CDK4、PTEN蛋白與子宮內膜癌浸潤轉移的關系

車力凡 孫鈺 邵素芳

子宮內膜癌為女性生殖道常見惡性腫瘤之一，近年來，其發病率呈上升趨勢，在歐美一些國家子宮內膜癌發病率已躍居婦科惡性腫瘤之首位，國內亦趨接近甚至超過子宮頸癌。雖然近年來采取了以手術為主的多學科綜合治療，但是由于局部復發或遠處轉移，子宮內膜癌的死亡率仍無明顯下降。本研究采用免疫組化S-P法檢測50例子宮內膜癌組織和12例不典型增生子宮內膜及10例正常子宮內膜組織中細胞周期素依賴性蛋白激酶(Cyclin dependent kinase-4，CDK4)和10號染色體丟失的與張力蛋白同源的磷酸酶基因(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，PTEN)蛋白的表達情況，并與臨床病理因素相聯系，以探討兩者的表達與子宮內膜癌浸潤轉移的關系。為臨床上尋找判斷子宮內膜癌浸潤轉移的新的生物學標志物提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 標本來源 取濰坊市益都中心醫院2000年5月～2005年6月手術切除的子宮內膜癌患者標本50例，不典型增生子宮內膜組織標本12例及正常子宮內膜標本10例。所有標本均經病理檢查證實。其中子宮內膜癌患者平均年齡54.5歲，按FIGO(1989)臨床分期Ⅰ期36例，Ⅱ期8例，Ⅲ期6例。病理分級按FIGO(1988年)分級標準G1 24例，G2 21例，G3 5例，所有患者術前均未作任何治療。不典型增生子宮內膜患者年齡平均38.7歲。按ISGP(1987年)標準，輕度不典型增生3例，中度不典型增生3例，重度不典型增生6例。正常子宮內膜患者中平均年齡43.4歲，均為子宮肌瘤手術切除的子宮標本。

1.2 試劑 即用型兔抗人CDK4多克隆抗體，即用型兔抗人P T E N多克隆抗體，即用型免疫組化超敏UitraSensitiveTMS-P試劑盒，以上試劑均購自武漢博士德生物技術有限公司。

1.3 免疫組化染色及結果判定 染色步驟嚴格按照試劑盒說明進行，以PBS代替一抗作陰性對照，人乳腺癌組織作陽性對照。CDK4、PTEN蛋白陽性染色標準為細胞質出現棕黃色、棕褐色顆粒，染色強度高于背景非特異性染色為準，高倍鏡下(40×10)取10個不同視野，并計算視野內陽性細胞百分率，陽性細胞＞25%為陽性，≤25%為陰性。見圖1、圖2。

1.4 統計學方法 應用SPSS11.5統計軟件包進行分析，所得計數資料用x2檢驗比較組間的差異。顯著檢驗水準α取0.05。

2 結果

2.1 第一階段結果

2.1.1 CDK4蛋白在不同性質子宮內膜組織細胞中的表達CDK4在正常子宮內膜中的陽性表達率為30.0%，在不典型增生子宮內膜組織中的陽性表達率為66.7%，在子宮內膜癌組織中的陽性表達率為72.0%，見圖1不典型增生子宮內膜和子宮內膜癌組織中的陽性表達率與正常子宮內膜兩者相比，差異具有顯著性(P＜0.05)。子宮內膜癌與不典型增生子宮內膜組織陽性表達率相比，差異無顯著性(P＞0.05)。見表1。

2.1.2 CDK4蛋白在不同臨床分期子宮內膜癌組織細胞核中的表達 CDK4蛋白表達隨FIGO臨床分期上升有增高趨勢，子宮內膜癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期陽性表達率分別為58.3%、87.5%、100.0%。Ⅱ期及Ⅲ期陽性表達率為92.8%，與Ⅰ期比較，有顯著性差異(P＜0.05)。見表1。

2.1.3 CDK4蛋白在不同組織學分級子宮內膜癌組織細胞核中的表達 CDK4蛋白在G1、G2、G3級的陽性表達率分別為62.5%、80.8%、80.0%，G2及G3組CDK4蛋白陽性表達率為80.7%，與G1比較，有顯著性差異(P＜0.05)。見表1。

2.1.4 CDK4蛋白在不同肌層浸潤深度子宮內膜癌組織細胞核中的表達 CDK4蛋白在無肌層浸潤或浸潤深度＜1/2組陽性表達率為56.0%，浸潤肌層＞1/2或有淋巴結轉移組陽性表達率為88.0%，兩組相比，其陽性表達率有顯著性差異(P＜0.05)。見表1，表2。

2.1.5 CDK4蛋白在復發子宮內膜癌組織細胞核中的表達 隨訪41例病人，26例無復發，其中CDK4陽性表達率為57.7%(15/26)，15例復發患者中陽性表達率為93.3%(14/15)，兩者比較差異有顯著性(P＜0.05)。

2.2 第二階段結果

2.2.1 PTEN蛋白在不同性質子宮內膜組織細胞中的表達PTEN在正常子宮內膜中的陽性表達率為100.0%見圖2。在12例不典型增生子宮內膜組織中的陽性表達率為91.0%，在子宮內膜癌組織中的陽性表達率為56.0%，子宮內膜癌組織中的陽性表達率與正常子宮內膜和不典型增生子宮內膜相比，差異具有顯著性(P＜0.05)。正常子宮內膜和不典型增生子宮內膜組織陽性表達率相比，差異無顯著性(P＞0.05)。見表2。

2.2.2 PTEN蛋白表達與子宮內膜癌臨床病理特征的關系PTEN蛋白在子宮內膜癌Ⅰ期中的陽性率高于Ⅱ-Ⅲ期，但差異無統計學意義(x2=0.28，P=0.594)；組織學分級中G1、G2、G3級的PTEN蛋白陽性表達率分別為54.2%、61.9%、40.0%。三者間比較，差異均無顯著性(P＞0.05)；無浸潤或肌層浸潤＜1/2與肌層浸潤＞1/2 組相比，差異有顯著性(x2=8.2，P＜0.05)。見表2。

2.2.3 子宮內膜癌組織中CDK4、PTEN蛋白表達的相關性CDK4、PTEN蛋白在本組50例子宮內膜癌組織中的表達差異無顯著性(P＞0.05)。即兩者在子宮內膜癌組織中的表達無相關性。

表1 三種不同組織細胞中CDK4蛋白表達的比較

表2 子宮內膜癌中CDK4與PTEN蛋白表達的相關性

表3 三種不同組織細胞中PTEN蛋白表達的比較

圖1 CDK4在子宮內膜癌中的陽性表達

圖2 PTEN蛋白在正常子宮內膜中的陽性表達

3 討論

細胞周期素依賴性蛋白激酶-4(Cyclin dependen的CDK4 cD t kinase-4，CDK4)基因位于12q 13染色體上，人NA長534bp，編碼34個氨基酸的蛋白質[1]。作為周期蛋白激酶，它被Cyclin D激活形成復合物，而直接促進G1/S轉換[2]。其作用機制主要是由Cyclin D與CDK4形成復合物，磷酸化其底物如Rb等，釋放轉錄因子E2E使DNA合成得以進行，細胞由G1期進入S期。目前，在多種腫瘤細胞如黑色素瘤、神經膠質瘤、家族型腸息肉病、大腸癌等中均發現CDK4的基因擴增和蛋白表達失調[3-6]，認為CDK4異常表達可促進腫瘤的發展，并具有早期診斷和判斷預后的價值[7-8]。本研究表明CDK4在子宮內膜癌中Ⅱ-Ⅲ期細胞核中過度表達率明顯高于Ⅰ期，提示CDK4與子宮內膜癌的病程進展有關；而且CDK4在組織學分級G2-G3中的過度表達率明顯高于G1者，推測其對腫瘤分化、發展有促進作用；與部分文獻報道一致。Dong等[9]對CDK4在喉癌組織標本中免疫組化研究中發現，CDK4的表達異常與總生存率顯著相關，具有很好的預后價值。即CDK4在浸潤肌層＞1/2或有淋巴結轉移組陽性表達率高于無肌層浸潤或浸潤深度＜1/2組陽性表達率。CDK4作為細胞周期正向調節因子，當其過度表達時，可加速細胞增殖，促進腫瘤細胞異常增生、浸潤和腫瘤復發而導致預后不良。

PTEN基因是第一個被發現具有磷酸酶活性的抑癌基因，其所編碼的PTEN蛋白是一種具有雙特異去磷酸化作用的磷酸酶。PTEN蛋白在多種腫瘤中缺失或減低表達與腫瘤的發生、發展關系密切，也是某些腫瘤的獨立預后因素。PTEN通過誘導細胞周期阻滯和細胞凋亡等抑制腫瘤發生發展。最近研究發現，PTEN能多途徑的抑制腫瘤浸潤轉移。動物模型研究也表明，腺病毒介導的PTEN表達不但能抑制腫瘤癌細胞的成瘤性及轉移，以其處理原位移植瘤，也能抑制腫瘤的淋巴結轉移。PTEN基因在子宮內膜癌中的突變率為34%～50%，是目前發現的子宮內膜癌中突變率最高的基因，而且子宮內膜癌也是迄今發現的PTEN基因突變率最高的腫瘤。

通過研究發現PTEN蛋白在子宮內膜癌中表達下降或缺失及CDK4在子宮內膜癌組織中的過度表達與子宮內膜癌的浸潤轉移密切相關，檢測子宮內膜癌組織中CDK4及PTEN的表達可作為判斷子宮內膜癌浸潤轉移情況的有用標志物，為臨床上尋找判斷子宮內膜癌浸潤轉移的新的生物學標志物提供理論依據。

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