氣相色譜法同時(shí)測(cè)定活絡(luò)酊中樟腦、薄荷腦的含量

王天亮， 諸葛俊

(浙江天一堂藥業(yè)有限公司浙江金華321100)

活絡(luò)酊由生川烏、防己、延胡索、樟腦、薄荷腦、水楊酸甲酯、冰片等十二味組成，具有舒筋祛寒，活血止痛功效，用于筋骨痛，急性扭傷，肌肉疼痛及風(fēng)濕痛，肝區(qū)疼痛等癥。原標(biāo)準(zhǔn)［1］只對(duì)其進(jìn)行了定性鑒別，未制訂含量測(cè)定項(xiàng)目。現(xiàn)對(duì)活絡(luò)酊中樟腦、薄荷腦的含量測(cè)定進(jìn)行研究，參照文獻(xiàn)［2-7］建立了氣相色譜儀測(cè)定樟腦、薄荷腦含量的方法，為該制劑的質(zhì)量控制提供參考。具體方法學(xué)內(nèi)容如下:

1 儀器與試藥

HP6890氣相色譜儀。樟腦、薄荷腦對(duì)照品，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(供含量測(cè)定用，批號(hào)分別為:747-20005、0728-9304)。正十四烷，由Fluck公司提供。活絡(luò)酊由本公司制備(批號(hào)為:20081203、20081204、20081205、20081206)。試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性

色譜條件:聚合/交聯(lián)聚乙二醇毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，氫火焰檢測(cè)器。程序升溫:初始90℃，每分鐘7℃升至200℃，保持5 min;載氣流速:1.5 mL/min;分流進(jìn)樣，分流比:5∶1;以正十四烷為內(nèi)標(biāo)。在此色譜條件下樟腦、薄荷腦與相鄰色譜峰均能基線分離，同時(shí)樣品溶液與陰性對(duì)照液相比，陰性對(duì)照溶液無(wú)干擾，結(jié)果見圖1～6。

圖1 正十四烷色譜圖

圖2 樟腦對(duì)照品色譜圖

圖3 薄荷腦對(duì)照品色譜圖

圖4 活絡(luò)酊供試品色譜圖(加內(nèi)標(biāo))

圖5 缺樟腦陰性樣品色譜圖

圖6 缺薄荷腦陰性樣品色譜圖

2.2 內(nèi)標(biāo)溶液、對(duì)照品溶液與供試品溶液制備

內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取正十四烷適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋成每1 mL含4 mg的溶液，即得。

對(duì)照品溶液的制備 取樟腦、薄荷腦對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1 mL分別含2.9 mg、2.2 mg的混合溶液，即得。

供試品溶液制備 精密量取樣品1 mL，置25 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，搖勻，即得。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密量取樟腦、薄荷腦混合對(duì)照品溶液1、2、5、7、10 mL置25 mL量瓶中，各精密加入正十四烷內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別取2 μL注入氣相色譜儀，以對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)濃度的比值為橫坐標(biāo)，對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，得樟腦對(duì)照品線性回歸方程:Y=0.822 9X，r=1.000 0，薄荷腦對(duì)照品線性回歸方程:Y=0.862 5X+0.000 2，r=1.000 0，顯示樟腦進(jìn)樣量在207～2 066 ng范圍內(nèi)，薄荷腦進(jìn)樣量在149～1 486 ng范圍內(nèi)，有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

取供試品溶液，按2.1項(xiàng)所述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定樟腦、薄荷腦的峰面積，計(jì)算樟腦、薄荷腦內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，結(jié)果RSD均為0.1%(n=6)，見表1。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品與對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)所述色譜條件，間隔一定時(shí)間進(jìn)樣一針，測(cè)定樟腦、薄荷腦的峰面積，計(jì)算樟腦、薄荷腦與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，顯示對(duì)照品溶液與供試品溶液穩(wěn)定，結(jié)果見表2。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精密量取同一批號(hào)樣品(20081203)6份，制成供試品溶液，測(cè)定峰面積并計(jì)算樟腦、薄荷腦含量，結(jié)果樟腦的平均含量為14.28 mg/mL，RSD=0.3%(n=6);薄荷腦的平均含量為 11.02 mg/mL，RSD=0.5%(n=6)，見表 3。

表1 樟腦、薄荷腦精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2 樟腦、薄荷腦穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表3 樟腦、薄荷腦重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 回收率試驗(yàn)

精密量取已知含量樣品(20081203)6份，精密加入樟腦、薄荷腦對(duì)照品適量，制成供試品溶液，測(cè)得峰面積并計(jì)算含量，結(jié)果顯示樟腦平均回收率為102.1%，RSD=0.7%(n=6)，薄荷腦平均回收率為103.0%，RSD=0.6%(n=6)見表 4、5。

表4 樟腦回收率試驗(yàn)結(jié)果

表5 薄荷腦回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定與限度制定

測(cè)定樣品3批，結(jié)果見表6，根據(jù)測(cè)定結(jié)果折算出每1 mL的含量(見表6)，限度暫訂為每1 mL含樟腦(C10H16O)不得少于11.2 mg，薄荷腦(C10H20O)不得少于8.4 mg。

表6 樟腦、薄荷腦樣品測(cè)定結(jié)果(n=2)