fascin及Ki-67蛋白在膀胱癌中的表達及意義

陳雪磊，李炳勛，沈海林，陳啟光，張哲，畢建斌，孔垂澤

（中國醫科大學 附屬第一醫院泌尿外科，沈陽 110001）

肌成束蛋白（fascin）作為肌動蛋白結合蛋白家族中的一員，在近年來的研究中發現，其在許多上皮來源的腫瘤細胞系及腫瘤組織中表達上調，如乳腺癌、食管癌等，并與腫瘤侵襲及轉移有關［1］。Ki-67即細胞核相關抗原，是反映癌細胞的增殖活性的指標，與腫瘤的發展、轉移及預后高度相關［2］。本文通過觀察膀胱上皮癌中的fascin和Ki-67蛋白的表達，研究fascin與膀胱癌臨床病理指標及Ki-67表達的關系，為膀胱癌中fascin的研究積累更多的資料。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集我院泌尿外科2007年9月至2008年7月的膀胱上皮癌手術標本111例，同時收集患者相關臨床病理資料。全部病例中男性93例，女性18例。患者年齡37~85歲，中位年齡66歲。42例正常膀胱上皮取自手術斷端，距腫瘤邊緣大于5 cm。所有患者均為初發病例，術前均未接受放化療。表1。

1.2 研究方法

采用免疫組織化學方法。所用單克隆抗人fascin抗體（克隆號55k-2）購自美國Millipore公司。Ki-67蛋白抗體、二抗試劑盒、DAB顯色液均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 結果判定

所有切片蛋白表達的評價均由2名病理醫生在未知情的前提下各自獨立完成，遇到結果不統一時，兩名醫師共同討論綜合分析意見。fascin表達定位于癌細胞的胞質中，在正常上皮血管內皮細胞也有表達，呈棕黃色顆粒狀。fascin按照表達面積分為5組：無表達細胞（0）、表達的細胞數占切片總細胞數＜25%（1+）、25%~50%（2+）、50%~75%（3+）、＞75%（4+）。按照表達強度分為3組：用已確定為陽性的轉移性乳腺癌標本的反應強度作為對照，弱于它（1+）、與其相同（2+）、表達比之強（3+）。每張切片最后fascin綜合表達情況用表達面積與表達強度的乘積表示，并分為 4 個級別：-（0）、+（1-4）、++（5-8）、+++（9-12）。Ki-67蛋白陽性表達標準：以細胞核成棕褐色彌漫狀或顆粒狀表現為陽性細胞。每張染色切片隨機選取5個視野，計算每個視野中陽性細胞數占總細胞數的比例，然后得到5個視野的平均值，陽性細胞所占比例＜20%為陰性、≥20%為陽性［3］，并分為不同等級：20%~50%（+）、50%~75%（++）、＞75%（+++）。

1.4 統計學分析

fascin及Ki-67蛋白的表達與膀胱癌生物學行為的關系及兩種蛋白之間的相關性應用SPSS13.0軟件進行χ2檢驗分析。

2 結果

2.1 fascin及Ki-67蛋白在正常膀胱上皮和膀胱上皮癌中的表達

在111例手術患者中有42例取出正常膀胱上皮組織，其余因手術方式原因無法切取。在42例正常膀胱上皮組織中，fascin及Ki-67蛋白均未表達。在111例膀胱上皮癌標本中fascin有94例呈陽性表達，表達陽性率為84.7%。Ki-67蛋白有92例呈陽性表達，表達陽性率為82.9%。fascin及Ki-67蛋白在正常膀胱上皮及膀胱上皮癌中的表達具有明顯的差異性（P＜0.01）。見圖 1，圖 2。

2.2 Ki-67蛋白在膀胱上皮癌標本中的表達與膀胱癌生物學行為的相關性

Ki-67蛋白與腫瘤病理學分級（P=0.045）、臨床分期（P=0.048）、腫瘤大小（P=0.032）具有相關性；與患者年齡（P=0.282）、性別（P=0.250）無相關性。這與目前的研究結果相一致［2］。

2.3 fascin的表達與膀胱癌生物學行為及Ki-67蛋白表達的相關性

fascin表達與年齡（P=0.329）、性別（P=0.339）及病理分級（P=0.380）均無相關性；與腫瘤臨床分期（P=0.001）及腫瘤大小具有正相關性（P=0.011）。通過分析，fascin及Ki-67蛋白在膀胱癌中的表達具有明顯的正相關關系（P=0.001）。見表1。

3 討論

膀胱癌作為泌尿系統常見的惡性腫瘤，其發生率和死亡率均居泌尿系腫瘤的首位［4］。目前尋找與膀胱癌進展及預后有關的分子標志物，幫助膀胱癌的早期診斷，指導膀胱癌的治療，成為研究的熱點。fascin是一種分子量為55 kDa的細胞骨架蛋白，在人體組織中，fascin在乳腺癌、卵巢癌、肺癌、食管癌、胃癌、結腸癌、膽管癌等腫瘤組織中均出現高頻率的陽性表達，并與高腫瘤級別、高增殖分數相關［5~7］。這些均提示fascin的上調表達在上皮腫瘤組織中可能具有組織特異性，并且與惡性腫瘤存在顯著的相關關系。

我們通過免疫組化方法研究了fascin在膀胱上皮癌中的表達。結果在我們這組數據中，fascin蛋白在膀胱上皮癌的陽性表達率為84.7%，與其在正常膀胱移行上皮中的表達具有明顯的差異性。此結果提示fascin在上皮組織來源的腫瘤中的高表達可能具有普遍性。以往的研究發現，不同組織來源的腫瘤fascin陽性表達率有明顯差異，在胰腺癌中陽性表達率為95%，非小細胞肺癌中的陽性率為89%，而乳腺癌中只有16%［1］。結合本次研究，可以看出fascin蛋白的表達與各腫瘤不同的發生機制可能存在相互聯系。

目前已經證實，fascin在惡性腫瘤中的表達與腫瘤的病理學分級、臨床分期等具有正相關性，諸如食管癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌等［5~7］。在我們的研究中，同樣發現fascin的表達與膀胱癌的臨床分期、腫瘤大小有關。但與腫瘤的病理學分級無關，這可能與我們這組病例低度惡性腫瘤樣本量過少有關。但從fascin的表達程度來看，隨著腫瘤級別的增高，其高表達率也隨之增高。這些均提示在惡性腫瘤的發展過程中，fascin積極地參與了腫瘤的生長侵襲及惡性轉化。

表1 fascin在膀胱上皮癌中的表達及與膀胱癌生物學行為及Ki-67蛋白的關系Tab.1 The relation between the expression of fascin and pathological features in bladder carcinoma

Ki-67（細胞核相關抗原）作為在增殖細胞中表達的一種抗原，其表達與腫瘤的分化程度、浸潤、轉移以及預后密切相關，是反映細胞增殖活性的指標。目前已經證實Ki67在膀胱癌中高表達，且與腫瘤細胞病理分級、臨床分期相關［8］，本次研究也證實了這點。通過本組病例，我們發現在膀胱癌中fascin與Ki-67蛋白具有明顯的正相關性。這說明了兩種基因可能存在某種相互作用調節關系，在腫瘤細胞的發生發展中，出現高增殖和高運動性同時存在的現象。對于二者雙陽性的膀胱癌患者，可能具有更高的惡性程度及浸潤轉移能力，也預示著較差的預后，在臨床上需引起注意。

總之，fascin可以作為膀胱癌的一個分子標志物，用作膀胱癌的早期診斷，其聯合Ki-67蛋白、腫瘤的病理分級和臨床分期可以更好的評價預后。至于其可否成為膀胱癌基因治療中一個新的靶點，需要更深入的研究。

［1］Chen SF，Lin CY，Chang YC，et al.Effects of small interfering RNAs targeting fascin on gene expression in oral cancer cells［J］.J Oral Pathol Med，2009，38（9）：722-730.

［2］Gentile V，Vicini P，Giacomelli L，et al.Detection of human papillomavirus DNA，p53 and ki67 expression in penilecarcinomas［J］.Int JImmunopathol Pharmacol，2006，19（1）：209-215.

［3］Popov Z，Hoznek A，Colombel M，et al.The prognostic value of p53 nuelear overexPression and MIB-1 asaproliferativemarker in transitional cell carcinomaof thebladder［J］.Cancer，1997，80（8）：1472-1481.

［4］Parkin DM，Bray F，Ferlay J，et al.Global cancer statistics，2002［J］.CA Cancer JClin，2005，55（2）：74-108.

［5］Adams JC.Roles of fascin in cell adhesion and motility ［J］.Curr Opin Cell Biol，2004，16（5）：590-596.

［6］Kabukcuoglu S，Oner U，Ozalp SS，et al.Prognostic significance of fascin expression in endometrioid carcinoma［J］.Eur JGynaecol Oncol，2006，27（5）：481-486.

［7］鐘海俊，肖大偉.Fascin蛋白在腫瘤中的表達及其臨床應用價值研究進展［J］.醫學綜述，2008，14（8）：1168-1170.

［8］Popov Z，Gil-Diez-De-Medina S，Ravery V，et a1.Prognostic value of EGF receptor and tumor cell proliferation in bladder cancer：therapeutic implications［J］.Urol Oncol，2004，22（2）：93-101.