醋氯芬酸緩釋片和普通片體內(nèi)外釋藥行為的相關(guān)性研究

謝 魑

（四川省攀枝花市第二人民醫(yī)院藥劑科，四川 攀枝花 617001）

醋氯芬酸（aceclofenac）是一種新型口服強(qiáng)效非甾體抗炎藥，化學(xué)名為2-[（2，6-二氯苯基）氨基]苯乙酰氧基乙酸，用于治療骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊椎炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、并行性骨關(guān)節(jié)炎等引起的疼痛和炎癥[1]。醋氯芬酸為雙氯芬酸鈉的衍生物，通過(guò)抑制環(huán)氧酶和脂氧合酶而產(chǎn)生抗炎、鎮(zhèn)痛作用，1992年首次在西班牙上市，1997年在美國(guó)、英國(guó)上市。醋氯芬酸口服吸收完全，生物利用度達(dá)99%，1.25～3 h達(dá)血藥濃度峰值，生物半衰期為4～4.3 h，臨床上常規(guī)給藥劑量為每日200 mg，分2～3次服藥。但普通口服制劑血藥濃度波動(dòng)大，患者依從性差，不利于臨床治療。一日一次的緩釋制劑則符合臨床發(fā)展的需要，可有效地避免體內(nèi)血藥濃度的峰谷現(xiàn)象，減少因峰濃度導(dǎo)致的藥物副作用，從而提高患者的順應(yīng)性。我院陸續(xù)引進(jìn)了醋氯芬酸的普通片和緩釋片，筆者對(duì)其體外釋放和Beagle犬體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)情況進(jìn)行了對(duì)比研究，分析兩種制劑的體內(nèi)-體外相關(guān)性，旨在為臨床用藥提供參考。

1 儀器、試藥及動(dòng)物

ZRCD6-B型藥物溶出度測(cè)定儀（均為上海黃海藥檢儀器廠）；UV-9100型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器公司）；離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；HPLC Pump L-7110，UV-VIS Detectorl L-7420（Hitachi）。醋氯芬酸（江西同和藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)為20080321），醋氯芬酸片（商品名為美諾芬，西安海欣制藥有限公司）；醋氯芬酸緩釋片（浙江尖峰藥業(yè)有限公司）；其他試劑均為分析純。健康Beagle犬6只，由本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雌雄各半，體重 9.5～11 kg。

2 方法與結(jié)果

2.1 體外釋放度試驗(yàn)

2.1.1 輔料干擾試驗(yàn)

按照配方量稱取各輔料，溶于溶出介質(zhì)中，在200～400 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果表明，在275 nm波長(zhǎng)附近輔料無(wú)吸收，對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密稱取醋氯芬酸100 mg，用磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）溶解，定容至 100 mL，分別精密量取 0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 mL，置50 mL量瓶中，以磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）定容，搖勻，于275 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，用吸光度（A）與質(zhì)量濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 C=40.611A-0.179 4，r=0.999 9（n=7）。

2.1.3 釋放度測(cè)定

參照2005年版《中國(guó)藥典（二部）》釋放度測(cè)定法第一法。溶出介質(zhì)選用磷酸鹽緩沖液（pH=6.8），轉(zhuǎn)速50 r/min，介質(zhì)溫度37℃。分別于 2，4，6，8，10，12，14，24 h 時(shí)取樣 5 mL，過(guò) 0.8 μm 微孔濾膜，并及時(shí)補(bǔ)充同體積溶出介質(zhì)。取續(xù)濾液稀釋后，于275 nm處測(cè)定，計(jì)算醋氯芬酸累積釋放百分率。醋氯芬酸普通片和緩釋片體外溶出釋放結(jié)果見(jiàn)圖1。可見(jiàn)，普通片在服用后幾乎立即溶解，而緩釋片可以持續(xù)緩慢釋藥達(dá)15 h。

圖1 醋氯芬酸普通片和緩釋片體外溶出釋放曲線（n=6）

2.2 Beagle犬體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（200 nm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（0.3%三乙胺）=60∶40，磷酸調(diào)pH為7.0；檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃ ；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2.2 溶液配制

分別配制1.0 mg/mL的醋氯芬酸甲醇溶液和1.0 mg/mL的安定乙腈溶液（內(nèi)標(biāo)），作為貯備液，于4℃保存。臨用前將貯備液精密稀釋，作為工作液，用于制備標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)量控制樣品；將內(nèi)標(biāo)貯備液精密稀釋至75 μg/mL，作為內(nèi)標(biāo)液每份樣品加入200 μL。

2.2.3 血漿樣品預(yù)處理

取血漿樣品0.5 mL，置2.0 mL Ep管中，加入75 μg/mL的內(nèi)標(biāo)液 200 μL，渦旋 1 min，加乙腈 800 μL 作為蛋白沉淀劑，渦旋 3 min，離心（10 000 r/min）10 min，取上清液進(jìn)樣。

2.2.4 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：在上述色譜條件下，將空白血漿、空白血漿加對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)、Beagle犬服藥后6 h血漿的色譜圖進(jìn)行比較。醋氯芬酸和內(nèi)標(biāo)的峰形良好，保留時(shí)間分別為14.2 min和20.7 min?？瞻籽獫{中的內(nèi)源性物質(zhì)、其他雜質(zhì)和代謝產(chǎn)物不干擾測(cè)定（圖2）。

圖2 醋氯芬酸高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取空白 Beagle犬血漿 500 μL，加入不同質(zhì)量濃度的醋氯芬酸工作液50 μL，配制成質(zhì)量濃度范圍為0.5～100 μg/mL的血漿樣品，渦旋1 min后加入內(nèi)標(biāo)，按2.2.3項(xiàng)下方法操作，進(jìn)樣測(cè)定。以醋氯芬酸和內(nèi)標(biāo)的峰面積比值（Y）與藥物質(zhì)量濃度（X，μg/mL）作線性回歸，得回歸方程 Y=0.119 2 X+0.007，r=0.991 0。結(jié)果表明，醋氯芬酸質(zhì)量濃度線性范圍是0.5～100 μg/mL。將醋氯芬酸在血漿中的最低定量限定為0.5 μg/mL。

精密度試驗(yàn)：取低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度醋氯芬酸工作液制備的血漿樣品，各6份，按2.2.3項(xiàng)下方法操作，于日內(nèi)測(cè)定3次和連續(xù)3 d測(cè)定，計(jì)算日內(nèi)和日間精密度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 日內(nèi)和日間精密度測(cè)定結(jié)果

回收率試驗(yàn)：取空白血漿500 μL，加入低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度醋氯芬酸工作液，配制成質(zhì)量濃度為1，5，50 μg/mL的血漿樣品，每一濃度平行操作6份，按2.2.3項(xiàng)下方法操作，依法進(jìn)行測(cè)定。同時(shí)測(cè)定低、中、高3種質(zhì)量濃度未經(jīng)制備的質(zhì)量控制樣品，并與相同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品制備成血漿樣品后測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較，計(jì)算絕對(duì)回收率。結(jié)果回收率分別為88.7%，91.1%，97.3%，RSD 分別為 8.7%，3.0%，0.7%（n=6）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別配制質(zhì)量濃度為1，5，50 μg/mL的模擬血漿樣品各3份，按2.2.3項(xiàng)下方法操作，室溫放置12 h后分析。結(jié)果表明，處理后的醋氯芬酸血漿樣品室溫放置12 h穩(wěn)定（相對(duì)誤差為8.7%，7.4%，1.3%），經(jīng)過(guò)3次冷凍解凍循環(huán)后亦穩(wěn)定（相對(duì)誤差為3.3%，-5.3%，-12.3%）。

2.2.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

將6只Beagle犬隨機(jī)分成兩組，并隨機(jī)確定服藥順序，分別服用醋氯芬酸普通片（參比制劑）和醋氯芬酸緩釋片（受試制劑），給藥劑量均為200 mg。試驗(yàn)前禁食12 h，分別于給藥前和給藥后0.5，1，2，3，4，6，8，10，12，14，24 h 時(shí)取靜脈血 3 mL，離心取血漿，于-20℃保存。間隔1周后進(jìn)行交叉試驗(yàn)。藥時(shí)曲線見(jiàn)圖3?？梢?jiàn)，醋氯芬酸緩釋片的達(dá)峰時(shí)間（tmax）延長(zhǎng)，峰濃度（Cmax）降低，體內(nèi)平均駐留時(shí)間顯著延長(zhǎng)，體現(xiàn)了緩釋制劑藥物濃度變化平穩(wěn)、且維持時(shí)間長(zhǎng)的特點(diǎn)。

圖3 Beagle犬口服受試制劑和參比制劑后平均血藥濃度-時(shí)間曲線（n=6）

2.3 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

將血藥濃度數(shù)據(jù)用DAS 2.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行有關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)求算，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 Beagle犬口服醋氯芬酸普通片和緩釋片的平均藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（X ± s，n=6）

2.4 體外釋放和體內(nèi)吸收相關(guān)性分析

經(jīng)擬合，醋氯芬酸緩釋片Beagle犬體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)為二室模型，體內(nèi)吸收百分?jǐn)?shù)（Fa）采用Loo-Riegelman方法（L-R法）計(jì)算：

式中（XA）t是 t時(shí)間吸收到人體內(nèi)的藥物量，（XA）∞是體內(nèi)吸收的藥物總量，Ct是 t時(shí)間的血藥濃度，k10為藥物從中央室消除的一級(jí)速率常數(shù)，Xp為周邊室內(nèi)藥物量，Vc為中央室表觀分布容積。

將 t時(shí)間體內(nèi)吸收百分?jǐn)?shù)與相應(yīng)時(shí)間體外累積釋放百分率進(jìn)行線性回歸，根據(jù)回歸系數(shù)來(lái)判斷體內(nèi)外相關(guān)性是否顯著。結(jié)果見(jiàn)表 3。以 2～8 h體外累積釋放百分率為自變量，體內(nèi)吸收百分?jǐn)?shù)為因變量，線性回歸方程Y=0.601 4X+0.293 5，r=0.967 0（ n=6）。結(jié)果表明，醋氯芬酸緩釋片體內(nèi)外相關(guān)性較好。

3 討論

在預(yù)試驗(yàn)中使用了蒸餾水、pH=1.2的鹽酸溶液、4‰聚氧乙烯烷基硫酸鈉（SLS）以及pH=4.5的醋酸-醋酸銨緩沖液作為溶出介質(zhì)。由于醋氯芬酸溶解度太小，不能滿足漏槽條件，因此釋放速率極其緩慢，24 h不能完全釋放。在pH=4.5醋酸-醋酸銨緩沖液中，因不能形成良好的凝膠1層，藥物只能通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散方式釋放到溶出介質(zhì)中，在24 h內(nèi)同樣不能將藥物完全釋放出來(lái)。在pH=6.8的磷酸鹽緩沖液中，藥物骨架能較快形成凝膠層，藥物通過(guò)擴(kuò)散及凝膠溶蝕而釋放到介質(zhì)中，24 h的殘留量很少；醋氯芬酸的溶解度（13.53 g/L）遠(yuǎn)大于0.22 g/L，符合漏槽條件；且pH=6.8的磷酸鹽緩沖液又較其他介質(zhì)更接近生理?xiàng)l件。因此，采用pH=6.8磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)。

表3 體外累積釋放百分率和體內(nèi)吸收百分?jǐn)?shù)（%）

對(duì)圖2中醋氯芬酸緩釋片釋放度曲線分別進(jìn)行零級(jí)、一級(jí)、Hixon Crowell方程以及Higuchi方程模型擬合，結(jié)果零級(jí)為 Q=4.16t+5.29（r=0.984 7），一 級(jí) 為 ln（100-Q）=-0.124t+4.814（r=0.977 0），Higuchi方程為 Q=20.61 t1/2-9.62（r=0.977 6），Hixon Crowell方程為（100-Q）1/3=-0.125t+4.741（r=0.997 7），其中 Q為藥物釋放百分率（% ），t為藥物釋放時(shí)間（h）?？梢?jiàn)，用Hixon Crowell方程較好，可以用其描述藥物在體外的釋放過(guò)程。而藥物的具體釋放機(jī)制則用方程 Q=Ktn（K為常數(shù)）來(lái)評(píng)價(jià)，通過(guò)擬合得到 n值為0.788（r=0.996 2），符合非Fickian擴(kuò)散機(jī)制，藥物釋放是親水凝膠溶蝕與藥物擴(kuò)散共同作用的結(jié)果。由于 n值在0.45與0.89間但更接近0.89，可以推測(cè)，這兩種機(jī)制中凝膠溶蝕作用為主[2]。動(dòng)物試驗(yàn)顯示，醋氯芬酸緩釋片具有緩釋特征，與普通片吸收程度生物等效[3]。本院引進(jìn)的醋氯芬酸緩釋片為親水凝膠緩釋骨架片，制劑遇水后骨架材料吸水形成凝膠，可通過(guò)凝膠層的黏度和厚度控制藥物的釋放速度。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，醋氯芬酸緩釋片的血藥濃度平穩(wěn)，與普通片相比可較長(zhǎng)時(shí)間保持有效血藥濃度，由于每天僅需服藥1次，增加了患者的順應(yīng)性，值得向臨床推薦。

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