吳強強,李國富,吳 江,高啟平
(1.上海海洋大學,上海 201306;2.通威股份有限公司,四川 成都 610081)
牛至油是從天然植物牛至(Origanum vulgareL.)中提取的精油,它具有獨特的抗菌機理和抗氧化性能,同時其活性成分的獨特香味能刺激消化道感受器,激活消化道酶的活性,促進消化,提高飼料轉化率,而且無任何藥物殘留,不產生耐藥性[1]。牛至油預混劑是我國農業部《飼料藥物添加劑使用規范》(農牧發 [2001]20號)批準可在飼料中使用的一種飼料添加劑。目前國外對牛至油的研究主要集中在其對改善養殖產品抗氧化能力和延長保存方面[2-4],國內對牛至油的研究主要在畜禽上[5-8],而在水產上,國內尚無研究文章發表。
本試驗選用我國水產業廣泛養殖的建鯉為試驗對象,在建鯉日糧中添加牛至油(有效含量5%),通過測定建鯉的生長性能和血清抗氧化指標,以期為今后在水產飼料中運用牛至油提供理論依據。
試驗魚為當年繁殖和培育的建鯉魚種(Cyprinus Carpio var.jian),購自通威德陽試驗場,購回后暫養于室外水泥池中投喂通威101魚種料暫養馴化15 d。牛至油由廣州美瑞康公司提供,有效成分含量5%。
1.2.1 試驗設計 試驗共設4個處理,每個處理3次重復,對照組參考NRC(1993)鯉魚營養標準,設計基礎料作為對照組,3個試驗組分別在此基礎上添加0.025%、0.05%、0.1%牛至油。基礎飼料配方如表1所示;營養成分:總能12 310 kJ/kg、粗蛋白34.0%、粗脂肪4.2%、粗纖維6.5%、粗灰分8.1%、有效磷0.75%。飼料原料來自四川通威公司,粉碎100%過40目篩,制粒在四川通威生產線上進行,制成直徑2.5mm的硬顆粒飼料。

表1 基礎飼料配方及主要營養組成
1.2.2 飼養管理 試驗在成都通威水產科技園進行。試驗選用大小均勻、健康的建鯉魚種1 560尾,體重16.15 g±0.03 g,隨機放入12個室外水泥池中(3.5m×3.5m×1.2m)每池放養130尾。試驗時間為2009年6月27日~2009年9月27日為期90 d,期間翻池一次以確定第2階段投飼量,日投飼率為魚體重的2%~6%,每天定時、定點投喂5次,根據試驗魚攝食情況及天氣狀況適當調節投喂量和次數。每天8:30和16:30測定各池溶氧和水溫,每5 d換水1次,每次換水1/3~1/2。試驗期間水溫24~30℃,溶氧高于4mg/L,pH 值7.0~8.5,氨氮低于0.04mg/L。
1.3.1 生產性能指標 試驗前、后對魚稱重,記錄投飼量,試驗結束時計算增重率、飼料系數、特定生長率、蛋白質效率。應用公式如下:

1.3.2 血清制備 試驗結束后,停飼24 h,每池隨機取魚5尾,尾靜脈采血,4℃冰箱過夜,3 000 r/min 4℃離心10min分離獲得血清,血清置于-20℃保存待測。
1.3.3 測定方法 抗氧化指標均采用南京建成生物工程研究所生產的試劑盒進行測定。總抗氧化能力(T-AOC)測定采用還原三價鐵,與菲啉類物質形成絡合物比色法,T-AOC活力定義:每分鐘每毫升樣品使反應體系的吸光度值增加0.01為一個總抗氧化能力單位。采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧物歧化酶(SOD)活力,SOD的活力定義為每毫升樣品SOD抑制率達50%時所對應的SOD量為一個SOD活力單位(U)。采用TBA法測定丙二醛(MDA)含量,丙二醛(MDA)含量測定采用硫代巴比妥酸比色法(單位:nmol/mL)。
1.4 統計分析 采用SPSS17.0對試驗數據進行分析,所有指標采用單因子方差分析(ANOVA)進行分析,用Duncan氏法進行多重比較。數值以平均值±標準差表示。
由表2可知,0.025%、0.05%和0.1%添加組分別較對照組增重率提高了6.1%、7.4%、3.7%;試驗組較對照組均降低了飼料系數,其中0.025%、0.05%組較對照組降低了 5.0%、5.1%(P<0.05),0.1%組差與對照組相比差異不顯著;試驗組較對照組顯著提高了蛋白質效率,其中以0.05%組最為顯著,比對照組提高了6.8%。

表2 牛至油對建鯉生長性能的影響
由表3可知:試驗組較對照組顯著提高了TAOC(P<0.05),但試驗組間無顯著差異,試驗組較對照組提高分別提高35%、35%和38%,0.01%牛至油添加組提高最為顯著;與對照組相比,試驗組均顯著提高了血清 SOD (P<0.05),0.025%、0.05%0.1%比對照組組分別提高17.2%、17.0%和18.5%;添加0.025%、0.05%和0.1%牛至油試驗組顯著降低了血清中MDA(p<0.05),其中0.025%組降低最顯著,達33%。

表3 牛至油對建鯉血清抗氧化能力指標的影響
試驗結果表明,在基礎料中添加0.025%、0.05%牛至油顯著提高了建鯉魚種增重率,蛋白效率和特定生長率,降低飼料系數,這一結果與Dr Claire Yew Yoke Ching[9]在南美白對蝦中和泰國Kasetsart大學的Orapint Jintasataporn博士在雜交鲇上的試驗結果一致。一般認為牛至油抗菌活性通過對細菌細胞壁結構蛋白的變性和凝固來實現的,通過改變H+和K+的滲透性使細胞胞質膜上的酚相互作用,離子成分的分散導致細胞內關鍵過程受阻,從而使細胞成分滲漏,水分失去平衡,最終使細菌發生死亡[10],良好的抗菌性能能抑制動物腸道有害菌的生長,促進維持腸道菌落平衡,促進腸道對營養物質的吸收,提高飼料利用率。胡倡華等[11]研究表明牛至油能夠防止和抑制動物消化道系統病原微生物的生長繁殖,這也有利于增強消化酶的活性,從而提高對營養物質的消化和利用,以促進動物的生長。雷必勇[12]在仔豬日糧中添加牛至油結果表明:牛至油可提高十二指腸和空腸的絨毛長度,表明牛至油促進動物生長可能是由于牛至油改善了腸粘膜的形態結構,增強了腸上皮細胞的吸收能力,改善動物生產性能。
T-AOC是機體內抗氧化能力的總體體現,是酶促(SOD、CAT、GST、GSH-Px等)和非酶促(維生素、氨基酸和金屬蛋白等)兩方面因子抗氧化能力的總合。SOD對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關重要的作用,它能清除超氧陰離子自由基(O2-),保護細胞免受損傷[13];脂質過氧化是指活性氧、自由基攻擊生物膜中多聚不飽和脂肪酸(PUFA)而引起的一系列氧化過程,此過程可產生一系列脂質過氧化物(LPO),從而對生物體造成一種氧化脅迫狀態,當這種氧化脅迫超出了生物體的抗氧化防御系統的保護能力的時候,就會對生物體造成毒害[14]。而丙二醛(MDA)是自由基引發的脂質過氧化作用的最終分解產物,MDA含量的多少可以間接反映活性氧自由基含量的多少以及組織細胞脂質過氧化的強度或速率。
本試驗結果表明,飼料中添加牛至油后,鯉血清T-AOC和SOD顯著提高,MDA含量顯著地降低,表明牛至油可以增強建鯉血清抗氧化能力,減輕魚體的脂質過氧化作用。其可能機制是牛至油抗氧化作用主要是其酚羥基類化合物。它們既可抑制自由基的產生,也可直接清除自由基,還可以增強機體本身抗氧化系統的功能,從多個環節阻斷自由基的損傷作用。
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