雷米普利對大鼠 AMI后心肌縫隙連接蛋白結構的影響

何 峰,陳 珺

(1天津醫科大學研究生院,天津市第四中心醫院,天津 300140；2天津醫科大學總醫院)

急性心肌梗死(AMI)后,梗死心肌纖維化可致細胞間分離,使心室肌發生重構,心律失常發生率升高。血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEI)可通過抑制心室重塑,抑制神經內分泌激活,明顯改善 AMI患者的預后。目前,心肌間縫隙連接蛋白 43(Cx43)與AMI后心律失常是臨床研究的熱點,關于 ACEI對AMI后心肌 Cx43表達的影響尚不清楚。2003年 3～9月,本文通過制作大鼠 AMI模型,研究了 ACEI雷米普利對 AMI后心肌 Cx43表達的影響。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 藥物及試劑 雷米普利購自北京安萬特公司,兔抗鼠 Cx43一抗購自美國 Zymed公司,PV-9000二步法免疫組化試劑盒為北京中杉金橋公司產品。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物模型制備 雄性大鼠 24只,體質量(230±15)g,隨機分成對照組、AMI組和治療組。三組均行開胸手術,其中術后 AMI組結扎冠脈左前降支；對照組(假手術組)只穿線不結扎冠脈；治療組結扎冠脈左前降支,同時用雷米普利 1.86 mg/(kg?d)分次灌胃,連續 8周；對照組、AMI組均以等量生理鹽水灌胃,時間同治療組。用 20%烏拉坦1 g/kg行腹腔淺麻醉,氣管切開后接呼吸機(潮氣量 3 ml/100 g,頻率 60次,呼吸比 2∶1)。于左側第2、3肋間打開胸腔暴露心臟,在左心耳與肺動脈圓錐間找到與左冠脈伴行的心大靜脈,用 3-0絲線結扎冠脈左前降支,以肢體導聯出現 ST段弓背上抬 ＞0.2 mV、持續 30 min以上作為模型成功的標志。術畢恢復胸腔負壓后關閉胸腔,撤除呼吸機,恢復自主呼吸。

1.2.2 心肌 Cx43檢測 取各組新鮮心肌組織,在10%甲醛液中固定 24 h,AMI組及治療組分別取左室心肌梗死(MI)區、邊緣帶及非缺血區心肌組織作為標本,其中 MI中心和邊緣帶取自左室側壁,非缺血區取自左室后壁。對照組取左室側壁和后壁,組織塊包括心肌全層,常規脫水、石蠟包埋,用于免疫組化樣品制備。免疫組化染色按試劑盒要求操作,在 Olympus顯微鏡下,每張切片隨機選取 5個視野,用圖像分析系統在 40×光鏡下對各組心肌 Cx43切片進行分析,測定每個視野下陽性物質的平均光密度,取 5個視野的平均值。

1.2.3 統計學方法 采用 SPSS13.0統計軟件,數據以±s表示,組間數據比較行單因素方差分析和q檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 心肌 Cx43分布 對照組心肌 Cx43分布密集,排列規律,主要呈簇狀分布于與心肌纖維長軸垂直的細胞端—端連接部位；其分布密度在左室前壁和左室后壁,兩部位比較無統計學差異(P＞0.05)。AMI組 MI區心肌 Cx43完全消失,邊緣帶絕大部分消失,僅極少數分布于心肌細胞側—側連接處,或呈點狀分布于細胞表面；心肌 Cx43消失從 MI區→邊緣帶→非缺血區呈逐漸移行性變化,越靠近 MI區其消失越明顯。治療組 MI區及邊緣帶分布不均一性改善。

2.2 心肌 Cx43表達 AMI組 MI邊緣區、非缺血區心肌 Cx43分別為(0.253±0.023)、(0.409±0.018),治療組分別為(0.357±0.020)、(0.433±0.025),對照組(左室側壁、后壁)分別為(0.415±0.019)、(0.430±0.021)。與治療組比較,AMI組MI邊緣區、非缺血區心肌 Cx43表達均明顯降低(P均 ＜0.01)。

3 討論

雷米普利屬于 ACEI,其能抑制 AMI后心肌重塑,改善血流動力學,減少心肌細胞凋亡,縮小 MI范圍,保護心肌,改善患者預后。心肌 Cx43是閏盤中相鄰兩細胞的功能接觸區,是相鄰細胞電學耦聯的基礎,是導致心肌細胞各向異性傳導的重要決定因素[1]。研究表明,正常心肌 Cx43端—端連接結構形成低電阻通道,使電流易于越過 Cx43至鄰近細胞,有利于維持動作電位傳導,減少電流損失,使心臟在電學上形成一個有序、同步活動的整體；其分布改變可致通道電阻增加,使局部發生傳導緩慢和傳導阻滯,誘發折返性心律失常發生[2]。心肌 Cx43的正常分布及其含量對維持心臟傳導具有重大意義。

本研究發現,雷米普利具有保護心肌間隙連接結構的作用。正常情況下,Cx43呈簇狀分布于與心肌纖維長軸垂直的細胞端—端連接部位[3]。本文AMI組梗死 8周后 MI區心肌 Cx43完全消失,MI區邊緣帶絕大部分消失,僅極少數分布于心肌細胞側—側連接處或呈點狀分布于細胞表面；且心肌Cx43消失從 MI區→邊緣帶→非缺血區呈逐漸移行性變化,越靠近 MI區消失越明顯。治療組 MI區邊緣帶的分布不均一性改善。表明雷米普利對左室AMI后心肌具有保護作用,其可使心肌電活動趨于同步,減少心律失常發生。

本研究中大鼠 AMI后心肌 Cx43分布明顯不均,雷米普利可改善其在不同區域的表達,改善 AMI的預后,減少心律失常發生。據此推論,AMI后雷米普利保護結構的作用使得細胞間這種有益的信息傳導得以正常進行,保護了相鄰缺血細胞的安全電擴布,從而減少 AMI后各種心律失常發生,改善 AMI大鼠的預后。本研究為雷米普利抑制 AMI后心律失常發生的臨床應用提供了理論依據。

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