滅活大腸桿菌免疫小鼠最適濃度的研究報告

【摘要】:目的:了解用滅活大腸桿菌免疫小鼠所要的最適濃度，以指導實驗教學獲得較好的免疫血清。方法:隨機選擇150只健康小鼠做樣本，分成5組做各種不同濃度的大腸桿菌菌液免疫小鼠，進行結果的觀察和對比。結果:首次用6億/ml以下的菌液濃度的免疫組死亡率較低，用6億/ml以上的菌液濃度的免疫組血清效價較為滿意。結論:首次免疫以6億/ml的菌液濃度為最適濃度。可作為今后免疫小鼠以獲取血清的實驗指導。

【關鍵詞】:大腸桿菌;小鼠;免疫;濃度

【中圖分類號】R378.2+1【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517 (2010) 02-078-1

在免疫實驗教學當中，免疫血清是相當重要的一部分，有較好的免疫血清能給實驗教學提供了很好的實驗效果。目前尚未對大腸桿菌在免疫小鼠時所要用的濃度有相關的報道。為此，我們對平時較多用的小鼠用大腸桿菌進行了免疫實驗，現將結果報告如下。

1對象與方法

1.1對象隨機選擇健康小鼠150只，均在同等動物場中飼養。

1.2方法將菌液在65℃水浴中滅活60分鐘。分別將以上150只小鼠分成5組，每組30只，按各種不同濃度的大腸桿菌菌液對各組小鼠進行免疫，并做好標記，如下表1:

表1菌液濃度(個菌數/ml)

1組

小鼠2組

小鼠3組

小鼠4組

小鼠5組

小鼠

首次1億3億6億9億12億

第二次3億6億9億12億15億

第三次6億9億12億15億18億

第四次9億12億15億18億21億

按照以上濃度進行常規免疫小鼠的過程后，進行觀察，最后采集小鼠血清送檢進行免疫實驗，觀察效果對比。

2結果

2.1小鼠死亡率比較，1組死亡1只小鼠，死亡率為3.33%、2組死亡3只小鼠，死亡率為10%、3組死亡4只小鼠，死亡率為13.3%、4組8只小鼠，死亡率為26.7、5組死亡12只小鼠，死亡率為40%。

2.2采集以上免疫后的小鼠血清，按以上組進行分開做凝集反應試管法比較。進行效價的對比，比較出現“++++”時的血清效價，此時血清濃度越低為該組血清效價越高。結果觀察如表2

表2“++++”時血清濃度，數字為血清稀釋倍數

1組血清2組血清3組血清4組血清5組血清

4080160 160240

3討論

(1)本次實驗從兔子的死亡率來看，4、5組的死亡率較高，證明這兩組所使用的菌液濃度過高，導致小鼠死亡較多。1、2、3組兔子死亡率較低，是實驗可以接受的范圍。表明是小鼠可以接受的菌液濃度。(2)從血清的效價比較看，3、4、5組的血清效價都較為滿意，可達到實驗要求。(3)綜合以上所述，3組死亡率低，效價達到實驗要求，是適合的濃度。得出，3組中所免疫的濃度為最適濃度。因此，今后用大腸桿菌做抗原免疫小鼠時，可首次用6億/ml、第二次免疫用9億/ml、第三次免疫用12億/ml、第四次免疫用15億/ml的菌液濃度。可作為今后免疫動物的實驗指導。