Ki-67在乳腺癌新輔助化療中的表達及與病理學相關性研究*

欽傳輝,黃 平,莫軍揚,莊亞強

(廣西醫(yī)科大學第五附屬醫(yī)院乳腺甲狀腺外科,廣西 柳州 545001)

新輔助化療(neo-adjuvant chemotherapy,NAC)作為乳腺癌的治療策略現(xiàn)已廣泛用于臨床,術前化療不但有利于消除全身微小轉(zhuǎn)移灶,其在對局部腫瘤的縮小、降期、保乳率的提高等方面亦顯示出明顯的優(yōu)勢,而這些關鍵取決于腫瘤對化療的敏感程度。近年來乳腺癌生物學因子在NAC療效預測方面的價值已得到越來越多的重視并成為當前熱點,但目前為止還沒有一種特異性和敏感性都滿意的基因表達及相關的腫瘤生物學指標[1]。國內(nèi)外研究表明,乳腺腫瘤病理緩解率是NAC后長期無復發(fā)和總生存的最重要、也是最好的預測因素[2]。本研究通過對該院乳腺癌患者化療前后Ki-67生物學指標與病理學緩解率進行比較分析,評價其對NAC療效的預測價值。

1 臨床資料

1.1 一般資料 45例均取自本院乳腺外科2005年9月至2009年1月住院行NAC的乳腺癌患者,使用NAC前均以空芯針穿刺或首次局部手術確診且未經(jīng)治療的原發(fā)乳腺癌標本和NAC后的根治術標本,均為女性。參考2003年國際抗癌聯(lián)盟TNM分期法,其中Ⅰ期4例,Ⅱ期 21例,Ⅲ期17例,Ⅳ期3例。年齡26～74歲,平均48歲。NAC采用ET方案表柔吡星(EPI)70～ 90 mg/m2,第1天;紫杉醇(PTX)135～175 mg/m2,第1天;3周為一個化療周期,1～2個周期后為臨床完全緩解(cCR)和臨床部分緩解(cPR)繼續(xù)完成預定化療周期化療,臨床無進展(cSD)者改換 NP方案順鉑(DDP)30～40 mg/m2第1～4天;長春瑞濱(蓋諾)25～30 mg/m2,第 1、8天靜脈滴注;全程為6個周期(含術前化療)。經(jīng)2～4個周期化療后行保乳術3例,余行乳腺癌改良根治術,保乳率為 6.67%。

1.2 標本檢測方法及結(jié)果判定

1.2.1 試劑與方法 試劑:鼠抗人Ki-67單克隆抗體與S-P試劑盒均購自福州邁新生物技術開發(fā)公司。方法:免疫組化染色采用SP法,DAB顯色。石蠟切片脫蠟水化后,微波抗原修復,過氧化酶阻斷劑滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性,羊血清工作液封閉,滴加一抗4℃過夜,滴加生物素標記的二抗,滴加鏈親和素一過氧化物酶溶液。DAB顯色,蘇木精復染。用已知陽性組織切片為陽性對照,用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 結(jié)果判定 顯微鏡下觀察細胞核見棕黃色顆粒為Ki-67陽性細胞。陽性病例判斷:每張切片隨機觀察5個高倍視野,每個視野計數(shù)100個腫瘤細胞。陰性(-):無棕黃色染色或染色陽性細胞數(shù)小于10%;輕度陽性(+):陽性細胞數(shù)10%～25%;中等陽性(++):陽性細胞數(shù) 25%～50%;強陽性(+++):陽性細胞數(shù)大于或等于50%。以陽性細胞數(shù)大于或等于10%為陽性病例。

1.3 化療療效評估 目前腫瘤、淋巴結(jié)及結(jié)外軟組織化療反應的病理判定國內(nèi)及國際上尚無明確的統(tǒng)一標準,本研究綜合國際研究中常采用的 chevallier分級、Hisher等分級[3]及中華人民共和國衛(wèi)生部主編的《乳腺癌診治規(guī)范》中對化療后的病理學特征進行的描述和分級,將病理緩解率分為3度。(1)化療反應Ⅰ度(病理無變化pSD):輕度組織反應,化療有效但不敏感,反應區(qū)域不足切片的1/3,浸潤癌成分較多,可見較多的殘存活的癌細胞,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高;(2)化療反應Ⅱ度(病理部分緩解pPR):中度組織反應,化療顯效為中度敏感,化療反應約為切片的1/2,可以見到浸潤癌成分,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;(3)化療反應Ⅲ度(病理完全緩解pCR):重度組織反應,化療特效,患者對化療非常敏感,組織切片中可見到導管內(nèi)癌的成分,見不到浸潤成分淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率極低。總有效率(OR)=pCR+pPR。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 NAC療效觀察 45例乳腺癌患者,病理組織學反應評價:pCR為6.67%(3/45),pPR為64.44%(29/45),pSD為28.89%(13/45),無疾病進展患者。保乳術 3例,保乳率為6.67%。

2.2 NAC對Ki-67的影響 NAC前Ki-67平均陽性表達率為80.00%(36/45),化療后降低到44.44%(20/45),與化療前相比,Ki-67的陽性表達率顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.001)。

2.3 Ki-67的表達與病理學反應的關系 NAC后pCR+pPR者達32例(71.11%),其中化療前Ki-67陽性表達的NAC后Ⅱ度+Ⅲ度病理學反應占90.63%(29/32),而Ki-67陰性表達的Ⅱ度+Ⅲ度的化療反應的病理學反應僅占9.38%(3/32),兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P=0.017),說明Ki-67陽性表達的乳腺癌患者對化療療效優(yōu)于陰性表達的患者。

3 討 論

目前通常用臨床療效來評價各種指標在NAC中的預測價值,但臨床反應率作為一個預后指標分辨率不高,因為大多數(shù)患者均有效,僅少部分無效者生存率差。在NSABP-B18研究中,僅37%的臨床完全緩解病例為pCR,而33%的pCR為臨床部分緩解,一致性較差,其臨床評價常難以準確表達病灶的真實情況。二者之間的相關性是有限的,甚至臨床緩解預測預后似乎并沒有作用[4]。并有學者研究發(fā)現(xiàn),腫瘤病理學反應被認為是比臨床反應更有力的預后因子[5]。但仍有部分乳腺癌患者對該方案不甚敏感,而乳腺癌Ki-67的高表達提示腫瘤的高侵襲性,并與預后不良有關,且與NAC療效存在相關性,對其研究有重要意義。

目前應用最多的Ki-67是一種核抗原,在細胞周期的G1,S,G2,M期細胞核表達,能很好地反映腫瘤增生活性,是檢測腫瘤細胞增殖活性最可靠的指標之一[6]。國外一些研究通過Ki-67來評價腫瘤細胞增殖分數(shù)PF,從而判斷細胞增殖在NAC緩解及生存上的影響。王少華等[7]報道156例LABC的多中心隨機試驗,比較 EC方案 NAC前后 ER、HER-2、p53、Ki-67等指標與預后的相關性,發(fā)現(xiàn)Ki-67是臨床反應最好的指標,Ki-67表達下降與腫瘤緩解相關,Ki-67表達下降者生存率高。本研究結(jié)果顯示:NAC前 Ki-67平均陽性表達率為80.00%(36/45),化療后降低到45.45%(20/44),化療前Ki-67表達高,反映腫瘤增殖越活躍,而化療后其陽性表達率顯著降低,前后變化差異有統(tǒng)計學意義(P=0.001),提示NAC能顯著抑制腫瘤細胞的增殖以及腫瘤細胞對化療藥物的敏感。

本研究采用ET方案(或NP方案),NAC病理學緩解有效率為71.11%,上述實驗得出的結(jié)論表明,Ki-67表達情況與化療后病理學對藥物的反應密切相關,Ki-67陽性患者其化療Ⅱ度+Ⅲ度病理反應的90.63%要高于陰性表達者的9.38%,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.017)。化療后標本腫瘤實質(zhì)病理學多表現(xiàn)呈退行性改變,細胞壞死多為片,間質(zhì)纖維組織不同程度增生,有肉芽組織伸人癌巢內(nèi),退變的癌巢周圍有多量的泡沫細胞、淋巴細胞及漿細胞浸潤。本研究結(jié)果提示Ki-67陽性患者對化療藥物越敏感,瘤內(nèi)活的癌細胞越少,病理組織反應越明顯,其預后越好。有研究發(fā)現(xiàn)Ki-67陽性與陰性表達者cPR分別為40%和20%(P=0.02),高表達與cPR具有顯著相關性,說明腫瘤細胞增殖活性高者對化療更敏感[7]。本研究結(jié)果與上述報道相似,基于這樣的數(shù)據(jù),提示NAC可能使原本預后較差的Ki-67陽性表達組患者更加受益。

綜上所述,乳腺癌NAC方案的選擇應以獲得更高的pCR為目標,獲得pCR的患者才能最終獲得生存優(yōu)勢。本研究結(jié)果提示,Ki-67可作為乳腺癌化療敏感性的指標,預測NAC的病理學緩解率,為患者個體化治療提供依據(jù)及為判斷預后有重要的意義。

[1] 周鑫,孫治君.乳腺癌中基因表達對化療療效的預測[J].重慶醫(yī)學,2005,34(3):453.

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[3] Fisher ER,Wang J,Bryant J,et al.Pathobiology of preoperative chemothempy:findings from the National Surgical Adjuvant Breast and Bowel(NSABP)protocolB-18[J].Cancer,2002,95(4):681.

[4] Jay R·Harris.乳腺病學[M].王永勝,于金明,葉林 譯.濟南:山東科學技術出版社,2006:849.

[5] There D,Ceccarelli C,Migaldi M,et al.Cell proliferation in breast cancer is a major determinant of clinical outcome in node-positive but not in node-negative patients[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol,2006,14(3):314.

[6] 黃平,莫軍揚,任占平.乳腺癌組織中 MCM5和Ki-67的表達及臨床意義[J].中國實用外科雜志,2009,29(3):164.

[7] 王少華,于澤平,李寧,等.乳腺癌新輔助化療的現(xiàn)狀和展望[J].醫(yī)學研究生學報,2008,21(9):986.