濾袋法快速測定飼料中粗脂肪和總脂肪

張麗英 隋連敏 楊文軍

脂肪含量高低是衡量飼料質(zhì)量和營養(yǎng)價值高低的重要指標(biāo)之一，因此脂肪測定早已成為飼料常規(guī)分析項目。目前飼料中脂肪測定多依據(jù)《飼料中粗脂肪的測定》GB/T6433—2006，該標(biāo)準(zhǔn)等同采用了國際標(biāo)準(zhǔn)ISO 6492：1999《動物飼料中粗脂肪含量的測定》，并且與1994版的主要差異是增加了水解方法。多數(shù)植物性飼料中的油脂非常容易用石油醚等直接提取出來，但對于動物性飼料和經(jīng)過膨化、制粒等熱處理的飼料，有一部分脂肪呈結(jié)合態(tài)，因此要想獲得準(zhǔn)確的總脂肪含量，需要先進(jìn)行酸水解預(yù)處理，然后再進(jìn)行提取。對于這些樣品，如果不經(jīng)過水解，脂肪測定結(jié)果會大大低于實際含量。

由于現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T6433—2006中增加了水解方法，如何準(zhǔn)確有效操作成了大家所關(guān)心的問題。如果按照標(biāo)準(zhǔn)中所描述的步驟，非常繁瑣且不容易準(zhǔn)確掌握、操作，難以確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。目前不僅企業(yè)的化驗員，即使是檢測機構(gòu)的專職檢測人員也覺得不好把握。如何根據(jù)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的原理，尋找一種簡捷而可靠的測定方法是從事飼料分析人員在實際工作中迫切需要的。本文著重介紹一種目前在歐美廣泛使用的濾袋法，來快速測定飼料中粗脂肪和總脂肪，并對測定結(jié)果與傳統(tǒng)方法進(jìn)行比較評價。

1 濾袋法測定飼料中的粗脂肪

1.1 適用范圍

該方法適用于GB/T6433—2006《飼料中粗脂肪的測定》中定義的A類樣品，即除B類樣品以外的所有動物飼料。B類樣品主要包括：純動物性飼料，包括乳制品；脂肪不經(jīng)水解不能提取的純植物性飼料，如谷蛋白、酵母、大豆及馬鈴薯蛋白以及熱處理的飼料（如制粒、膨化等）；含有一定數(shù)量加工產(chǎn)品的配合飼料、濃縮飼料，其20%脂肪來自加工產(chǎn)品。

1.2 方法提要

將試樣在103℃條件下烘干，然后用石油醚等在一定溫度條件下進(jìn)行提取，提取前后試樣質(zhì)量減少部分占試樣質(zhì)量百分比即為試樣中粗脂肪含量。

1.3 儀器設(shè)備

分析天平：精度0.1 mg。干燥箱：溫度控制（103±2）℃。脂肪提取儀：ANKOM XT15，工作溫度（90±2）℃。濾袋：ANKOM XT14，孔徑 1 μm。封口機、干燥器，記號筆：耐酸和其他溶劑。

1.4 測定步驟

①將標(biāo)記好的濾袋放在天平上，并回零；②稱取0.75～1.0 g試樣置于濾袋中，記錄質(zhì)量（m1）；③用封口機在離濾袋上沿約4 mm處完全熱封，冷卻2 s；④將濾袋置于103℃條件下干燥3 h，干燥結(jié)束，快速從干燥箱中取出來放入干燥器中，冷卻至室溫并記錄質(zhì)量（m2）；⑤將濾袋擺放在脂肪分析儀的樣品架上，每批可以放15個（包括空白濾袋），然后將其放入脂肪分析儀的缸體內(nèi)。按照脂肪分析儀屏幕指示操作，設(shè)定時間60 min，溫度90℃；⑥測定結(jié)束，取出帶濾袋的樣品支架，并將濾袋置于103℃干燥箱中干燥1 h；⑦將濾袋放入干燥器中冷卻至室溫,并稱重（m3）。

1.5 結(jié)果計算

試樣中粗脂肪含量按照公式（1）計算。

式中：m1——試樣質(zhì)量，g；

m2——浸提前烘干后試樣+濾袋質(zhì)量，g；

C1——浸提前空白袋干燥后質(zhì)量，g；

C2——脂肪提取后空白袋干燥后質(zhì)量，g；

m3——浸提后樣品+濾袋烘干后質(zhì)量，g。

2 濾袋法飼料中總脂肪的測定

2.1 適用范圍

本方法適用現(xiàn)行GB/T6433—2006《飼料中粗脂肪測定》中所規(guī)定的B類樣品（見本文1.1部分）。

2.2 方法提要

首先將試樣用鹽酸溶液水解，釋放結(jié)合態(tài)油脂，然后用石油醚等溶劑在一定溫度條件下進(jìn)行提取。提取前后試樣質(zhì)量減少部分占試樣質(zhì)量百分比即為試樣中總脂肪含量。

2.3 儀器設(shè)備

鹽酸水解系統(tǒng)：ANKOM HCI,溫度控制（90±2）℃。

硅藻土：用6 mol/l鹽酸溶液消煮30 min，然后用水沖洗至中性，并在130℃烘箱中干燥，備用。

其他同粗脂肪測定。

2.4 試劑與溶液

石油醚：沸點40～60℃。鹽酸溶液：3 mol/l。

2.5 測定步驟

①將標(biāo)記好的濾袋放在天平上，并回零；②當(dāng)試樣中脂肪含量超過20%，需要在濾袋中先稱取0.5～1 g硅藻土，并回零；③稱取0.75～1.0 g試樣置濾袋中，記錄質(zhì)量（m1），每個袋中的硅藻土和試樣干燥后的質(zhì)量不能超過1.5 g；④用封口機在離濾袋上沿4 mm處完全熱封，冷卻2 s，然后搖動濾袋，使試樣和硅藻土混合均勻；⑤將試樣放入鹽酸水解系統(tǒng)的樣品架上，每批可以放15個（包括空白濾袋），然后將其放入水解系統(tǒng)的缸體內(nèi)，加3 mol/l鹽酸溶液500 ml，并按照儀器屏幕指示操作，設(shè)定時間60 min，水解溫度90℃，水淋洗20 min；⑥當(dāng)水解結(jié)束，將濾袋連同支架一起從水解系統(tǒng)中取出來，鋪平濾袋，在兩層吸水紙之間輕輕擠壓，以除掉濾袋中殘存的水；⑦將濾袋置于103℃條件下干燥箱中干燥3 h，干燥結(jié)束，快速從干燥箱中取出來放入干燥器中，冷卻至室溫并記錄質(zhì)量（m2）；⑧將濾袋擺放在脂肪分析儀的樣品架上，每批可以放15個（包括空白濾袋），然后將其放入脂肪分析儀的缸體內(nèi)，按照脂肪分析儀屏幕指示操作，設(shè)定時間60 min，溫度90℃；⑨測定結(jié)束，將濾袋取出來，置于103℃干燥箱中干燥1 h；⑩干燥結(jié)束，將濾袋放在干燥器中冷卻至室溫，并稱重（m3）。

2.6 結(jié)果計算

試樣中總脂肪含量按照公式（2）計算。

式中：m1——試樣質(zhì)量，g；

m2——水解后試樣+濾袋+硅藻土烘干后質(zhì)量，g；

C1——水解后空白袋干燥后質(zhì)量，g；

C2——脂肪提取后空白袋烘干后質(zhì)量，g；

m3——浸提后樣品+濾袋烘干后質(zhì)量，g。

3 結(jié)果比較與評價

3.1 與傳統(tǒng)方法比較

濾袋法與傳統(tǒng)方法飼料中脂肪測定結(jié)果比較見表1。由表1可以看出，所比較的10種飼料原料或產(chǎn)品，其脂肪含量覆蓋范圍比較寬，最低不到0.5%，最高則超過40%，但無論脂肪含量高與低，濾袋法與傳統(tǒng)方法測定結(jié)果相同或非常接近。

表1 濾袋法與傳統(tǒng)方法飼料中脂肪結(jié)果比較（%）

3.2 聯(lián)合實驗結(jié)果

濾袋法已經(jīng)獲得美國油脂協(xié)會（AOCS）的批準(zhǔn)（AOCS Approved Procedure Am 5-04）。表2為AOCS組織的聯(lián)合實驗結(jié)果。由表2可以看出，選用了7種典型飼料原料和產(chǎn)品作為比對樣品，參加實驗室數(shù)量為10～12個。采用濾袋法全體實驗室結(jié)果平均值與有資質(zhì)實驗室采用AOCS Official Methods Ba 3-38,AOAC 920.39或其他公認(rèn)方法測定結(jié)果平均值相同或非常接近，并且有比較好的重復(fù)性和再現(xiàn)性。

若干篇，刊略，需者可函索）