從而在細胞免疫中發揮重要作用。IL-4屬于Th2型細胞因子，可刺激活化B細胞和T細胞增殖，在調節體液免疫中起重要作用;另外其可抑制Th1細胞活化及分泌細胞因子。IL-10也是由Th2細胞分泌，可促進體液免疫，抑制細胞免疫，能抑制Th1細胞產生IL-2和IFN-γ而達到調節作用［3］。目前對CA患者全身性免疫功能的研究較多，國內外對CA患者血液中的Th1和Th2淋巴細胞的研究發現在免疫應答過程中Th1型細胞因子水平降低，而Th2型細胞因子水平升高，存在Thl和Th2分泌細胞因子交互作用失衡的現象［4］，表明CA患者的全身性細胞免疫功能下降。

尖銳濕疣是好發于生殖器及肛門附近皮膚黏膜處的HPV病毒感染性疾病，其復發也主要局限于原發損害附近的皮膚黏膜。除患者全身免疫功能外，CA患者疣體皮損處的局部免疫狀態對其病程及預后也起著重要影響。王嵐等［5］證實CA局部淋巴細胞不僅比例失調，而且淋巴細胞和單核細胞功能受抑制或降低，不能有效地殺傷靶細胞，從而使HPV病毒得以生長繁殖。為了進一步探討CA的發病機制，我們對CA患者局部疣體組織內的IL-2、IL-4、IL-10和IL-12水平進行了檢測，結果發現CA患者的Th1型細胞因子IL-2和IL-12的水平都明顯低于正常對照組，而Th2型細胞因子IL-4和IL-10水平都明顯高于正常對照組，表明CA患者皮損局部的細胞免疫功能下降，這可能是導致CA發生及復發的重要原因。研究還發現CA復發組的IL-2和IL-12的水平低于未復發組，而IL-4和IL-10的水平高于未復發組。與未復發組相比，CA復發組表現為Th1型免疫反應更弱，而Th2型免疫反應更強，提示CA患者局部皮損組織內的IL-2和IL-12的水平增加可能減少CA的復發。總之，CA患者Th1型細胞因子水平降低，而Th2型細胞因子水平升高，說明CA患者存在Th1與Th2型細胞因子平衡失調而向Th2方向漂移，并由此導致一系列的細胞免疫功能的抑制，對病毒清除及抵抗力下降，使HPV病毒發生免疫逃逸，這可能與尖銳濕疣的發病機制有關［6］。

［1］Kobayashi A，Miaslowski C，Wallhagen M，et al.Recent development in understanding the immune response to human papillomavirus infection and cervical neoplasia.Oncol Nurs Forum，2000，27:643-651.

［2］Ahmed AM，Madkan V，Tyring SK.Human papillomaviruses and genital disease.Dermatol Clin，2006，24:157-165.

［3］Romagnani S.Regulation of the T cell response.Clin Exp Allergy，2006，36:1357-1366.

［4］朱寧，程浩.Th1/Th2與尖銳濕疣關系的研究進展.浙江醫學，2007，10:1137-1140.

［5］王嵐，陳映玲，周禮義.尖銳濕疣患者腫瘤壞死因子α、白介素6和白介素8水平的研究.中華皮膚科雜志，1998，4:239-240.

［6］李莉，周再高，曾抗，等.尖銳濕疣患者外周血Th1/Th2淋巴細胞比的改變.第一軍醫大學學報，2003，23:737-739.