HPLC-MS測定大黃魚中環丙沙星與恩諾沙星含量

【摘要】:目的:建立HPLC-MS法同時測定大黃魚糜樣中環丙沙星與恩諾沙星含量，并對部頒方法進行可行性改進。方法:色譜柱Zorbax SB Aq(2.1x100mm，3.5m)，流動相:0.1%甲酸溶液—乙腈=(82:18).ESI源，正離子模式，環丙沙星母離子332子離子(288/245)，恩諾沙星母離子360子離子(316/245)。結果:在5～200ng/mL范圍內線性關系好，檢測限1.0μg/Kg(S/N=10)，環丙沙星與恩諾沙星的平均回收率分別為96.5%、100.2%，RSD分別為1.0%、1.3%。結論:本方法簡單快速，可用于同時測定大黃魚中環丙沙星與恩諾沙星含量。

【關鍵詞】:HPLC-MS;大黃魚;環丙沙星;恩諾沙星

【中圖分類號】R122.1+1【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517 (2010) 02-035-2

大黃魚肉質細膩，味道鮮美，為閩東特產。近年來野生大黃魚數量逐漸稀少，人工養殖大黃魚規模逐年擴大。為有效控制人工養殖大黃魚的質量，提高百姓的生活水平，我所開展水產品藥物殘留的檢測。目前測定大黃魚中環丙沙星與恩諾沙星的殘留主要是采用農業部頒布的1077號公告-1-2008[1]。我們針對其方法進行部分改進，使得方法更加準確、快速、簡便。

1儀器與試藥

Agilent1200-6410 LC/MS QQQ(美國);CP225D電子分析天平(北京塞多利斯);IKA MS3震蕩器(德國);R201BL旋轉蒸發器(上海申生);TGL-40B離心機(上海安亭);BF2000-M氮氣吹干儀(北京八方世紀)。

環丙沙星對照品(130451-200302中檢所)

恩諾沙星對照品(C:14861400德國Dr.Ehrenstorfer公司)

甲酸(色譜純，美國TEDIA公司)甲醇(色譜純，德國MERCK公司)乙腈(色譜純，德國MERCK公司)

其余試劑均為分析純

2色譜條件

色譜柱:ZorbaxSBAq (2.1x100mm，3.5μm)

流動相:0.1%甲酸溶液—乙腈=(82:18)

柱溫:25.0℃流速:0.3ml/min進樣量:10μL

A色譜圖 大黃魚空白樣

B色譜圖 環丙沙星(前)與恩諾沙星(后)

3質譜條件

離子化模式:電噴霧離子源(ESI)，正離子模式;

離子噴霧電壓:4KV 干燥氣:10L/min

干燥氣溫度:350℃霧化氣壓力:40psi

檢測條件見表一:

A:環丙沙星質譜圖(288，245)B:恩諾沙星質譜圖(316，245)

4大黃魚樣品前處理

取樣品5.0g±0.01g，加冰乙酸2mL，加乙腈20mL，振搖2min，4500轉/min離心5min，加15mL二氯甲烷，手動振搖并放氣，精密量取下層溶液10mL移入雞心瓶中，40℃旋轉蒸發至干，加入1mL20%乙腈水溶液旋渦混合90秒，加入2mL乙腈飽和的正乙烷混合10秒，12000轉/min離心5min，取下層溶液用0.2μm濾膜過濾，取續濾液10μL進樣。

5加標標準曲線

分別稱取環丙沙星與恩諾沙星對照品適量，加甲醇制成1.0mg/mL的對照品儲備液。依次用甲醇制成濃度為5、10、20、40、100、200ng/mL的溶液按“4”項下方法進行處理后進樣。

環丙沙星回歸方程為:Y=5.1386X+1.07468R=0.9998

恩諾沙星回歸方程為:Y=0.11914X+0.2658R=0.9993

本實驗的線性范圍為5～200ng/mL;

定量下限為1.0μg/Kg

檢出限為1.0μg/Kg(S/N=10)

6方法精密度

精密量取環丙沙星與恩諾沙星對照品儲備液適量，用甲醇制成濃度為20ng/mL的溶液加至空白大黃魚糜樣中。按“4”項下方法進行處理后進樣，重復進樣6次。環丙沙星與恩諾沙星濃度的RSD(n=6)分別為0.65%、0.38%。

7重復性實驗

因陽性樣品獲取不易，故取環丙沙星與恩諾沙星對照品儲備液適量，用甲醇制成濃度為20ng/mL的溶液6份空白大黃魚糜樣中，按“4”項下方法進行處理后進樣，環丙沙星與恩諾沙星濃度的RSD分別為1.2%、0.85%。

8加樣回收率

精密量取環丙沙星與恩諾沙星對照品儲備液適量，用甲醇制成濃度為20ng/mL的溶液6份空白大黃魚糜樣中，按“4”項下方法進行處理后進樣。環丙沙星與恩諾沙星的平均回收率分別為96.5%、100.2%，RSD分別為1.0%、1.3%

小結

(1)魚肉中的水分對本實驗有干擾，部頒標準采用無水硫酸鈉除水，我們經過實驗發現結果無顯著變化。

(2)將前處理中取全量的乙腈提取液改為精密量取10mL，可提高方法的可操作性，得出的結果更準確。

參考文獻

[1] 農業部1077號公告-1-2008.水產品中17種磺胺類及15種喹諾酮類藥物殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法.