P-ERK在宮頸上皮內腫瘤診斷中的應用

李 靜 許穎思

宮頸上皮內腫瘤(CIN)是宮頸癌的早期病變,準確的診斷對于治療和預后具有重要的意義,我們探討發現 P-ERK在宮頸上皮內腫瘤診斷中具有重要的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 資料

收集我院宮頸錐切病例 104例,年齡 36～62歲,患者均經病理組織學確診,其中宮頸鱗狀上皮化生 38例,宮頸上皮內腫瘤 I級 20例,宮頸上皮內腫瘤 2級 22例,宮頸上皮內腫瘤 3級/原位癌 24例。

1.2 免疫組織化學法

采用采用 MaxvisionTM免疫組化法,按照免疫組化試劑盒的操作說明進行。和 P-ERK為工作液,由美國基因公司提供,具體步驟:① 4μm連續切片,裱于涂有 APES的載玻片上,70℃烤片 2h;②二甲苯脫蠟,梯度酒精入水;③ 3%過氧化氫室溫孵育 30m in,消除內源性過氧化物酶;④抗原修復:切片浸于pH 6.0檸檬酸溶液中,電飯鍋中煮沸 5min,保溫 10min,自然冷卻;⑤ PBS洗,5m in×2次;⑥加入適當稀釋倍數的一抗,4℃冰箱 12 h;⑦復溫,PBS洗去一抗;⑧加 Maxvision試劑,室溫作用1 h;⑨ PBS洗 2次;⑩ DAB顯色,蘇木精復染,酒精脫水,二甲苯透明,封片,光鏡下觀察抗原在癌組織中表達。

1.3 結果判斷

隨機選擇 4個高倍視野,記數 400個細胞,根據著色強度及顯色癌細胞比例進行半定量分為 -、+、++、+++四級。①按切片中細胞顯色有無及著色深淺評分:無顯色為 0分,淡黃色為 1分,棕黃色為 2分,棕褐色為 3分。②根據顯色癌細胞的比例記分:陽性細胞數為 1% ～25%,計 1分,26%～49%計 2分,50%～75%計 3分,76% ～100%計 4分。每例積分 =① ×②。按積分高低分:0～4分為陰性,4分以上為陽性,結果由兩位病理醫師分別診斷,不同結果討論決定,保證結果的客觀性。

1.4 統計學分析

采用卡方檢驗和等級秩和檢驗。

2 結果

宮頸鱗狀上皮化生組 38例,6例 P-ERK表達陽性,陽性表達率為15.7%;宮頸上皮內腫瘤 66例,P-ERK表達陽性 38例,陽性表達率為 57.6%;兩組比較具有非常顯著性意義(χ2=17.5,P=0.00003,P＜0.01),而宮頸上皮內腫瘤 1、2、3級間陽性表達率比較無顯著性意義(u=0.02,P＞0.05),見表 1。

表1 P-ERK在宮頸鱗狀上皮化生和上皮內腫瘤組織中的表達(例,%)

3 討論

宮頸鱗狀上皮內腫瘤(CIN)是非常常見疾病,易發展為宮頸癌,常易誤診,我們應用P-ERK檢測兩組病變,為確診兩組病變提供客觀證據。

ERK為脯氨酸導向的絲/蘇氨酸激酶,磷酸化的 ERK(PERK)才具有使脯氨酸相鄰的絲/蘇氨酸磷酸化的活性[1]。ERK的活化是將信號從細胞膜表面受體轉導至核的關鍵,其上游通路 Ras-Raf-MEK可促使ERK向P-ERK的轉化平時 ERK位于胞質內,一旦被激活,可迅速穿過核膜,再激活轉錄因子和(或)P70核蛋白體S6激酶[2],并調節轉錄因子的活性,這些轉錄因子進一步調節各自的靶基因轉錄,引起相應蛋白的表達或活性改變,最終可影響細胞代謝和功能,產生特定生物學效應,同時P-ERK進入核內后,可以啟動一些基因的表達,其產物以異二聚體或同二聚體形式結合成核轉錄因子激活蛋白-l(AP-1),該因子與myc基因旁的特異的 DNA序列結合,從而啟動轉錄,最信號共同誘導Cyclin D 1的表達和活性,促進細胞周期由G期向S期轉化,加速DNA合成,導致細胞的異常增生,修復能力增強,導致細胞進入永生化,形成腫瘤。

我們研究發現,pERK在宮頸上皮內腫瘤的陽性表達率顯著高于不成熟鱗狀上皮化生,為診斷上皮內腫瘤提供依據,還發現宮頸上皮內各級間其陽性表達率差異無顯著意義,但隨著級數增高而增高,可能是樣本含量過小導致,有待進一步研究。

[1] Mizumoto Y,Kyo S,Moil N,et al.Activation of ERKl/2 occurs independently of KBAS or BBAF status in endomatral cancer and isassociated with favorable prognosis〔J〕.Cancer Sci,2007,98(5):652.

[2] Ebisuy AM,Kondoh K,Nishida E.The duration,magnitude and compartmentalization of ERK MAP kinase activity:mechanisms for providing signaling specificity〔J〕.JCell Sci,2005,118:2997.