活性氧對(duì)P-糖蛋白調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展

董憲喆，畢明剛

惡性腫瘤是人類(lèi)死亡的重要原因之一，化療是目前臨床治療惡性腫瘤的主要手段。而腫瘤的化療被內(nèi)源性或獲得性多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)所限制，其中P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的過(guò)表達(dá)及其對(duì)底物的外排作用是最主要也是最普遍的耐藥機(jī)制。P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥表型是以P-gp高表達(dá)，使藥物外排增加，細(xì)胞內(nèi)藥物蓄積減少為特征的。許多體外多藥耐藥模型的建立就是采用抗癌藥物反復(fù)處理培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞或化療后復(fù)發(fā)的腫瘤的方法的。在逆轉(zhuǎn)MDR表型的的策略中，化學(xué)逆轉(zhuǎn)劑被普遍接受，其主要通過(guò)逆轉(zhuǎn)劑與MDR轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)性抑制多藥耐藥相關(guān)的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對(duì)化療藥物的外排而逆轉(zhuǎn)MDR［1］。另外下調(diào)MDR基因的表達(dá)，進(jìn)而抑制其編碼的P-gp的過(guò)表達(dá)也是一個(gè)有效的策略［2］。因此，這些逆轉(zhuǎn)劑特異性較差，往往有不明確的嚴(yán)重的不良反應(yīng)。所以，能直接抑制P-gp的表達(dá)，同時(shí)具有一定的抗腫瘤活性的逆轉(zhuǎn)劑具有相當(dāng)高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 P-gp與多藥耐藥

P-gp是由多藥耐藥基因(MDR1)編碼的分子量為170 ku的與腫瘤多藥耐藥有關(guān)的跨膜磷酸糖蛋白，又稱(chēng)P-170。其介導(dǎo)的MDR機(jī)制在目前關(guān)于MDR發(fā)生中研究的較為深入，目前臨床上主要的MDR逆轉(zhuǎn)劑也是以P-gp為靶點(diǎn)逆轉(zhuǎn)MDR的［3］。P-gp最早在秋水仙堿耐藥的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢中發(fā)現(xiàn)，屬于轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ATP結(jié)合盒(ATP-binding cassette，ABC)超家族，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在人的多種正常組織中也廣泛存在，是人體內(nèi)有毒物質(zhì)的清除者，能抵御外源性毒素對(duì)機(jī)體正常組織造成的損傷［4］。它在多種具有天然耐藥性和獲得性耐藥表型的腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)，多項(xiàng)研究顯示其過(guò)表達(dá)是腫瘤化療過(guò)程中產(chǎn)生MDR現(xiàn)象的主要原因［5］。

P-gp由1 280個(gè)氨基酸殘基組成，有4個(gè)基本結(jié)構(gòu)域，即兩個(gè)疏水性的跨膜區(qū)(transmembrane domains，TMD)和兩個(gè)親水性的核苷酸結(jié)合區(qū)(nucleotide-binding domains，NBD)。分別具有結(jié)合并轉(zhuǎn)運(yùn)底物的功能和結(jié)合并水解ATP釋放能量的功能［6］。P-gp在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上合成，最后定位于細(xì)胞膜。其在細(xì)胞膜外側(cè)有3個(gè)N連接的糖基化位點(diǎn)，在高爾基體上進(jìn)行糖基化修飾，但糖基化修飾不是P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)底物的關(guān)鍵［7］，只有助于P-gp發(fā)揮其它的生理作用。目前關(guān)于P-gp的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的研究結(jié)果尚不一致，主要有幾種模型，包括孔模型、外轉(zhuǎn)酶模型、疏水真空泵模型等，分別從不同角度論證了P-gp對(duì)底物轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制［8］。在這些模型中，P-gp是ATP依賴(lài)的疏水真空泵的觀點(diǎn)被廣泛接受。該假設(shè)認(rèn)為底物與P-gp上相應(yīng)的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合后，兩個(gè)NBD分別與一個(gè)ATP結(jié)合，同時(shí)形成NBD二聚體;二聚體導(dǎo)致TMD構(gòu)象的改變，結(jié)合位點(diǎn)轉(zhuǎn)移至胞外，同時(shí)使得P-gp與底物的親和力下降，底物脫離P-gp，在胞外釋放出來(lái)。隨后ATP水解使NBD二聚體分離，P-gp恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)象。在整個(gè)過(guò)程中，ATP的結(jié)合和水解起到了至關(guān)重要的作用，故而認(rèn)為P-gp具有ATP酶的活性［9］。P-gp的底物分子量一般較大，多為脂溶性物質(zhì)，易與P-gp結(jié)合，可被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞［10］。目前已發(fā)現(xiàn)多種常用藥物均為P-gp的底物，如紫杉醇、長(zhǎng)春新堿、秋水仙堿、替尼泊苷、阿霉素、依托泊苷、利多卡因等。所以，尋找P-gp的抑制劑勢(shì)在必行。

2 ROS的生理作用及其誘導(dǎo)劑

ROS是呼吸鏈底物端和氧端漏出的電子沒(méi)有參加ATP合成，而在線(xiàn)粒體內(nèi)被氧化產(chǎn)生的活性氧自由基［11］。ROS是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)分子，有研究顯示［12］，納摩爾水平的ROS是有利于細(xì)胞增殖的，而微摩爾水平的ROS則可以激活細(xì)胞內(nèi)凋亡途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，毫摩爾水平的ROS可致細(xì)胞損傷壞死。ROS是線(xiàn)粒體去極化的重要介質(zhì)，可以引起caspase-9活化，激活EPK1/2，激活線(xiàn)粒體凋亡途徑;可以促進(jìn)CD95 DISC的形成和caspase-8的活化，激活死亡受體途徑;還可以刺激內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+的釋放，繼而激活核酸內(nèi)切酶，造成DNA損傷，或激活蛋白激酶C，引起原癌基因表達(dá)，即激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［13］。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種抗腫瘤藥物或細(xì)胞毒藥物，如砷劑［14］、非甾體抗炎藥、調(diào)節(jié)Ca2+的藥物、某些植物提取物、以及電離輻射、多柔比星等作為外源性的促凋亡信號(hào)，都是通過(guò)引起細(xì)胞內(nèi)ROS水平的升高，破壞細(xì)胞內(nèi)氧化還原的平衡而起到誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用的［15］。

3 ROS對(duì)P-gp的調(diào)節(jié)作用

3.1 過(guò)高濃度ROS對(duì)P-gp的調(diào)節(jié) 不同濃度的ROS在機(jī)體內(nèi)的作用可能是截然相反的。有研究顯示高濃度的ROS導(dǎo)致細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)會(huì)升高M(jìn)DR1和MRP-1基因的表達(dá)。Christina等［16］將大鼠肝細(xì)胞用過(guò)氧化氫酶CAT抑制劑預(yù)處理1 h后再用過(guò)氧化氫處理，發(fā)現(xiàn)MDR1基因的mRNA和P-gp的表達(dá)均被上調(diào)，羅丹明123外排增加。而抗氧化劑(1 mmol·L－1維生素 C，10 mmol·L－1甘露醇，2% 二甲基亞砜，10 mmol·L－1N-乙酰半胱氨酸)則可以明顯抑制MDR1基因mRNA和P-gp的過(guò)表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)僅當(dāng)過(guò)氧化氫的濃度超過(guò)500 μmol·L－1時(shí)P-gp的水平才被上調(diào)。此外，紫外照射、細(xì)胞外pH較低以及滲透壓休克、熱休克等應(yīng)激反應(yīng)都能誘導(dǎo)P-gp的表達(dá)，而這些應(yīng)激因素都伴隨著內(nèi)源性的ROS的大量產(chǎn)生，其水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于生理水平。

環(huán)氧化酶-2(Cox-2)是催化前列腺素合成第一步的酶，在大多數(shù)腫瘤中過(guò)表達(dá)，具有抗凋亡作用。Cox-2是ROS的來(lái)源，能導(dǎo)致內(nèi)源性ROS的明顯升高以及DNA單鏈斷裂，而這種現(xiàn)象可以被Cox-2特異性抑制劑SC 58125明顯抑制［17］。近來(lái)發(fā)現(xiàn)Cox-2對(duì)P-gp有一定的上調(diào)作用，而Cox-2抑制劑則可以抑制P-gp的表達(dá)。Vimal等［18］以腺病毒為載體把Cox-2 cDNA轉(zhuǎn)染到大鼠腎小球細(xì)胞并采用基因芯片觀察差異基因表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在Cox-2過(guò)表達(dá)的細(xì)胞內(nèi)MDR1基因表達(dá)明顯升高，而MDR1基因表達(dá)的上調(diào)可以被Cox-2的特異性抑制劑NS398抑制。Zatelli等［19］也發(fā)現(xiàn)Cox-2抑制劑通過(guò)抑制P-gp的表達(dá)而抑制乳腺癌細(xì)胞的化療耐藥性?？梢?jiàn)Cox-2對(duì)P-gp的表達(dá)有一定的調(diào)節(jié)作用，推測(cè)這是由于過(guò)量的Cox-2能明顯升高細(xì)胞內(nèi)的ROS水平，引發(fā)細(xì)胞的氧化應(yīng)激，應(yīng)激狀態(tài)下的細(xì)胞為了避免受到過(guò)氧化損傷，使P-gp清除外源性有害物質(zhì)的作用增強(qiáng)，表達(dá)升高。而Cox-2抑制劑則能降低細(xì)胞內(nèi)的ROS水平，由此推測(cè)此時(shí)ROS的濃度應(yīng)高于生理水平但低于應(yīng)激水平，Cox-2抑制劑對(duì)P-gp的調(diào)節(jié)作用可能是通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)ROS的含量而達(dá)到的。

有研究發(fā)現(xiàn)P-gp的過(guò)表達(dá)與抗凋亡的Bcl-xL蛋白水平相關(guān)，認(rèn)為P-gp可能是通過(guò)調(diào)節(jié)caspase依賴(lài)的凋亡途徑抑制凋亡的。另外，多項(xiàng)研究表明，缺氧的實(shí)體腫瘤易于產(chǎn)生化學(xué)耐藥性，并且由此導(dǎo)致的預(yù)后不良更甚于供氧充足的腫瘤。故推測(cè)實(shí)體瘤中內(nèi)源性P-gp的表達(dá)與腫瘤組織中心缺氧有關(guān)，又因?yàn)镽OS作為細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)分子，在缺氧狀態(tài)下水平明顯升高，被認(rèn)為是缺氧狀態(tài)下最早的損傷信號(hào)［20］，推測(cè)ROS的過(guò)度升高造成的細(xì)胞氧化應(yīng)激，繼而上調(diào)P-gp的表達(dá)。ROS作為調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的信號(hào)因子時(shí)，其濃度在納摩爾到微摩爾水平，此濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于造成DNA斷裂所需要的濃度水平。而應(yīng)激狀態(tài)下的ROS水平明顯高于生理?xiàng)l件下，已經(jīng)達(dá)到毫摩爾水平，當(dāng)過(guò)高濃度的ROS對(duì)細(xì)胞生存造成嚴(yán)重威脅時(shí)，P-gp的生理角色就轉(zhuǎn)變成毒素清除者，旨在防止細(xì)胞凋亡。

3.2 高濃度ROS對(duì)P-gp的調(diào)節(jié) ROS水平的過(guò)度升高可刺激細(xì)胞在氧化應(yīng)激狀態(tài)下進(jìn)行自我保護(hù)，反而使得P-gp的表達(dá)升高。而在抗氧化劑或氧化劑抑制劑的適量存在下，則可以使得細(xì)胞內(nèi)ROS水平適度高于生理水平，而降低P-gp的表達(dá)。

3.2.1 谷胱甘肽抑制劑對(duì)P-gp的調(diào)節(jié) 谷胱甘肽是機(jī)體內(nèi)一種重要的抗氧化酶，它能夠清除掉人體內(nèi)的自由基，保護(hù)許多蛋白質(zhì)和酶等分子中的巰基不被自由基等有害物質(zhì)氧化，從而讓蛋白質(zhì)和酶等分子發(fā)揮其生理功能。有研究顯示［21］，細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的活性被谷胱甘肽抑制劑抑制后，內(nèi)源性的多藥耐藥轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-gp的表達(dá)同時(shí)被下調(diào)。丁胱亞磺酰亞胺(L-Buthionine Sulfoximine，BSO)是一種人工合成的氨基酸，可抑制γ-谷氨酰胺半胱氨酸合成酶的合成，降低細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的水平，已經(jīng)成功應(yīng)用于癌癥患者的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，并顯示出使腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物增敏的效果［22］。Maria等采用BSO處理細(xì)胞抑制細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的合成，進(jìn)而升高細(xì)胞內(nèi)的ROS水平，發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞內(nèi)ROS升高的同時(shí)，P-gp的表達(dá)被下調(diào)。同時(shí) p27Kip1、ERK1/2及JNK被激活。而B(niǎo)SO處理后的細(xì)胞內(nèi)P-gp表達(dá)的下調(diào)可以被多種受體絡(luò)氨酸激酶信號(hào)途徑的阻斷劑所終止［23］，如蛋白激酶C抑制劑BIM-1、Ro-31-8220、p21ras法尼基蛋白轉(zhuǎn)化酶抑制劑Ⅲ、抑制ERK1/2活化的c-Raf抑制劑ZM336372和PD98059等。由此可見(jiàn)，ROS對(duì)P-gp的表達(dá)有一定的調(diào)節(jié)作用。而谷胱甘肽抑制劑通過(guò)升高細(xì)胞內(nèi)ROS水平，可以下調(diào)細(xì)胞內(nèi)P-gp的表達(dá)。其具體的作用機(jī)制可能是ROS作為第二信使參與酪氨酸激酶信號(hào)途徑，通過(guò)激活該信號(hào)途徑，使MAPK成員磷酸化，進(jìn)而下調(diào)P-gp蛋白的表達(dá)。

3.2.2 糖酵解抑制劑對(duì)P-gp的調(diào)節(jié) 糖酵解途徑是指細(xì)胞在細(xì)胞質(zhì)中分解葡萄糖生成丙酮酸的過(guò)程，這一過(guò)程在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行，不需要氧氣，每一反應(yīng)基本都由特異的酶催化，并伴有少量ATP的生成。Maria等［24］采用轉(zhuǎn)染了P-gp-EGFP融合基因的前列腺癌細(xì)胞DU-145、神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞Gli36及人子宮頸癌細(xì)胞KB-3-1，這些細(xì)胞都有P-gp的高表達(dá)，使用碘醋酸酯(IA)或2-脫氧-D-葡萄糖(2-DDG)等糖酵解抑制劑抑制上述細(xì)胞糖酵解24 h后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高，同時(shí)P-gp表達(dá)下調(diào)，細(xì)胞對(duì)多柔比星的外排作用被明顯減弱。而外源性自由基清除劑丙酮酸鹽在降低ROS的產(chǎn)生的同時(shí)，P-gp的表達(dá)及細(xì)胞對(duì)底物多柔比星的外排作用均升高。由此可見(jiàn)P-gp的表達(dá)水平和腫瘤細(xì)胞糖酵解密切相關(guān)，可能是由于糖酵解抑制劑可以通過(guò)干擾細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)，升高內(nèi)源性ROS水平，進(jìn)而下調(diào)P-gp的表達(dá)，抑制細(xì)胞對(duì)多柔比星的外排，也提示了糖酵解抑制劑在逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥表型方面的前景。

3.2.3 HIF-1α對(duì)P-gp的調(diào)節(jié) 缺氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxiainducible factor-1α，HIF-1α)是缺氧或某些氧化應(yīng)激狀態(tài)下產(chǎn)生的誘導(dǎo)低氧基因和修復(fù)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的調(diào)節(jié)因子。低氧時(shí)HIF-1α表達(dá)增強(qiáng)，由此誘發(fā)的基因表達(dá)可以增加缺氧組織氧供或降低氧耗，使細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)保持平衡，在氧充足的條件下HIF-1α的亞基受到蛋白酶體的降解和遍在蛋白化作用的調(diào)節(jié)，而這種調(diào)節(jié)作用是依賴(lài)氧的存在的。研究顯示［25］，P-gp在缺氧的條件下受 HIF-1α的調(diào)節(jié)。在 ROS生成酶Nox-1過(guò)表達(dá)的前列腺細(xì)胞DU-145Nox1及其親代細(xì)胞DU-145中，多柔比星處理后的DU-145Nox1細(xì)胞內(nèi)HIF-1α和P-gp水平均明顯低于DU-145細(xì)胞，而ROS水平則明顯高于親代細(xì)胞DU-145，并且此時(shí)P-gp介導(dǎo)的MDR減弱。而用自由基清除劑維生素E和維生素C預(yù)處理的DU-145Nox1細(xì)胞中，HIF-1α和 P-gp水平均升高，但對(duì) MDR1 mRNA的表達(dá)沒(méi)有影響?？梢?jiàn)HIF-1α和ROS在蛋白水平上對(duì)P-gp的表達(dá)存在一定的調(diào)節(jié)作用，ROS水平的升高可以減少P-gp的表達(dá)，抑制耐藥細(xì)胞的MDR表型。但是ROS和HIF-1α何者為上游調(diào)控者還有待于進(jìn)一步研究。

3.2.4 其他ROS誘導(dǎo)劑對(duì)P-gp的調(diào)節(jié) 其他ROS誘導(dǎo)劑也表現(xiàn)出對(duì)P-gp的調(diào)節(jié)作用。在低濃度的過(guò)氧化氫和表皮生長(zhǎng)因子處理的細(xì)胞中P-gp的表達(dá)下調(diào)，且都能夠適度升高細(xì)胞內(nèi)的ROS水平，其程度不至于造成細(xì)胞的氧化應(yīng)激，使細(xì)胞損傷性壞死，由此可以認(rèn)為P-gp的表達(dá)受低濃度ROS的調(diào)節(jié);在腫瘤壞死因子α(TNF-α)處理過(guò)的細(xì)胞內(nèi)P-gp表達(dá)下調(diào)，同時(shí)MDR表型被逆轉(zhuǎn)［26］。而TNF-α是利用低濃度的ROS進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的，進(jìn)一步說(shuō)明 P-gp表達(dá)受低濃度的ROS的調(diào)節(jié)。Silvina等［27］研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)的重亞基鐵蛋白(heavy ferritin，H-FT)也能通過(guò)減輕細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)，誘導(dǎo)P-gp的表達(dá)。H-FT轉(zhuǎn)染的細(xì)胞MDR1 mRNA和P-gp表達(dá)增加，細(xì)胞表現(xiàn)出獲得性MDR表型。H-FT有亞鐵氧化酶活性，其水平的升高可以降低細(xì)胞內(nèi)正常的ROS水平。由此可見(jiàn)，內(nèi)源性ROS水平的適度升高可以防止MDR表型的產(chǎn)生。

4 ROS調(diào)節(jié)P-gp表達(dá)的可能機(jī)制

綜上可見(jiàn)，ROS對(duì)P-gp確有調(diào)節(jié)作用，ROS水平的適度升高可以下調(diào)P-gp的表達(dá)，然而具體的機(jī)制目前還不確切。根據(jù)ROS的生理功能和P-gp的外排機(jī)制及其上游調(diào)控者的特點(diǎn)，推測(cè)有以下兩種可能:①可能與ROS對(duì)線(xiàn)粒體能量代謝的調(diào)節(jié)有關(guān)。ROS產(chǎn)生于線(xiàn)粒體，同時(shí)對(duì)線(xiàn)粒體也有一定的調(diào)節(jié)作用，一旦ROS產(chǎn)生過(guò)多或細(xì)胞抗氧化能力下降，線(xiàn)粒體就會(huì)受到ROS的氧化攻擊，造成線(xiàn)粒體電子傳遞鏈功能障礙、三羧酸循環(huán)障礙、ATP生成不足［28］，而ATP是細(xì)胞內(nèi)蛋白合成修飾等酶促反應(yīng)發(fā)生的基礎(chǔ)。故ROS有可能通過(guò)影響線(xiàn)粒體內(nèi)能量的生成進(jìn)一步影響P-gp的合成，使P-gp的表達(dá)下調(diào)。② ROS作為第二信使直接參與調(diào)節(jié)P-gp的上游調(diào)控通路。MAPK家族成員如細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)、JNK、MAPK等的激活可以下調(diào)mdr1基因的表達(dá)，而ROS處于MAPK的上游，可能通過(guò)調(diào)節(jié)這一通路進(jìn)而調(diào)節(jié)mdr1基因的表達(dá)，間接下調(diào)P-gp的表達(dá)［29］。

5 目前針對(duì)P-gp的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑

以P-gp為靶點(diǎn)的MDR逆轉(zhuǎn)劑的作用方式有幾種，或與底物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合P-gp疏水區(qū)，或與細(xì)胞膜作用，修飾改變P-gp蛋白構(gòu)象，或抑制P-gp與ATP的結(jié)合進(jìn)而阻斷外排泵能量來(lái)源，或與藥物結(jié)合成復(fù)合物使藥物不受P-gp識(shí)別，或直接下調(diào)P-gp的表達(dá)最終發(fā)揮抑制P-gp外排的作用［30］，目前發(fā)現(xiàn)的特異性高、不良反應(yīng)小的逆轉(zhuǎn)劑還很少。P-gp的抑制劑到目前已經(jīng)發(fā)展了三代，維拉帕米作為第一代P-gp逆轉(zhuǎn)劑的代表，是一種鈣離子拮抗劑。它的感受器是P-gp本身，是競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，所以其發(fā)揮作用需要很高的血藥濃度，而高血藥濃度暗示可能會(huì)有高的不良反應(yīng)發(fā)生率，所以第一代逆轉(zhuǎn)劑由于其非特異性而限制了應(yīng)用。第二代逆轉(zhuǎn)劑的代表右旋維拉帕米，雖P-gp的親和力升高，但也由于較低的藥理活性而無(wú)法用于臨床。第三代逆轉(zhuǎn)劑在活性和特異性方面都明顯優(yōu)于前兩代逆轉(zhuǎn)劑，能明顯增加化療藥物在細(xì)胞內(nèi)的濃度，但是在提高癌癥患者的長(zhǎng)期存活率方面并無(wú)顯效［31］。通過(guò)改變化療藥物劑型使之避免被P-gp識(shí)別并排出細(xì)胞外也是逆轉(zhuǎn)劑的一個(gè)研究方向，目前還在研究當(dāng)中。

6 ROS誘導(dǎo)劑成為P-gp調(diào)節(jié)劑的可能性

好的MDR逆轉(zhuǎn)劑首先應(yīng)該具有一定的抗腫瘤活性，在對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有明顯不良影響的情況下，通過(guò)直接下調(diào)P-gp蛋白及其上游基因MDR1的表達(dá)，從根本上逆轉(zhuǎn)MDR。而通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)源性ROS水平升高激活細(xì)胞內(nèi)各相關(guān)的凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路恰恰是多數(shù)抗腫瘤藥物的作用機(jī)制，同時(shí)ROS又能通過(guò)多種途徑下調(diào)P-gp蛋白和MDR1基因的表達(dá)，所以ROS誘導(dǎo)劑表現(xiàn)出了良好的逆轉(zhuǎn)MDR的前景。Liu等［32］發(fā)現(xiàn)了一種逆轉(zhuǎn)劑 ACMS-GOX，就是ROS生成酶，通過(guò)連續(xù)生成較低濃度的過(guò)氧化氫而逆轉(zhuǎn)P-gp過(guò)表達(dá)的腫瘤細(xì)胞的MDR表型。很多研究還發(fā)現(xiàn)許多中藥單體也具有良好的逆轉(zhuǎn)MDR的活性，如粉防己堿，延胡索乙素，槲皮素，川芎嗪等［33］，其中有些單體成分也具有升高 ROS水平的功能。因此，可以看到ROS誘導(dǎo)劑作為逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)的腫瘤MDR的新的逆轉(zhuǎn)劑有著良好的應(yīng)用前景。但是，在使用ROS誘導(dǎo)劑抑制P-gp表達(dá)的同時(shí)，我們必須清醒的認(rèn)識(shí)到，ROS誘導(dǎo)劑在升高腫瘤細(xì)胞內(nèi)源性ROS的同時(shí)，其使用劑量需精確控制，因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)過(guò)高的ROS水平會(huì)引發(fā)細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)，反而使得細(xì)胞內(nèi)P-gp的表達(dá)上調(diào)。所以，我們可以推測(cè)，ROS誘導(dǎo)劑在作為抑制P-gp的MDR逆轉(zhuǎn)劑時(shí)，應(yīng)該盡可能的在保證有逆轉(zhuǎn)活性的前提下，使用較低劑量，以使細(xì)胞內(nèi)的ROS水平不會(huì)超過(guò)生理水平過(guò)高，造成細(xì)胞的氧化應(yīng)激，這樣也剛好可以降低逆轉(zhuǎn)劑對(duì)正常細(xì)胞的毒性和不良反應(yīng)。而目前的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑往往因?yàn)樽畛醵际怯衅渌πУ乃幬铮虼颂禺愋暂^低，使用劑量較大，產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)而限制了其在臨床的應(yīng)用。所以ROS誘導(dǎo)劑在逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥方面有著很好的臨床研究?jī)r(jià)值。

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