半枝蓮水提工藝中野黃芩苷降解動(dòng)力學(xué)研究

李一圣， 陳劍平， 何耀慧， 林榮鋒， 黃曉其， 曾惠芳， 蘇子仁*

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東廣州510006;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)一附院藥劑科，廣東廣州510405)

半枝蓮是唇形科植物半枝蓮Scutellaria barbata D.Don的干燥全草，其性味微苦、涼，具有清熱解毒、化瘀利尿的功效［1］，主要化學(xué)成分為黃酮類、多糖、甾醇、有機(jī)酸、生物堿及其它類成分［2］;其主要有效成分野黃芩苷具有擴(kuò)張血管、減少血小板數(shù)量和抑制血小板凝集等作用［3］。在半枝蓮水提的試驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)不同浸泡條件下半枝蓮水提液中野黃芩苷含量變化較大。因此，本文通過測(cè)定不同溫度和浸泡時(shí)間下半枝蓮水提液中野黃芩苷的含量，進(jìn)而研究其降解動(dòng)力學(xué)，為有效地提高野黃芩苷的提取率提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 DIONEX SUMMIT P680高效液相色譜儀(美國戴安公司)，Sartorius CP225D電子天平(北京賽多利斯公司)，實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)(重慶利迪現(xiàn)代化技術(shù)設(shè)備有限公司)。

1.2 藥材 半枝蓮藥材購自玉林市玉州區(qū)億方中草藥材經(jīng)營部，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)蘇子仁研究員鑒定系為唇形科植物半枝蓮Scutellaria barbata D.Don的干燥全草。

1.3 試劑 野黃芩苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110842-200605);甲醇為色譜純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 半枝蓮的提取 取半枝蓮藥材粗粉20 g，精密稱定，加入12倍量相應(yīng)溫度的水浸泡，恒溫保持相應(yīng)的時(shí)間后(見表1)，迅速加熱至沸騰，并保持微沸狀態(tài)1 h，過濾，藥渣再加10倍量的水煎煮2次，每次1 h，過濾，合并濾液，加水定容至1 000 mL。每個(gè)溫度的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別制備一份樣品。

表1 半枝蓮不同浸泡條件的溫度-時(shí)間考察指標(biāo)點(diǎn)

2.2 色譜條件［1］色譜柱為Alltima C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，以甲醇-水-醋酸(35 ∶61 ∶4)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為335 nm，柱溫為25℃，流速為1.0 mL/min。理論板數(shù)按野黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1 500。

2.3 供試品溶液的制備 取上述定容后的半枝蓮水提液，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 方法學(xué)確認(rèn)

2.4.1 線性范圍的考察 精密吸取野黃芩苷對(duì)照品溶液(68.48 μg/mL)1、2、4、6、10、15、20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定其峰面積。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析，得出回歸方程為Y=2 489 599.70X－2 196.6(r=0.999 9)，表明野黃芩苷進(jìn)樣量在 0.068 48～1.369 6 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取野黃芩苷對(duì)照品溶液(68.48 μg/mL)10 μL，重復(fù)進(jìn)樣 5 次，測(cè)定峰面積。結(jié)果峰面積值的RSD=1.24%。表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別于0、2、4、6、8 h精密吸取同一供試品溶液10 μL進(jìn)樣，測(cè)得峰面積。結(jié)果RSD為2.45%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品，平行制備成5份供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積并計(jì)算其含量。結(jié)果RSD=1.34%，表明該法重復(fù)性良好。

2.4.5 回收率試驗(yàn) 取已知含量的水提液5份，各精密加入野黃芩苷適量，制備成供試品溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定野黃芩苷含量并計(jì)算回收率。結(jié)果其回收率均在95%～105%之間，平均回收率為99.65%，RSD為0.84%，表明該法加樣回收良好。結(jié)果見表2。

表2 回收率測(cè)定結(jié)果

2.5 樣品測(cè)定 分別精密吸取各份供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定野黃芩苷含量。對(duì)照品及供試品的色譜圖見圖1，野黃芩苷含量的測(cè)定結(jié)果見表3。

表3 不同浸泡條件下半枝蓮水提液中野黃芩苷的含量測(cè)定結(jié)果

圖1 野黃芩苷對(duì)照品(A)和供試品(B)HPLC圖

2.6 降解動(dòng)力學(xué)方程的擬合 對(duì)不同浸泡條件下半枝蓮水提液中野黃芩苷的含量測(cè)定結(jié)果，以野黃芩苷含量(C)和時(shí)間(t)作圖，得出不同浸泡條件下半枝蓮水提液中野黃芩苷的含量變化曲線(見圖2);再分別按零級(jí)、一級(jí)和二級(jí)動(dòng)力學(xué)方程進(jìn)行擬合，得出相應(yīng)的動(dòng)力學(xué)方程和線性相關(guān)系數(shù)，擬合結(jié)果見表4。

表4 不同溫度下半枝蓮水提工藝中野黃芩苷降解動(dòng)力學(xué)方程

圖2 不同浸泡條件下半枝蓮水提液中野黃芩苷的含量變化曲線

3 結(jié)果與討論

3.1 由圖2的變化曲線可見，在20～60℃浸泡條件下，半枝蓮水提液中野黃芩苷含量的變化呈降解特征，以30～40℃降解速度最快;而在70℃以上浸泡，半枝蓮水提液中野黃芩苷含量保持不變，提取率較高。同時(shí)結(jié)合表4可知，半枝蓮藥材在20℃浸泡時(shí)野黃芩苷的降解動(dòng)力學(xué)符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)特征，而30℃、40℃和50℃浸泡時(shí)野黃芩苷的降解動(dòng)力學(xué)符合二級(jí)動(dòng)力學(xué)特征。

3.2 半枝蓮藥材在水提過程中，不同的溫度和浸泡時(shí)間對(duì)水提液中野黃芩苷的含量變化有明顯的影響，初步推斷半枝蓮藥材在浸泡的過程中，野黃芩苷存在酶降解反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，野黃芩苷的含量變化與酶降解反應(yīng)的規(guī)律相吻合，即溫度由低升高時(shí)，酶降解反應(yīng)速率加快，但隨著溫度的進(jìn)一步升高，酶蛋白受熱逐漸變性失活，反應(yīng)速率降低。

3.3 在實(shí)際生產(chǎn)的過程中，若處方中含有半枝蓮，水提時(shí)宜在70℃以上進(jìn)行投料或浸泡處理，使酶失去活性而減少野黃芩苷的降解，起到“殺酶保苷”的作用，從而有效地提高野黃芩苷的提取率。

［1］中國藥典［S］.一部.2005:77-78.

［2］鄭虎占，董澤宏，余 靖.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用［M］.北京:學(xué)苑出版社，1997:1685.

［3］崔建梅，吳 淞.野黃芩苷的研究進(jìn)展［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003，15(3):255.