薏苡仁多糖對小鼠緩解體力疲勞作用研究

肖志勇

福州省福建仙芝樓生物科技有限公司（350002）

薏苡仁為禾本科植物薏苡（Coix lachrgma-jobi varma-yuen）的種仁，據載具有“溫氣主消渴”作用，為中醫學臨床上治療“消渴”（糖尿病）常用藥物之一，薏苡仁作為常用中藥已有1500年的歷史[1]，現在又被我國衛生部列為藥食兩用的食物，作為藥食同源的作物原料，薏苡仁的保健品質令人囑目，得益于其中的薏苡仁多糖（coixan）、薏苡仁酯（coixenolide）以及特有的三萜類化合物等多種功能活性成分[2]。臨床實驗表明，薏苡仁多糖作為薏苡仁主要活性成分之一，有顯著的降血糖作用[3]，在抑制腫瘤、提高免疫機能方面有良好的功效[4]，可治療糖尿病血管并發癥[5]及扁平疣、傳染性軟疣[6]；本文旨在通過小鼠負重游泳實驗并測定相應的生化指標：血清尿素、血乳酸、肝糖原等含量的變化，研究薏苡仁多糖對緩解體力疲勞的作用。

1 材料與方法

1.1 原料

薏苡仁原料由福建省藥材公司提供，Sephadex G-75為Sigma公司產品。

1.2 供試品——薏苡仁多糖（Coixan）的提取和純化

稱取薏苡仁20.0kg加熱水（65℃）60L抽提12h，濾干后再次加入同一溫度熱水60L，提取12h，將所得抽提液混合減壓濃縮脫水，得黃色粗提物。將粗提物用蒸餾水溶解，加入等體積15%三氯醋酸（TCA）振蕩10h，使蛋白質與TCA作用生成凝膠物，3000r/min離心20min去沉淀，將上清液裝入透析袋中，流水透析7d，透析液中逐漸加入1倍量的95%乙醇沉淀，將沉淀物相繼用丙酮和乙醚洗滌，真空干燥，再將多糖用蒸餾水溶解，經Sephadex G-75柱層析，用0～1mol/L NaCl溶液梯度洗脫，硫酸－苯酚法[7]鑒定多糖部分，合并多糖反應陽性部分，用蒸餾水透析3d，減壓濃縮，得到白色多糖精品即為薏苡仁多糖，產率為0.132%。

1.3 實驗動物

上海斯萊克實驗動物有限公司提供的清潔級ICR健康小鼠，雄性，體質量18g～22g。將小鼠分為4批，每批40只，分別進行負重游泳試驗、血清尿素測定、血乳酸測定和肝糖原測定。每批動物隨機分為4組，每組10只。許可證號：SCXK（滬）2007-0006。

1.4 劑量設計

3個劑量組分別為166、333、1000mg/kgBW，即低、中、高試驗組，分別按8.3、16.6、50.0mg/mL濃度配制，另設溶劑對照組給予蒸餾水。

1.5 給藥途徑

動物每日稱重，并按2.0mL/100g體質量經口灌胃，連續30d。

1.6 主要儀器與試劑

游泳箱（50cm×50cm×40cm），TP-1000型電子天平，鉛皮，722光柵分光光度計，日立7060型全自動生化分析儀，YSI1500乳酸鹽測定儀，血乳酸試劑購自美國YSI公司，尿素試劑（G-CELL）購自北京九強生物技術有限公司（批號：070301），5%的三氯醋酸（TCA）。

表1 該樣品對小鼠負重游泳時間的影響（±s）

表1 該樣品對小鼠負重游泳時間的影響（±s）

*與對照組比較P＜0.05

組 別 動物數(只) 初重(g) 末重(g) P 游泳時間(s) P對照組 10 19.2±0.9 39.5±1.8 / 657±116 /低劑量組 10 19.2±1.0 39.2±1.9 0.723 684±162 0.633中劑量組 10 19.1±0.9 38.9±1.9 0.479 850±80* 0.001高劑量組 10 19.1±1.1 40.2±1.9 0.409 771±125* 0.048

表2 該樣品對小鼠運動時血清尿素的影響（±s）

表2 該樣品對小鼠運動時血清尿素的影響（±s）

*與對照組比較P＜0.05

組 別 動物數(只) 初重(g) 末重(g) P 血清尿素(mmol/L) P對照組 10 19.8±1.0 40.1±1.9 / 8.02±0.76 /低劑量組 10 19.9±1.4 39.2±1.5 0.246 8.37±1.22 0.408中劑量組 10 19.9±1.2 40.3±1.6 0.795 7.71±0.72 0.453高劑量組 10 19.8±1.3 39.6±1.7 0.409 6.91±0.76* 0.042

表3 該樣品對小鼠肝糖原含量的影響（±s）

表3 該樣品對小鼠肝糖原含量的影響（±s）

*與對照組比較P＜0.05

組 別 動物數(只) 初重(g) 末重(g) P 肝糖原(mg/100g) P對照組 10 19.6±1.4 40.1±1.8 / 1275±306 /低劑量組 10 19.5±1.4 39.4±1.4 0.392 1347±50 0.981中劑量組 10 19.5±1.4 39.5±2.3 0.462 1852±134* 0.001高劑量組 10 19.6±1.4 39.8±1.6 0.712 1638±580 0.477

表4 該樣品對小鼠血乳酸曲線下面積的影響（±s）

表4 該樣品對小鼠血乳酸曲線下面積的影響（±s）

*與對照組比較P＜0.05

組 別 動物數(只) 初重(g) 末重(g) P 血乳酸曲線下面積(mmol/L) P對照組 10 20.0±1.2 39.8±2.0 / 123.03±19.31 /低劑量組 10 20.1±1.4 40.1±2.4 0.762 89.49±18.86* 0.000中劑量組 10 20.0±1.2 39.0±2.5 0.422 95.26±17.64* 0.002高劑量組10 19.9±1.4 39.7±1.8 0.920 83.04±17.12* 0.000

1.7 實驗數據統計方法

實驗數據以SPSS軟件進行單因素方差分析。經方差齊性檢驗，方差齊的實驗數據采用LSD法進行統計分析，對方差不齊或非正態的實驗數據先進行變量轉換再進行統計。

1.8 試驗方法[8]

1.8.1 負重游泳試驗

小鼠于末次給予受試物30min后，使尾部負重5%重的鉛皮，放入水深30cm，水溫（25±1.0）℃游泳箱內，記錄小鼠自游泳開始至死亡的時間，作為小鼠游泳時間。

1.8.2 血清尿素測定

小鼠于末次給予受試物30min后，放入水深30cm，溫度30℃的水箱中不負重游泳90min，休息60min后拔眼球采全血約0.5mL，置4℃冰箱約3h，血凝固后2000rpm離心15min，取上層血清用全自動生化儀測定。

1.8.3 肝糖原測定

末次給予受試物30min后，處死動物，取肝臟經生理鹽水漂洗后，用濾紙吸干，精確稱取肝臟100mg，加入8mL 5%的三氯醋酸，每管勻漿1min，將勻漿液倒入離心管，以3000rpm離心15min，將上清液轉移至另一試管內，取1mL上清液放入10mL離心管中，每管加入95%的乙醇4mL，充分混勻至兩液體間不留有界面。塞子塞上于室溫下豎立放置過夜。沉淀完全后，3000rpm離心15min，去上清液后倒置10min，用2mL蒸餾水溶解糖原，用蒽酮法在620nm波長比色測定肝糖原。

1.8.4 血乳酸測定

末次給予受試物30min后，眼靜脈采血20UL，立即放入水溫30℃水中游泳，每隔1min放入一只，游泳10min后立即取出，擦干水分，各采血20UL，安靜20min后再采血20UL.將每次所采的血放入40UL的溶血劑中振蕩，振蕩均勻后，于YSI1500型血乳酸測定儀中測定血乳酸。

2 結 果

2.1 該樣品對小鼠負重游泳時間的影響

由表1可見，該樣品可延長各劑量組小鼠負重游泳時間，其中中、高劑量組與對照組相比差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 該樣品對小鼠運動后血清尿素的影響

由表2可見，該樣品各劑量組小鼠運動后產生的血清尿素的含量與對照組相比，高劑量組與對照組相比差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.3 該樣品對小鼠肝糖原的影響

由表3可見，該樣品使中劑量組小鼠肝糖原含量增加，與對照組相比差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.4 該樣品對小鼠3個時間點血乳酸曲線下面積的影響

由表4可見，該樣品使各劑量組小鼠血乳酸曲線下面積減少，與對照組相比差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討 論

疲勞是機體在一定環境條件下，由于長時間或過度緊張的體力或腦力勞動而引起的勞動效率趨向下降的狀態，它是機體的一種防御反應，是機體組織和器官興奮性下降而帶來工作效率的降低。運動耐力的提高是抗疲勞能力加強的最直接表現，游泳時間的長短可以反應動物運動疲勞的程度。本實驗顯示服用薏苡仁多糖30d后，小鼠的游泳時間明顯長于未服用的對照組小鼠，從而反映出薏苡仁多糖能提高運動耐力，即提高了機體對運動的負荷能力；體力活動時主要靠糖原酵解來獲得能量，薏苡仁多糖能通過提高肝糖原的儲備量，延緩疲勞的產生，增強運動能力。運動后血清尿素和血乳酸含量的變化是機體對運動而產生的代謝產物分解能力的表現，本次試驗可見薏苡仁多糖能降低運動后小鼠血清尿素的產生，減少血乳酸曲線下面積，反映出薏苡仁多糖能加速機體清除代謝產物，可以加速疲勞的消解。

綜上所述，薏苡仁多糖在本實驗條件下具有提高機體對運動負荷的適應能力，在延緩體力疲勞的產生和加速疲勞的消除方面也有明顯作用，因此具有緩解體力疲勞的作用。

[1]江蘇新醫學院.中藥大辭典[M].北京:人民衛生出版社,1997:2646.

[2]呂峰,楊彩霞,姜艷梅,等.不同產地薏苡仁的保健與加工品質[J].福建農林大學學報(自然科學版),2008,37(4):431.

[3]徐梓輝,周世文,黃林清.薏苡仁多糖的分離提取及其降血糖作用的研究[J].第三軍醫大學學報,2000,22 (6):578.

[4]顧關云.薏苡仁的藥理作用[J].中成藥,1994,38(6):205.

[5]徐梓輝,周世文,陳衛,等.薏苡仁多糖對2型糖尿病大鼠主動脈內皮素1基因表達的影響[J].中國動脈硬化雜志,2006,14(3):194.

[6]胡烈.薏苡仁臨床新用舉隅[J].中國臨床醫生,2001,29(10):54.

[7]Dubois M,Gilles KA,Hamilton JK,et al.Colorimetric method for determination of sugars and related substances[J].Anal Chem,1956,28(3):350.

[8]衛生部.保健食品檢驗與評價技術規范(2003年版)[S].2003:81.