HPLC法測定消癖顆粒中淫羊藿苷的含量

劉海敬

（廣州奇績醫藥科技有限公司，廣東廣州 510620）

消癖顆粒具有補腎活血、化痰散結、調攝沖任等功效，主要應用于治療乳腺增生病痰瘀互結、沖任失調證。其處方由淫羊藿、肉蓯蓉、郁金、莪術、制何首烏等組成。淫羊藿作為消癖顆粒處方中的君藥，而且用量較大，淫羊藿為其代表性有效成分。現代藥理實驗研究表明，淫羊藿能增強心腦血管血流量，促進造血功能、免疫功能及骨代謝，具有抗衰老、抗腫瘤等功能。淫羊藿的主要活性成分為淫羊藿苷。現代藥理學研究表明，淫羊藿苷具有免疫調節、抗腫瘤、影響內分泌和心血管系統等多種重要的生物活性[1]。本實驗參考相關文獻，采用HPLC法測定淫羊藿苷含量，以此作為該藥的質量控制定量指標[2-6]。

1 儀器與試藥

安捷倫1100型（安捷倫科技有限公司）；消癖顆粒（廣州奇績醫藥科技有限公司，批號：09090101、09090102、09090103）；淫羊藿苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用）；乙腈（德國默克公司，色譜純）；甲醇（德國默克公司，色譜純）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水（26.3∶73.7）為流動相，檢測波長為270 nm，流速為1.0 ml/min，柱溫為30℃。根據淫羊藿苷峰計算，理論塔板數不得低于1500，分離度大于1.5。

2.2 對照品溶液的制備

取經105℃干燥至恒重的淫羊藿苷對照品約6 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加50%甲醇約90 ml，超聲處理5 min使溶解，放冷，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取5 ml置10 ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為30 μg/ml的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品研細約1 g，精密稱定，置250 ml圓底燒瓶中，加50%甲醇約 90 ml，加熱回流提取2 h，取出，放冷，濾過，置100 ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 陰性對照液的制備

按照消癖顆粒處方自制不含淫羊藿的陰性供試品，再按照供試品溶液的處理方法制備，即得陰性溶液。

2.5 專屬性試驗

按照上述色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性溶液各10 μl，注入色譜儀，記錄色譜圖。結果供試品溶液色譜在與對照品溶液色譜相應的位置有吸收峰；而陰性對照溶液色譜圖在淫羊藿苷峰位置處無吸收峰出現，表明在此色譜條件下，供試品中其他成分對淫羊藿苷含量測定無影響，分離完全。見圖1。

2.6 方法學考察

2.6.1 線性關系和標準曲線 精密稱取淫羊藿苷對照品9.89 mg，置50 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，即得濃度為 197.8 μg/ml的對照品溶液。 精密吸取 0.5、1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0 ml對照品溶液至 10 ml量瓶中，以流動相稀釋定容至濃度為 9.89、19.78、39.56、79.12、98.9、118.68、158.24 μg/ml的系列標準溶液，用0.22 μm微孔濾膜過濾后，各取10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以淫羊藿苷峰面積A為橫坐標，濃度C為縱坐標繪制標準曲線，進行線性回歸，得回歸方程：A=16.377C-3.4987（r=0.9998），結果表明，淫羊藿苷在9.89～158.24 μg/ml范圍內線性關系良好。結果見表1。

表1 線性關系考察（n=7）Tab.1 The investigation on line ralationship(n=7)

2.6.2 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μl，按上述色譜條件重復進樣6次，測定峰面積，求得RSD值，結果表明，RSD＜2%，結果表明儀器精密度良好。見表2。

2.6.3 穩定性試驗 對同一供試品溶液分別于制備后0、2、4、8、12、24 h測定淫羊藿苷峰面積，RSD=0.09%，結果表明供試品溶液在24 h內具有良好的穩定性。見表3。

2.6.4 重復性試驗 準確稱取同一批樣品，按供試品溶液制備方法平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定含量并計算，RSD＜2%，結果表明該法重現性良好。見表4。

表2 精密度試驗（n=6）Tab.2 Precision test(n=6)

表3 穩定性試驗Tab.3 Stability test

表4 重復性試驗Tab.4 Repeatability test

2.6.5 回收率試驗 精密稱取制劑，配制成約為50 μg/ml的母液，精密稱取不同量淫羊藿苷標準品各3份，置10 ml量瓶，每瓶加入1 ml母液，流動相稀釋定容，照含量測定項下方法測定，由測得量和加入量計算回收率。平均回收率為（100.15±0.44）%，RSD 為 0.44%。 結果見表 5。

表5 回收率試驗Tab.5 Results of recovery test

2.7 樣品含量測定

取樣品3批，按照供試品的制備方法制備成供試品溶液，并進行測定。結果見表6。

表6 樣品含量測定結果（%，n=3）Tab.6 Content determination results of samples （%，n=3）

3 討論

3.1 測定波長選定

由紫外吸收圖譜可見，淫羊藿苷在270 nm和219 nm波長處有最大吸收，以270 nm靈敏度最高，與《中國藥典》中測定波長一致[7]；而219 nm易受甲醇溶劑峰的影響，故確定270 nm為檢測波長。

3.2 流動相的選擇

實驗曾采用不同比例的乙腈-水作為流動相進行實驗[8]，結果以乙腈-水（26.3∶73.7）為流動相時淫羊藿苷吸收峰與雜質吸收峰均能得到較好的分離，且其保留時間和完成樣品分析時間較為合適，故定為流動相。

3.3 提取條件優化

消癖顆粒是由10味中藥經過提取后精制而成，成分較多，實驗分別用30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇和甲醇為提取溶媒進行回流提取，結果以50%甲醇的提取量較高，且水溶性雜質干擾較少。用50%甲醇回流提取2 h，樣品中淫羊藿苷已基本提取完全。

本文對HPLC法測定消癖顆粒中淫羊藿苷的含量進行研究，結果表明HPLC法簡便、靈敏、分離效果好，不受雜質影響。試驗結果準確，重現性好，可用于消癖顆粒的質量控制。

[1]李梨,周岐新,石京山.淫羊藿苷藥理作用研究進展[J].中國藥房,2005(12):952-954.

[2]賓馳.高效液相色譜法測定乳增寧膠囊中淫羊藿苷的含量[J].中國中醫藥信息雜志,2009,12(12):47-48.

[3]唐德智.HPLC測定巴仙蓯蓉強腎膠囊中淫羊藿苷含量[J].中國藥師,2009,12(12):1750-1752.

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[5]穆金波,王艷美,曹希正.高效液相色譜法測定前列舒樂丸中淫羊藿苷含量[J].醫學信息,2009,11(11):231.

[6]陳毅鵬,陳志桃.高效液相色譜法測定藤黃健骨顆粒中淫羊藿苷的含量[J].海峽藥學,2009,21(10):47-48.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].二部.北京:化學工業出版社,2005:229.

[8]謝敏,陳在敏.HPLC測定添精補腎膏中淫羊藿苷的含量[J].中國現代中藥,2009,11(11):23-24.