運用ＨＰＬＣ法準確測定甘露醇注射液藥液殘留

摘要： 本文作者以高效液相色譜法測定甘露醇注射液藥液殘留，此法簡便靈敏，結果準確可靠，適用于甘露醇注射液藥液殘留的檢測。

關鍵詞： 高效液相色譜法 甘露醇注射液 藥液殘留

高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）是在經典液相色譜法的基礎上，于20世紀60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。它與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜；又因分析速度快而被稱為高速液相色譜。高效液相色譜是目前應用最多的色譜分析方法，與經典液相色譜相比，具有速度快、分辨率高、靈敏度高、樣品量少、容易回收和色譜柱可反復使用等優點［１］。它由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。如HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩；進樣系統要求進樣便利切換嚴密；由于液體流動相粘度遠遠高于氣體，為了減低柱壓，高效液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠小于氣相色譜柱［２］。

甘露醇為脫水藥，主要用20％的高滲溶液靜脈注射或靜脈點滴。靜脈注射后其脫水作用可迅速降低顱內壓和眼內壓，是治療腦水腫、降低顱內壓安全而有效的首選藥物；也可用于急性腎衰早期，其可增加腎血流量，提高腎小球濾過率，增加尿量，從而防止腎小管萎縮、壞死，改善腎缺血［３］。甘露醇注射液為超飽和溶液，主藥成分為甘露醇。因其濃度高，為防止對其他藥品的生產造成影響［４］，所以必須對其進行藥液殘留檢測。根據相關技術指導原則［５］，生產用配液罐、管道等部位清洗液的藥液殘留限度為1.0mg·mL^-1。在藥液殘留檢測的研究過程中，本試驗采用高效液相色譜法，以磺酸型聚苯乙烯與二乙烯苯共聚體陽離子交換樹脂H型為填充劑（8μm，300mm×7.80mm），0.04mol/L磷酸溶液為流動相，以紫外檢測儀為檢測器，建立其檢測方法［６］，［７］。經藥品質量標準分析方法驗證，本方法簡便靈敏，結果準確可靠，適用于甘露醇注射液藥液殘留的檢測。

1.儀器與試藥

1.1儀器

梅特勒AE－240電子天平（上海）；島津高效液相色譜儀：LC-10ATvp型液相泵，SPD-10Avp型紫外檢測器。

1.2試藥

甘露醇對照品（由中國藥品生物制品檢定所提供）；磷酸為色譜純；水為二次蒸餾去離子水；甘露醇注射液250ml；甘露醇50g。

2.色譜條件與色譜圖

2.1色譜條件

色譜柱：以磺酸型聚苯乙烯與二乙烯苯共聚體陽離子交換樹脂H型為填充劑（8μm，300mm×7.80mm）；

流動相：0.04mol/L磷酸溶液為流動相；

檢測波長：200nm；

流速：1.0ml·min^-1；

柱溫：50℃；

進樣量：20μL。

2.2對照品溶液制備

精密稱取甘露醇對照品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含甘露醇 1mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3供試品溶液制備

取生產用配液罐、管道等部位清洗液。

在上述條件下，分別取對照品溶液與供試品溶液各20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，甘露醇出峰時間為6.80min，理論板數按甘露醇峰計算應不得低于2000，對照品色譜圖見下圖。

3.方法學驗證［８］

3.1線性范圍

精密量取甘露醇對照品適量，分別用水溶解并稀釋成每1ml含甘露醇10mg的溶液，作為儲備液。精密量取儲備液0.1，0.3，0.5，1.0，1.5，2.0mL分別置10mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。以樣品濃度C為橫坐標，峰面積A為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程如下：

A_甘露醇=1.0642×10⁶C＋324，r=0.9995

試驗結果表明，甘露醇在0.1～2.0mg·mL^-1范圍內，其濃度與峰面積線性關系良好。

3.2精密度試驗

精密量取對照品儲備液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。連續進樣5次，以峰面積計算，RSD為0.5%。

3.3最低檢測限的測定

用3.2中的對照品溶液，采用逐步稀釋法，按上述色譜條件進樣，稀釋至1500倍時，測得甘露醇的檢測限（S/N=3）為2.0μg·mL^-1。

3.4回收率試驗

精密稱取甘露醇對照品8mg，10mg，12mg，分別置10ml容量瓶中。每個濃度各3份，共9份，分別加水溶解并稀釋制成溶液，搖勻，作為供試品溶液；

另精密稱取甘露醇對照品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含甘露醇 1mg的溶液，搖勻，作為對照品溶液。分別取對照品溶液及9份供試品溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，并計算回收率，結果見下表。試驗表明，本法回收率良好。

3.5樣品測定

取配液罐、管道等部位清洗液，按上述色譜條件分別取對供試品溶液20μl注入液相色譜儀，以外標法計算，結果各取樣點藥液殘留未檢出，由此證明配液罐、管道清洗符合規定。

4.討論

從譜圖和實驗數據可以看出，本文提出的測定方法得到了很好的結果。目前，應用HPLC測定糖的文獻報道中，大部分使用氨基鍵合柱、氨基-氨基鍵合柱等，流動相通常是不同比例的乙腈-水體系，檢測器為示差檢測器。本法提出使用以磺酸型聚苯乙烯與二乙烯苯共聚體陽離子交換樹脂H型為填充劑（8μm，300mm×7.80mm），0.04mol/L磷酸溶液為流動相，用紫外檢測器代替了示差檢測器，這樣一方面降低了分析費用，提高了工作效率，另一方面提高了實驗的安全性。試驗證明該法測定甘露醇注射液藥液殘留，方法簡單易行，簡便靈敏，色譜條件容易掌握，測試數據重復性好，結果準確可靠，精密度和準確度都能滿足分析要求，適用于甘露醇注射液藥液殘留的檢測。

參考文獻：

［1］李明遠.高效液相色譜及其在藥品分析中的應用［M］.北京：北京大學出版社，1988：133-141.

［2］張春霖.高效液相色譜與氣相色譜的比較［J］.齊魯藥事，2005，（06）：12-14.

［3］章傳真.甘露醇的臨床應用［J］.海峽藥學，2004，（05）：118-121.

［4］康建功，曾杰，甘為，王新菊.警惕甘露醇所致不良反應［J］.醫藥導報，2000，（03）：91.

［5］山東省藥學會.藥品注冊指南［M］.濟南：山東科學技術出版社，2008：77-79.

［6］王梅，張莘明.我國環境中有機物分析方法及痕量富集技術的進展［J］.環境監測管理與技術，2004.16，(1)：13-16.

［7］閻勇，蘆桂華，張華.衛生理化檢驗文集［M］.北京：北京大學出版社，1999：9-11.

［8］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)［S］.北京：化學工業出版社，2005.