魯米諾在現場潛血發現中的應用研究

侯常永 劉海東 李 學 王金祥 邢立學 李國宏

魯米諾(luminol),又名發光氨?；瘜W名稱為3-氨基鄰苯二甲酰肼?；瘜W式為C8H7N3O2,溶液顯強酸性,對眼睛、皮膚、呼吸道有一定刺激作用。通常所說的魯米諾試劑是魯米諾與過氧化氫(雙氧水的主要成分)的混合物,主要用于犯罪現場潛血的發現。血液中含有血紅蛋白,血紅蛋白含有鐵,而鐵能催化過氧化氫的分解,讓過氧化氫變成水和單氧,單氧再氧化魯米諾讓它發光。。作為催化劑,鐵、錳、鈷等金屬起到非常重要的作用,催化劑的含量越高,魯米諾發生氧化反應就越強烈,其熒光就越明亮。因為血液是一種略呈堿性的混合液體,血液里的血紅素含有鐵,可以作為催化劑使魯米諾發生氧化反應,產生藍綠色的熒光。

一、實驗材料

實驗室模擬的犯罪現場血跡和有微量血痕的衣物。

二、主要實驗試劑和儀器

(一)主要試劑

1.魯米諾(C8H7N3O2)0.1g﹑無水碳酸鈉(Na2CO3)5g﹑蒸餾水100m﹑30%雙氧水(H2O2)6ml;2.去離子水;3.Identifiler試劑盒包括10譩uffer(含Mg2)﹑TapDNA聚合酶﹑PrimerSet;4.蛋白酶K(5mg/mL);5.毛細管電泳上樣所需試劑:GS-500分子量內標﹑95%去離子甲酰胺﹑POP-4液態膠。

(二)主要儀器

1.塑料噴壺;2.超凈工作臺;3.9700型熱循環儀;4.ABI3130遺傳分析儀;5.渦漩震蕩器;6.Biofuge臺式離心機。

三﹑實驗方法

(一)血液的發現

在命案等犯罪現場勘查中,可以用魯米諾配制成堿性溶液,盛裝于噴罐內,在黑暗的室內噴灑在疑有血跡的位置或物品上。

第一,溶液的配置魯米諾溶液可以參考以下方案配制:魯米諾(C8H7N3O2)0.1g﹑無水碳酸鈉(Na2CO3)5g﹑蒸餾水100ml﹑30%雙氧水(H2O2)6ml,可以將溶液注入定制的噴罐密封。

第二,使用步驟。在使用魯米諾搜尋血跡時,首先要確定勘查人員戴好口罩等防護措施,其次須將門窗緊閉,關閉所有光源,確認房間處于完全的黑暗狀態。將噴罐內的溶液噴灑于待顯現的客體上,與客體保持距離在30～45cm,噴出的液體形成細小均勻的噴霧。用相同的方式反復噴灑兩次,并確保噴灑出的試劑霧不要太濃,以防止它擴散。

第三,將顯示熒光的部分標出,然后再進行提取,檢測。

(二)血液的提取、擴增和檢測

將顯示熒光處剪碎或者用棉簽擦拭,置于500ul的管中,用200ul無菌去離子水浸泡,室溫放置并振蕩,13000r/min離心3min,棄上清。沉淀用5%的Chelex-10050ul充分懸浮,50℃溫浴30min,充分振蕩。13000r/min離心3min,上清用于PCR擴增。

將提取的DNA進行PCR擴增反應,經過變性、退火、延伸,將擴增產物使用ABI3130遺傳分析儀電泳,并經GeneMapperIDv3.2軟件分析。

四、結果分析和討論

魯米諾與血液發生熒光反應非常敏感,主要用于現場潛血的發現,即使若干年前被清洗過的血跡,都可以通過魯米諾顯現出來。更為重要的是魯米諾的使用對后續DNA的檢驗沒有影響,完全是無損的。另外魯米諾溶液的配置方法簡單,溶液穩定,易于保存。最后魯米諾和它的溶液對人體的危害很小。

但是,魯米諾若產生熒光反應,只是說明該位置存在有血跡的可能,并不能完全肯定引起發光反應的物質就是血跡。因為魯米諾在鈷、鎳等金屬的催化下也能發生熒光反應。