P53蛋白在食管癌中的表達(dá)和臨床意義

黃俊輝 蔣義貴

食管癌(esophageal cancer，EC)是人類消化道的常見腫瘤，也是世界最常見的十種惡性腫瘤之一，位居我國腫瘤死亡的第四位。近期報(bào)道，每年新增患者超過300000人，并且大多發(fā)生在發(fā)展中國家［1］。當(dāng)前臨床就診的病例多屬于中晚期，其中能夠行根治性切除術(shù)者只有1/3，且手術(shù)切除的5年存活率僅25%左右［2］。因此，就目前的狀況來看，降低食管癌患者死亡率的關(guān)鍵是早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療。食管癌的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)涉及多因素、多階段、多基因變異積累及相互作用的復(fù)雜過程。在分子水平上涉及多個(gè)原癌基因、抑癌基因以及蛋白質(zhì)的改變。所以，分子生物學(xué)方法現(xiàn)已成為EC早期診斷、判斷預(yù)后、治療及預(yù)防的重要手段和途徑。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2006～2007在我院行食管癌手術(shù)的62例患者，其中男42例，女20例，年齡34～76歲，平均56歲，術(shù)后病理檢查結(jié)果均為鱗癌。其中高、中分化48例，低分化14例，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者38例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者24例，癌浸潤至黏膜下層3例，肌層23例，全層36例，所有病例術(shù)前均未經(jīng)放化療。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料和方法 SP試劑盒、抗p53單克隆抗體購自福州邁新生物技術(shù)公司。免疫組織化學(xué)染色：常規(guī)切片，脫蠟水化。3%H20。溶液作用5 min，微波爐抗原修復(fù)。加10%正常山羊血清，室溫下孵育5 min。傾去血清，加入P53單克隆抗體工作液，置于4度冰箱中過夜。PBS液洗片后加入二抗，37度恒溫箱中孵育20 min。洗片后加入LSAB復(fù)合物，37度恒溫箱中孵育20 min。PBS液洗片，配制DAB顯色液，加入切片中顯色，封片。

1.3 免疫組化結(jié)果判斷 P53基因蛋白陽性表達(dá)呈棕褐色顆粒定位于細(xì)胞核內(nèi)，陽性細(xì)胞＜25%為(-)，25% ～50%為(+)，50% ～75%為(++)，＞75%為(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用spss 13.0統(tǒng)計(jì)，各項(xiàng)目內(nèi)的計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

p53蛋白在62例食管癌組織中表達(dá)的陽性率為48.4%。在男性和女性患者分別為50.0%和45.0%(P＞0.05);低于60歲年齡組和高于60歲年齡組分別為46.9%和50.0%(P＞0.05)：高、中分化組和低分化組分別為47.6%和50.0%(P＞0.05);腫瘤浸潤黏膜及肌層的患者表達(dá)陽性率為61.1%，浸潤全層時(shí)為30.8%(P＜0.05);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為65.8%，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為20.8%(P＜0.05)，即p53的陽性表達(dá)率與性別、年齡、及腫瘤的分化程度無顯著差異，而與細(xì)胞浸潤深度和淋巴瘤轉(zhuǎn)移狀態(tài)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

腫瘤的發(fā)生和演進(jìn)過程中，細(xì)胞將發(fā)生一系列遺傳學(xué)的改變，如一些癌基因激活和抑癌基因失活，而其中某些基因的分子遺傳學(xué)改變可能就是細(xì)胞癌變的標(biāo)志。P53基因是一個(gè)腫瘤高度相關(guān)的基因，是一種重要的抑癌基因，定位于染色體17p13上，基因全長大約16～20kb，由11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子組成，編碼393個(gè)氨基酸。參與細(xì)胞增殖和分化，與細(xì)胞周期的調(diào)控密切相關(guān)。其主要生物學(xué)功能是引起細(xì)胞周期阻滯于G1/G2期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抑瘤作用。根據(jù)功能的不同可分為野生型和突變型。野生型p53基因具有抑制細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化的作用，正常細(xì)胞中野生型p53基因參與細(xì)胞周期的調(diào)控，可以阻止細(xì)胞于G1/S期，其半衰期短，含量低，用免疫組化方法無法檢測到。突變型p53是一種促癌基因，是P53基因突變的產(chǎn)物。研究表明，在人類惡性病變的發(fā)展過程中，常出現(xiàn)p53的突變，突變型p53蛋白不僅失去對細(xì)胞異常增殖的抑制作用，從而促進(jìn)細(xì)胞異常增殖，最終使細(xì)胞全部表型出現(xiàn)惡性化［3］。同時(shí)，這些突變引起氨基酸的取代，出現(xiàn)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化，所表達(dá)的蛋白質(zhì)半衰期較長，且突變型P53蛋白具有癌蛋白活性且穩(wěn)定性增高，因此可以檢測出來，即提示利用免疫組化檢測p53基因蛋白表達(dá)是突變型［4］。在食管癌中，有30% ～50%的患者存在P53基因的突變。P53基因突變可能是食管細(xì)胞癌變的一個(gè)早期事件，這在早期的研究中已經(jīng)被證實(shí)。目前開展了多項(xiàng)針對P53基因的靶向治療的研究［5］。(食管癌組織和癌旁組織)

國外有學(xué)者研究證實(shí)，P53基因突變與肺癌易發(fā)生局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后差有關(guān)J［6］，就其在食管癌中的研究鮮有報(bào)道。本研究結(jié)果顯示的P53基因蛋白表達(dá)與腫瘤的浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)有關(guān)，而后者已經(jīng)證實(shí)食管癌預(yù)后不良主要因素，因此本結(jié)果提示P53蛋白的表達(dá)可能食管癌預(yù)后不良指標(biāo)之一。

表1 p53蛋白表達(dá)與病理特點(diǎn)關(guān)系(例，%)

［1］Parkin D M .Global cancer statistics in the year2000.Lancet Oneol，2001，2(9)：533-543.

［2］黃詩良，孟祥中.早期食管癌的診斷.現(xiàn)代使用醫(yī)學(xué)，2005，9(17).

［3］李輝，閻天生，張曉娜.食管癌早期診斷的研究進(jìn)展 .河北醫(yī)藥，2006，28(8)：755-757.

［4］苗戰(zhàn)會，路平，陸志紅，李榮.p 5 3蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)及其臨床病理參數(shù)關(guān)系 .Medical Information Medicine＆Surgery，2009，22(8)：696-797

［5］HoshinoI，Matsubara H，AkutsuY，et al.Roleof histone deacetylaseinhibitor i n adenovirus-mediated p53 gene therapy in esophageal cancer.Anticancer Res，2008，28(2A)：665-671.

［6］MishinaT，Dosaka A H，HommuraF，et al.Cy clin E express，apotentialprognostic marker for non-small cell lung Cancer.Clin Cancer Res，2006，12：11-16.