人乳腺珠蛋白檢測在乳腺癌診斷中的臨床應用進展

呂賽平綜述 鄒學森審校

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一,早期發現、早期診斷乳腺癌是提高患者生活質量、延長患者生存期的關鍵。在當前所有的醫學手段中,對于無癥狀的腫瘤患者,腫瘤標志物常常是最早期發現腫瘤的方法之一。人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)是特異地表達于乳腺上皮細胞、原發性乳腺癌組織的分泌性球蛋白,目前被認為是 1種具有臨床應用前景的乳腺癌腫瘤標志物。自從 hMAM被發現以來,國內外學者對 hMAM臨床應用的研究逐漸增多,本文就 hMAM檢測在乳腺癌診斷中的臨床應用作一綜述,現介紹如下。

1 hMAM概述

惡性腫瘤在發病過程中往往會伴隨著多個基因的改變,而基因改變的結果會導致新的基因產物。1996年,Watson等[1]在研究乳腺癌時,以正常乳腺組織作對照,利用差異顯示PCR(differential disp lay PCR,DD-PCR)技術,從乳腺癌組織中篩選出 1個乳腺癌差異表達序列標簽(differential expressed sequence tag,DEST)。隨后,他們利用 cDNA末端快速擴增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技術,從乳腺癌細胞株MDA-MB415中克隆出該 DEST的全長 cDNA序列。經檢測,該cDNA序列全長503bp,其中開放讀碼框架 279 bp,編碼 93個氨基酸,經查詢基因庫中沒有與該 cDNA同源的 DNA序列,他們把該氨基酸序列命名為 hMAM。

hMAM的相對分子質量約為 10.5 kD,在結構上 hMAM與一些分泌型上皮細胞蛋白如人 Clara細胞 10-kD蛋白(human Clara cell 10-kD protein,hCC10)、兔子宮蛋白(rabbituteroglobin,rUg)、大鼠前列腺類固醇結合蛋白C3(rat prostatic steroid binding protein subunit C3,rPSC3)具有同源性[1]。1998年,Becker等[2]又發現另 1種與hMAM高度同源的蛋白,他們將其命名為hMAMB(亦稱親脂素C),而先前 Watson等發現的 hMAM則被稱之為 hMAMA。hMAMA、hMAMB同屬于子宮蛋白超家族,但是 hMAMB檢測對女性生殖系統疾病的診斷更為特異[3]。此后,Carter等[4]報道,hMAM在體內和另外 1種子宮蛋白超家族成員親脂素 B形成共價復合物。經分析,該復合物與子宮蛋白超家族結構相似,為反向平行的二聚體,hMAM與親脂素B之間形成 3個二硫鍵,此外還有 2條糖鏈修飾hMAM。

2 hMAM檢測對乳腺癌診斷的臨床價值

目前檢測hMAM的樣本類型和方法均很多,不同的樣本類型應用不同的方法。如腫瘤組織、淋巴結常用 hMAM免疫組織化學分析、原位雜交組織化學分析、原位逆轉錄-聚合酶鏈反應分析(reverse transcription PCR,RT-PCR)、RNA印跡等技術;而外周血、腦脊液、癌性胸腔積液則常應用巢氏RT-PCR、實時定量RT-PCR等技術檢測其中是否表達hMAM mRNA。

2.1 乳腺癌或其他惡性腫瘤組織

免疫組化分析是利用顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應,對相應抗原進行定性、定位、定量測定的 1項新技術。Waston等[5]把 hMAM羧基端 16個氨基酸片段(EVFMQLIYDSSLCDLF)與載體連接后注射入兔體內制備多克隆抗體,有 81%的原發性乳腺癌患者乳腺組織hMAM組化染色呈強陽性,約 10%的正常個體乳腺組織呈弱陽性。同時有報道其他部位的惡性腫瘤組織 hMAM組化染色亦可呈陽性。Sasaki等[6]報道,55%的唾液腺癌、13%的子宮內膜癌患者的腫瘤組織hMAM組化染色呈陽性反應,其他來源(包括頭頸部、甲狀腺、肺、胃腸消化道、胰腺、子宮頸、卵巢)的惡性腫瘤組織均呈陰性。Onuma等[7]報道,77%的子宮內膜腺癌、31%的子宮頸腺癌患者的腫瘤組織 hMAM組化染色也呈陽性,據此他們認為 hMAM還可以作為婦科惡性腫瘤的腫瘤標志物。

2.2 淋巴結

乳腺癌易通過淋巴循環向腋窩、內乳、鎖骨上等處的淋巴結轉移,由于 hMAM具有極強的乳腺組織特異性,因此在正常淋巴結和非乳腺癌轉移淋巴結中一般均不表達hMAM[8]。Marchetti等[9]利用 RT-PCR技術對 hMAM、CEA、CK 19等 7種潛在乳腺腫瘤標志物進行比較,他們發現僅hMAM、CEA不表達于正常淋巴結。隨后他們還對 248例乳腺癌患者的淋巴結同時進行hMAM mRNA、CEA mRNA表達分析,在 89例組織病理學檢查診斷為淋巴結轉移的病例中,患者淋巴結 hMAM mRNA、CEA mRNA表達的陽性率分別為 97%、79%;在 159例組織學檢查沒有淋巴結轉移的病例中,它們的陽性率分別為 29%、20%,因此乳腺淋巴結hMAM檢測能較好地診斷乳腺癌淋巴結微轉移。

2.3 骨髓

骨髓是乳腺癌全身轉移發生最早、最常見的部位之一,骨髓轉移也可作為乳腺癌遠處轉移的標志。Li等[10]報道,28.0%的乳腺癌患者骨髓 hMAM mRNA陽性,而良性乳腺疾病、健康對照患者均陰性,而且骨髓 hMAM mRNA的表達與患者腋窩淋巴結累及,乳腺癌組織中孕激素受體(PR)、Ki67表達等因素正相關;但是與患者年齡、腫瘤大小、臨床分期、乳腺癌組織中雌激素受體(ER)等因素無相關。此外,Tjensvoll等[11]報道,192例乳腺癌患者有 5例術前骨髓 hMAM mRNA陽性,其中有 4例術后出現復發,因此骨髓hMAM m RNA陽性提示患者預后較差。

2.4 外周血

外周血是 hMAM mRNA檢測最常用的樣本類型,但是不同的報道,乳腺癌患者外周血 hMAM mRNA檢測的敏感性、特異性相差較大。Shen等[12]報道,33%的乳腺癌患者外周血 hMAM mRNA陽性,而健康對照、乳腺良性腫瘤及其他實體瘤患者全陰性。但是 Suchy等[13]報道,僅 11%的乳腺癌患者外周血 hMAM mRNA陽性,另外還有 25%的卵巢癌患者亦呈陽性。盡管存在著上述爭議,但是乳腺癌患者外周血 hMAM mRNA檢測的臨床意義卻是大家所公認的。①正常情況下,乳腺細胞不能進入血液循環,乳腺癌患者外周血hMAM mRNA陽性提示患者外周血循環中存在脫落的乳腺癌細胞,因此它可以作為乳腺癌外周血微轉移的指標。②乳腺癌細胞常可以通過血液向肺、肝、骨等遠處組織和臟器轉移,因此外周血 hMAM mRNA檢測可以作為輔助診斷轉移性乳腺癌的指標。Zach等[14]報道,49%的轉移性乳腺癌患者外周血 hMAM mRNA陽性,陽性率遠高于非轉移性乳腺癌患者。③外周血 hMAM mRNA與乳腺癌的臨床分期密切相關。Roncella等[15]總共檢測了 137例乳腺癌患者的外周血hMAM mRNA,發現 12%的乳腺癌患者呈陽性,其中 0期患者全陰性,2%的Ⅰ期患者、9%的Ⅱ期患者、5%的Ⅲ期患者、41%的Ⅳ期患者陽性。④外周血 hMAM mRNA可以作為診斷乳腺癌早期復發的指標。Zach等[16]報道,15例術后復發的乳腺癌患者中有 8例外周血 hMAM mRNA陽性,因此他們認為外周血hMAM mRNA可以作為乳腺癌早期復發的指標。

2.5 胸腔積液

乳腺癌向肺、胸膜轉移時可導致胸腔出現惡性積液,Roncella等[17]報道,71.9%的乳腺癌、39.6%的其他惡性腫瘤、6.8%的良性疾病患者胸腔積液 hMAM mRNA陽性;胸腔積液hMAM mRNA檢測對診斷乳腺癌的特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值分別為 75.7%、76.4%、30.3%、97.1%。此外,他們還將轉移性乳腺癌患者的胸腔積液 hMAM mRNA結果與傳統的細胞學檢查結果進行比較后報道,50.0%的轉移性乳腺癌患者胸腔積液 hMAM mRNA、細胞學檢查結果同時陽性;32.1%的患者胸腔積液hMAM mRNA陽性、細胞學檢查結果陰性;17.9%的患者胸腔積液 hMAM mRNA、細胞學檢查結果同時陰性;沒有細胞學檢查結果陽性而胸腔積液 hMAM mRNA陰性的病例。因此,胸腔積液hMAM mRNA檢測能比細胞學檢查更敏感地檢測出胸腔積液中的乳腺癌細胞。

2.6 腦脊液

晚期乳腺癌患者可并發癌性腦膜炎(LM),以往癌性腦膜炎的診斷主要依賴影象學檢查或腦脊液細胞學檢查,但是腦脊液細胞學檢查的敏感性、影像學檢查的特異性較低。Dono等[18]利用巢氏 RT-PCR技術檢測了乳腺癌性腦膜炎、格林-巴利綜合征、細菌性腦膜炎、病毒性腦炎等患者的腦脊液 hMAM mRNA,他們發現僅乳腺癌性腦膜炎患者陽性,因此腦脊液hMAM mRNA可以作為乳腺癌性腦膜炎的診斷指標。

綜上所述,盡管目前有部分關于 hMAM與乳腺癌關系的研究結論相差較大,但是大多數研究均認為 hMAM在乳腺癌的早期診斷、監測病程轉移、判斷預后等方面均有十分重要的意義。近年來,更有報道將hMAM應用于乳腺癌的腫瘤疫苗、免疫治療等防治方面。然而迄今為止,人們對 hMAM在乳腺癌組織內的表達調控機制、hMAM對乳腺癌的具體作用機制仍不甚了解,有關hMAM的不少問題有待我們更深入的研究和探索。

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