拜激靈對鳊生長和運輸應激的緩解作用研究

黃玉萍 劉 濤 姚瑞清 鄭宗林 唐冬梅

鳊（Megalobrama amblycephala）隸屬于鯉形目，鯉科，鲌亞科，魴屬。江蘇無錫的宜興、常州的武進等地主要以養殖鳊魚為主，據初步估計，其鳊魚的產量占全國鳊魚總產量的20%之多。但是近年來，隨著養殖密度的不斷提高，養殖環境逐步惡化，鳊魚的病害也越來越多，給鳊養殖產業造成較大的經濟損失，不少養殖戶“聞病色變”。病害的發生與病源、宿主、環境以及三者相互作用密切聯系，而目前的養殖模式使鳊魚養殖面臨更為復雜的自然和人為干擾，復雜的應激因子給鳊帶來不同程度的脅迫作用，致使其對病原的敏感性增高，常常成為病害發生和流行的重要誘因。與此同時，長途運輸過程中鳊也受到較大的應激，常導致應激性充血、脫粘等嚴重后果。血漿或血清中的皮質醇激素含量隨應激強度呈現規律性變化，被廣泛用來衡量應激水平的重要指標。血液理化指標也能很好地反映機體生理狀態，并用于魚體病理的診斷。因此，試驗擬判斷在飼料中補充不同劑量的鳊抗應激產品——拜激靈，測定經人工模擬運輸后血液皮質醇激素指標和血液生化指標的變化，探討抗應激產品對鳊養殖生產和運輸中的應激緩解作用，為養殖生產提供基礎資料。

1 材料與方法

1.1 試驗魚及試驗設計

試驗用鳊為當年人工繁殖的同一批苗種，購自重慶市榮昌縣梅石壩漁場，試驗在西南大學水產系室內循環養殖系統中進行。試驗前暫養1周，每天早、中、晚飼喂對照組飼料3次至飽食。試驗采用的養殖設施為長方形玻璃缸(總體積0.4 m3，水體體積0.2 m3)。養殖試驗期間均連續充氧（除投餌期間外）。

試驗開始前停飼24 h。選擇體重接近(3.7±0.3)g、體格健壯的幼魚1 200尾，隨機分配于12個養殖缸，每缸100尾，分別為對照組、BJ1組（500mg/kg拜激靈（英文縮寫為 BJL）、BJ2組（1 000mg/kg BJL）和BJ3組（2 000mg/kg BJL）。每天早、中、晚投喂3次，至飽食，投喂結束后 30 min，吸出池內殘餌及糞便。養殖試驗共進行42 d，試驗期間水溫（25.0±1.0）℃，pH 值（7.5±0.5），溶氧≥5mg/l，氨氮＜0.2mg/l，余氯＜0.1mg/l。

1.2 試驗飼料

飼料由西南大學水產系水產動物營養教研室制作。配制飼料前，飼料原料均經粉碎機粉碎并全部過60目篩，按配方要求均勻混合成粉料，在30℃鼓風干燥箱內干燥24 h，置冰箱0℃保存。“拜激靈（BJL）”產品由拜耳（四川）動物保健有限公司提供。試驗飼料具體配方組成和營養成分分析見表1。

表1 試驗飼料組成及營養水平

1.3 生長性能相關指標

1.3.1 生長速度

42 d養殖試驗后，以魚質量的鮮重變化、增重率和特定生長率等表示生長速度。增重率(%)＝[(Wt-W0)/W0]×100；特定生長率(%/d)＝[(LnWt-LnWo)/d]×100，W0和Wt分別表示養殖開始和結束時的魚體質量（g）。

1.3.2 飼料利用效率

以飼料系數和蛋白效率表示，飼料系數=飼料投喂量/魚體增重量；蛋白效率（%）=(Wt-W0)/F×P，F 指飼料消耗量，P指飼料蛋白質含量。

1.4 抗應激機能測定

1.4.1 應激試驗設計

鳊養殖試驗結束后停止喂食24 h。BJ1、BJ2和BJ3組的各重復缸中分別取出5尾魚放入魚苗運輸袋中充入純氧并打包；對照組則各重復缸中分別取出10尾，每個運輸袋中放入5尾鳊充入純氧并打包（其中1袋為陰性對照，不運輸），用皮卡車運輸2 h。運輸后立即將魚快速深度麻醉后采集血樣。運輸過程中皮卡車平均速度為50～60 km/h。

1.4.2 血液樣品的制備

運輸應激后，用1 ml注射器從尾靜脈采集試驗魚的血液，全血不加抗凝劑于4℃下放置2 h，待血液明顯分層后以2 000 r/min離心30 min后分離，收集血清，放于-18℃低溫冰箱中暫存，用于血液生化指標和血清皮質醇激素含量的測定。

1.4.3 血清皮質醇含量測定

采用放射免疫分析法，試劑盒由南京建成生物技術研究所提供。

1.4.4 血液生化指標的測定

所有生化指標在奧林巴斯（OLYMPUS）AU1000全自動生化分析儀上完成。血液生化指標測定方法見周玉等（2002）介紹的方法進行。每批血樣皮質醇含量指標測定在4 h內完成，血液生化指標在24 h內完成。

1.5 統計分析

采用SPSS17.0統計軟件對數據進行統計學分析，先對數據作單因素方差分析(ANOVA)，處理間若有顯著差異，再作Duncan's法多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 試驗結果

2.1 對生產性能的影響

BJL以500～2 000mg/kg劑量添加于飼料后，42 d養殖試驗鳊的生長性能指標見表2。從表2中可以看出，BJL顯著提高了鳊的增重率和特定生長率（P＜0.05），但各 BJ組之間無顯著差異（P＞0.05）；蛋白效率也因為BJL的補充而顯著提高，隨著BJL補充量的增加，其蛋白效率有進一步提高趨勢，BJ3組較對照組和BJ1組均有顯著提高（P＜0.05），而飼料系數則與蛋白效率呈完全相反的趨勢，得到有效降低；BJL補充對鳊成活率較對照組顯著提高（P＜0.05）。

表2 BJL對鳊生長性能的影響

2.2 運輸應激對鳊的影響（見圖1a～圖1h）

第21 d：經過2 h的運輸后，除陽性對照組有1尾死亡外，陰性對照、BJL組均未出現死亡。運輸過程中，陽性對照組魚在氧氣袋中隨水波的動蕩下表現出煩躁不安，快速游動，用頭不斷沖撞袋壁，試圖逃離；BJL組的鳊在運輸初期也表現出竄出水面等較激烈反應，持續約15～20 min即恢復平靜，靜臥袋底或輕輕游動。運輸結束后，皮質醇激素含量檢測結果表明，運輸應激后的鳊血清皮質醇激素含量試驗組較陰性對照組均顯著提高（P＜0.05），但BJL組的血清皮質醇激素含量比陽性對照組顯著降低（P＜0.05）（見圖1）。第42 d，其趨勢與第21 d相同。

第 21 d：鳊血清總蛋白（TP）和白蛋白（AP）測定結果表明，各運輸應激組鳊血清TP和AP均較陰性對照組顯著提高（P＜0.05），但其中BJL組的TP和AP較陽性對照顯著降低（P＜0.05）。

陽性對照組的鳊血清丙氨酸轉氨酶（ALT）和堿性磷酸酶（ALP)較陰性對照組顯著提高（P＜0.05），但BJ2和BJ3的血清ALT和ALP與陰性對照組相比無顯著差異（P＞0.05），比陽性對照則顯著降低（P＜0.05）。

第42 d：各組間TP、AP、ALT和ALP變化趨勢與第21d基本一致。不同之處在于BJ2和BJ3的TP，及BJ3的AP與陰性對照無顯著差異（P＞0.05）。

圖1 鳊運輸應激前后血清皮質醇和生化指標的變化

第21 d：除BJ3外，運輸組的魚血糖（GLU）含量與陰性對照相比有顯著增加（P＜0.05），但均顯著低于陽性對照組（P＜0.05），BJL各組間GLU無顯著差異（P＞0.05）。

陽性對照組的血清甘油三酯（TG）和血清總膽固醇（TC）較陰性對照組顯著提高（P＜0.05），BJL補充組的血清TG和TC則與陰性對照組無顯著差異（P＞0.05）。

第42 d：GLU在各組間的變化趨勢與第21 d同；BJL補充組的血清TG和TC與陰性對照組無顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

試驗飼料中補充的拜激靈是以抗應激為主要功效的產品，但在本試驗中表現出明顯的促長性能。BJL的補充顯著提高了鳊的增重率和特定生長率，但500、1 000和2 000mg/kg的補充量之間沒有顯著差異；BJL的補充能顯著提高鳊對飼料蛋白的利用效率，且隨補充量的增高而增高，而飼料系數則與蛋白效率相反，呈逐步降低趨勢；BJL補充組的鳊成活率較對照組顯著提高。試驗認為這可能包括如下2個因素：①產品中包含有維生素和礦物質等組分。在實驗室水族缸中養殖，水體幾乎不能提供任何營養元素，拜激靈中的成分可能給鳊提供更加充裕的營養素；②室內養殖受應激的因素很多，譬如燈光、投喂、換水、人員走動等，可能是拜激靈的補充降低了魚類對這些因素的應激，提高其健康狀況，從而間接促進生長。

由對動物產生有害的應激因子引起的非特異性、生理性緊張狀態的現象，稱為應激（stress）。當魚類受到刺激因子的作用后，其下丘腦-垂體-腎間組織軸(HPI)會迅速作用，促進促腎上腺皮質激素（ACTH）的釋放，從而導致頭腎細胞皮質醇激素的合成與釋放。皮質醇激素并不被儲存起來而是釋放到血液循環系統中，因此，血液中皮質醇濃度可以作為衡量魚應激強度的指標。

試驗顯示，鳊對外界環境（運輸等）改變具有明顯的應激反應。將鳊置于塑料袋中運輸產生了明顯的應激刺激，皮質醇激素快速升高到原來的5倍以上。表明鳊并不能適應這種新的環境，處于較高的應激狀態。運輸情況下，鳊不僅處于陌生的環境，更重要的是由車體的顛簸造成水波的震蕩以及魚體間、容器與魚體間的撞擊對鳊的刺激更加強烈。拜激靈的補充雖然沒有將皮質醇激素含量降低到陰性對照的水平，但仍較陽性對照有明顯的緩解。

由于血液生化指標的變化是以機體組織細胞機能改變和新陳代謝變化為基礎的，血液生化指標是反映動物運輸應激時體內物質代謝和某些組織器官機能狀態變化的一個重要特征。丙氨酸轉氨酶(ALT)主要存在于肝臟組織，是肝臟損傷的重要指示酶，運輸后鳊血清ALT的升高表明肝代謝極度活躍。運輸后ALT顯著增高表明運輸應激對鳊肝臟造成了一定損傷。損傷的原因可能是皮質醇作用的結果。堿性磷酸酶（ALP）主要用于肝臟疾病時，肝細胞過度制造ALP，經淋巴道和肝竇進入血液，同時由于肝內膽道膽汁排泄障礙，反流入血而引起血清ALP明顯升高。但飼料中補充拜激靈后，BJL補充組的鳊血液中ALT和ALP都有非常顯著的下降，可見拜激靈對于緩解肝損傷有明顯效果。

恒定的血糖濃度對維持魚類正常生命活動有重要的作用。運輸后血糖有明顯的增高，這與大西洋鮭運輸后的血糖變化相同。這可能與運輸刺激后皮質醇激素增高有關。皮質類固醇可使機體各組織對葡萄糖的利用率降低，同時使肝臟的糖元異生作用增強，結果使血糖濃度升高。拜激靈有維持血糖穩定的作用。同時，拜激靈的補充對于血液甘油三酯和總膽固醇也有維持穩定的功效。

4 小結

綜上所述，鳊在運輸等強應激刺激因子作用下，皮質醇激素含量迅速升高，從而引起對機體新陳代謝和生理機能的改變。運輸應激的刺激可能導致鳊肝臟等組織的損傷，造成機體不可逆轉的生理變化，從而加速了魚體的死亡，使得鳊的運輸困難。拜激靈的補充可以有效提高鳊的抗應激能力，降低應激對肝臟等組織的損傷。

11篇，刊略，需者可函索）