ADAM9在肺癌組織中的異常表達

祁娟，張軍，3

（中國醫科大學 附屬第一醫院 1.中國醫科大學肺癌中心；2.腫瘤研究所分子靶向治療研究室；3.胸外科）

近來發現，去整合素-金屬蛋白酶9（a disintegrin and metalloprotease 9，ADAM9）在多種惡性腫瘤中高表達，與腫瘤侵襲、轉移及預后不良相關［1～3］；ADAM9的高表達可增強非小細胞肺癌細胞A549的侵襲、轉移能力［4］，但ADAM9在人肺癌組織中的表達及意義尚不清楚。本研究擬檢測ADAM9在手術切除非小細胞肺癌組織標本中的表達情況。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選擇2000年4月至2006年5月在中國醫科大學附屬第一醫院胸外科接受肺葉切除加縱隔淋巴結切除術、具有完整病歷資料及隨訪結果的39例非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者。其中男性 23例（59.0%），女性 16例（41.0%），中位年齡60歲（33～71歲）。不吸煙者17例（43.6%），吸煙者22例（56.4%）。腺癌28例（71.8%），鱗癌11例（28.2%）。術后病理分期（以UICC和AJCC 1997年修訂的肺癌TNM分期系統為標準）：Ⅰ期12例（30.8%），Ⅱ期5例（12.8%），Ⅲ期22例（56.4%）。術后中位生存時間31個月（4～98個月）。另取10例正常肺組織作為對照。

1.2 試劑來源

羊抗鼠ADAM9抗體（AF949）為R&D公司產品。SP法免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒等均購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.3 方法

參照文獻［1～3］，采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶法（SP法），檢測ADAM9在手術切除非小細胞肺癌組織標本中的表達情況。

1.4 免疫組化結果判定

以細胞膜或細胞漿呈棕黃色為陽性染色。高倍鏡下（×400）每張切片隨機選擇5個視野，每個視野計數200個腫瘤細胞，評定細胞染色強度，計算陽性腫瘤細胞所占的百分數。采用半定量計分方法，根據細胞染色強度和染色細胞所占的比例兩者乘積來判定評分：0分為陰性（-）；1～4分為弱陽性（+）；5～8分為中度陽性（++）；9～12分為強陽性（+++）。以評分均數為界值分為低表達組和高表達組。

1.5 數據分析和統計學處理

采用SPSS17.0統計軟件建立數據庫文件并進行統計學分析。采用χ2檢驗分析ADAM9表達情況。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ADAM9在正常肺組織和非小細胞肺癌組織中的表達

ADAM9在細胞膜和細胞質都有表達；在具有管腔結構的腺癌組織中，陽性著色主要在管腔周圍的細胞靠近管腔的頂端胞漿。本組平均染色評分為8.0分，將評分小于8.0分病例歸入低表達組，大于等于8.0分者歸入高表達組。

ADAM9在非小細胞肺癌組織中呈現高表達。在39例手術切除肺癌組織中，23例肺癌組織中ADAM9呈現高表達，其高表達率為59%（23/39）；在10例正常對照支氣管黏膜上皮細胞及肺泡上皮細胞中，ADAM9的表達均為低表達，其ADAM9高表達率為0%（0/10），二者比較差異顯著，有統計學意義（P=0.001）。

2.2 ADAM9表達與臨床病理因素的關系

ADAM9在肺腺癌組織中呈現高表達。在28例肺腺癌組織中，20例肺癌組織中ADAM9呈現高表達，其高表達率為71.4%（20/28）；在11例肺鱗癌組織中，僅3例肺癌組織中ADAM9呈現高表達，其高表達率為27.3%（3/11），二者比較差異有統計學意義（P=0.027）。

而ADAM9表達與患者性別、年齡、吸煙狀況、病理分期等臨床病理因素無明顯相關性（P＞0.05）。

3 討論

文獻報道ADAM9在胰腺癌、腎癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中高表達，與腫瘤侵襲、轉移及預后不良相關，可能參與EGF（表皮生長因子）等信號轉導途徑［1～3］；但ADAM9在人體肺癌組織中的表達情況尚不清楚。

Shintani等［4］發現ADAM9的高表達增強了非小細胞肺癌細胞A549的侵襲性，增強了A549細胞腦轉移能力。我們在探索肝癌衍生生長因子（hepatoma-derived growth factor，HDGF）促進肺癌細胞侵襲轉移機制時發現［5，6］，siRNA 沉默HDGF可明顯下調AXL酪氨酸受體激酶（anexelekto，AXL）、ADAM9等腫瘤侵襲轉移相關基因，顯著抑制A549等肺癌細胞的體內、外生長、侵襲遷移能力，提示ADAM9等可能是HDGF促進肺癌侵襲轉移信號傳導途徑中的重要一環，在肺癌細胞侵襲轉移中發揮重要作用。

本研究應用免疫組化技術，檢測手術切除NSCLC患者肺癌組織中ADAM9蛋白的表達情況，發現與正常肺組織相比，ADAM9在人非小細胞肺癌中表達顯著增高；ADAM9的表達與肺癌組織學類型密切相關，在肺腺癌中的表達顯著高于肺鱗癌，提示ADAM9可能在肺癌特別是肺腺癌的發生、發展中發揮作用。

本研究初步報道了ADAM9在人肺癌組織中表達情況，結果表明ADAM9在非小細胞肺癌中存在高表達，結合上述HDGF可能通過調節ADAM9等發揮其促進肺癌細胞侵襲轉移作用，提示ADAM9在非小細胞肺癌侵襲轉移中起重要作用，有待擴大樣本量、設計前瞻性對照研究以進一步驗證ADAM9在肺癌侵襲轉移及預后中的意義。

［1］Grutzmann R，Luttges J，Sipos B，et al.ADAM9 expression in pancreatic cancer is associated with tumour type and is a prognostic factor in ductal adenocarcinoma［J］.Br J Cancer，2004，90（5）：1053-1058.

［2］Fritzsche F，Wassermann K，Jung M，et al.ADAM9 is highly expressed in renal cell cancer and is associated with tumour progression［J］.BMC Cancer，2008，8：179.

［3］Peduto L，Reuter V，Shaffer D，et al.Critical function for ADAM9 in mouse prostate cancer［J］.Cancer Res，2005，65（20）：9312-9319.

［4］Shintani Y，Higashiyama S，Ohta M，et al.Overexpression of ADAM9 in non-small cell lung cancer correlates with brain metastasis［J］.Cancer Res，2004，64（12）：4190-4196.

［5］Zhang J，Ren H，Yuan P，et al.Down-regulation of hepatoma-derived growth factor inhibits anchorage-independent growth and invasion of non-small cell lung cancer cells［J］.Cancer Res，2006，66（1）：18-23.

［6］Zhang J，Mao L.siRNA targeting hepatoma-derived growth factor（HDGF）inhibits growth of non-small cell lung cancer in xenograft models.Tumor Biology 35：Emerging Molecules，Mechanisms，and Models.Abstract#5135.Proc Amer Assoc Cancer Res，Volume 47，2006.