ＨＥＲ２在膀胱尿路上皮癌中的表達及意義

[摘要] 目的 檢測 HER2在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌、癌旁黏膜、正常膀胱黏膜組織中的表達，探討HER2表達與膀胱尿路上皮細(xì)胞癌臨床特征、病理分級、臨床分期間的關(guān)系，評價它是否可以作為判斷膀胱尿路上皮細(xì)胞癌生物學(xué)行為的指標(biāo)。方法 收集臨床病理資料完整的膀胱尿路上皮癌及相應(yīng)癌旁組織各50例，正常膀胱組織20例，應(yīng)用免疫組化法(SP法)檢測HER2蛋白的表達。結(jié)果 HER2蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織中的表達高于癌旁黏膜和正常膀胱黏膜中的表達，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);HER2蛋白的表達和病理分級、腫瘤大小有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 HER2蛋白表達和腫瘤的病理分級、腫瘤大小等有相關(guān)性，表明HER2蛋白過表達可能與膀胱癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 膀胱尿路上皮細(xì)胞癌;HER2基因;相關(guān)性

文章編號:1003-1383(2009)04-0386-03

中圖分類號:R 737.14

文獻標(biāo)識碼:A

doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2009.04.003

膀胱尿路上皮細(xì)胞癌(uroepithelium cell carcinoma of bladder，UCCB)是我國泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，年發(fā)病率約為6/10萬。該腫瘤的特點為:易復(fù)發(fā)，難以早期診斷和估計預(yù)后[1~2]。尋找有價值的用于癌的早期診斷和判斷預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物成為當(dāng)前人們研究的熱點之一。HER2基因(亦作cerB2或Her2/neu)是人表皮生長因子受體(Human Epidermal Growth Factor receptor，HEGFR)家族的第二號成員，體外細(xì)胞培養(yǎng)研究顯示HER2過度表達能促進腫瘤發(fā)生和惡性轉(zhuǎn)化[3]，有研究表明，膀胱癌是除乳腺癌、大腸癌外，第三個有較高HER2表達的惡性腫瘤[4]。為探討HER2表達與膀胱尿路上皮細(xì)胞癌臨床特征、病理分級、臨床分期間的關(guān)系，我們檢測膀胱尿路上皮癌及相應(yīng)癌旁組織HER2蛋白的表達，并與正常膀胱組織比較，報道如下。

資料和方法

1.臨床資料 收集2006年9月～2008年9月住院并接受開放手術(shù)治療(所有病例術(shù)前均未經(jīng)任何抗癌藥物治療或放療)的50例膀胱尿路上皮細(xì)胞癌病人的癌組織及其相應(yīng)的癌旁組織(距離癌組織2 cm)，選取20例正常膀胱黏膜組織作為對照組。50例膀胱尿路上皮細(xì)胞癌患者中男性42例，女性8例，年齡8～79歲，≤60歲患者18例，>60歲的患者32例;按WHO標(biāo)準(zhǔn)分級:G1 18例，G2 22例，G3 10例;按UICC標(biāo)準(zhǔn)分期:Ta~T1 32例，T2~T4 18

例。按腫瘤大小分:≤2 cm腫瘤17例，>2 cm腫瘤33例。

按單發(fā)和多發(fā)腫瘤分:單發(fā)腫瘤28例，多發(fā)性腫瘤22例，均為原發(fā)性膀胱尿路上皮癌。

2.試驗方法

(1)蘇木素伊紅(HE)染色 全部的標(biāo)本均經(jīng)4%的中性甲醛液固定，梯度脫水，浸蠟，包埋，4 μm連續(xù)切片，烤干，脫蠟，HE染色，透明和封片。用于腫瘤分級分期。

(2)免疫組化SP法檢測及結(jié)果判斷 根據(jù)SP法說明書操作。每一批免疫組化染色均設(shè)有已知陽性和用PBS代替一抗的空白對照。由2位富有經(jīng)驗的具有副高級以上職稱的病理醫(yī)師采用雙盲法，隨機觀察切片至少5個具有代表性高倍視野，不少于1000個細(xì)胞，對免疫組化結(jié)果進行評估。結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)(按每張切片計)[5~6]:0:完全沒有著色或少于10%腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞膜著色;1+:大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)微弱不完整的細(xì)胞膜著色:2+:大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)弱至中度完整的細(xì)胞膜著色;3+:大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)強的完整的細(xì)胞膜著色，其中2+和3+視為陽性。

3.統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計采用Spss11.0軟件和手工計算完成;樣本率比較采用R×C列表的χ2檢驗、連續(xù)校正的χ2檢驗及四格表的確切概率法;相關(guān)性分析采用Spearman分析;多個樣本均數(shù)間兩兩比較用方差齊性檢驗(HonogeneityofVariance)，當(dāng)總體方差齊時選擇NewmanKeuls法分析，當(dāng)總體方差不齊時，選用Tamhane法分析，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1.免疫組化SP法檢測HER2蛋白表達情況 HER2蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織、癌旁組織、正常膀胱黏膜組織中的表達率分別為32.0%，12.0%，和5.0%。陽性染色主要位于胞膜，為棕黃色，顯色過強時呈棕褐色(見圖1～2)。應(yīng)用R×C表χ2檢驗，三組間HER2蛋白表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，應(yīng)用Fisher確切概率法，癌旁組和正常組間HER2蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。在此基礎(chǔ)上將上述兩組合并，再與膀胱癌組比較，進行R×C表分割計算，HER2蛋白在膀胱癌組織中的表達高于在非癌組織中的表達，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 HER2在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌中的陽性表達(SP×200)

圖2 HER2在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌中的陽性表達(SP×400)

表1 HER2蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌，癌旁黏膜和正常膀胱黏膜的表達

組別HER2蛋白表達-++++++合計陽性率(%)

癌組14201335032

癌旁組2519515012

正常組10910205

注:三組間HER2蛋白陽性率比較:χ2=9.5634，P=0.0084<0.05;癌旁組與正常組間HER2蛋白陽性率比較:P2tail=0.6642>0.05;癌組和非癌組間HER2蛋白陽性率比較:χ2=9.1116，P=0.0025<0.05。

2.HER2蛋白表達與膀胱癌組織分化程度相關(guān)性分析 按組織病理學(xué)分級分為G1:18例，HER2蛋白陽性2例;G2:22例，HER2蛋白陽性8例;G3:10例，HER2蛋白陽性6例。采用Spearman相關(guān)分析，HER2蛋白表達與膀胱癌組織病理學(xué)分級呈正相關(guān)(r=0.3843，P<0.01)。見表2。

表2 HER2蛋白表達與膀胱癌組織病理學(xué)分級相關(guān)性分析

組別HER2蛋白表達-++++++合計陽性率(%)

G1610111811.11

G259712236.36

G331511060.00

注:Spearman Correlation Coefficients:r=0.3843，P<0.01。

3.HER2蛋白表達與膀胱癌TNM分期的關(guān)系 Ta~T1期(非浸潤型膀胱尿路上皮癌)32例，T2～T4期(浸潤型膀胱尿路上皮癌)18例。兩組間HER2蛋白陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同TNM分期中膀胱癌中HER2蛋白的表達

組別HER2蛋白表達-++++++合計陽性率(%)

Ta～T18121023237.50

T2～T468311822.22

注:兩組間HER2蛋白陽性率比較:χ2=1.2357，P=0.2663>0.05。

4.HER2蛋白表達與膀胱癌患者年齡組的關(guān)系 膀胱癌患者年齡≤60歲HER2蛋白陽性率為22.22%;>60歲陽性率為37.50%;應(yīng)用R×C表χ2檢驗，得出兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 不同年齡的膀胱癌患者中HER2蛋白的表達

組別HER2蛋白表達-++++++合計陽性率(%)

≤60歲59311822.22

>60歲9111023237.50

注:兩年齡組HER2蛋白陽性率比較:χ2=0.849，P=0.357>0.05。

5.HER2蛋白表達與膀胱癌患者性別的關(guān)系 男性患者42例，HER2蛋白陽性率為30.95%;女性患者8例，HER2蛋白陽性率為37.50%;兩組間HER2蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

5 不同性別患者的膀胱癌中HER2蛋白的表達

組別HER2蛋白表達-++++++合計陽性率(%)

男13161034230.95

女1430837.50

注:兩組間HER2蛋白陽性率比較:χ2=0.132，P=0.716>0.05。

6.HER2蛋白表達與膀胱腫瘤大小的關(guān)系 按腫瘤大小分組:腫瘤直徑≤2.0 cm有17例，HER2蛋白陽性率為11.76%;腫瘤直徑>2.0 cm有33例，HER2蛋白陽性率為42.42%;兩組間HER2蛋白陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，腫瘤越大其陽性率越高。見表6。



表6 不同腫瘤直徑的膀胱癌中HER2蛋白的表達

瘤直徑HER2蛋白表達-++++++合計陽性率(%)

≤2.0 cm87111711.76

>2.0 cm6131223342.42

注:兩組間HER2蛋白陽性率比較:χ2=4.8469，P=0.0277<0.05。

討論

HER2是一個在正常和腫瘤上皮細(xì)胞均有表達的跨膜生長因子受體，主要是在人體的胚胎發(fā)育時期表達，它參與多種組織器官的生長發(fā)育，而在成人正常組織中此基因常以單拷貝存在，表達水平較低，與正常細(xì)胞的增殖，分化相關(guān)，并且調(diào)控腫瘤發(fā)生、生長和侵襲。活化形式主要以過表達和基因擴增為主，突變則少見。在人類多種腫瘤中特別是乳腺癌中可檢測到該基因的擴增和過度表達，研究表明，大約25%～30%的浸潤性乳腺癌和80%的乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌患者有HER2基因擴增和蛋白過表達，而這些患者可能預(yù)后不佳、激素治療和常規(guī)化療效果差[7~8]。膀胱癌是繼乳腺癌、大腸癌之后第三個有較高HER2蛋白表達的腫瘤，近年來，許多學(xué)者研究報告指出，膀胱癌HER2蛋白表達陽性率的平均值約為29.8%，中位值約為31.5%，最高值約為37%[9~12]。

本研究免疫組化結(jié)果表明，HER2蛋白陽性染色主要定位于胞膜，少數(shù)位于胞漿內(nèi)，為棕黃色，顯色過強時呈棕褐色，大多數(shù)為片狀分布，少數(shù)為局灶性、彌漫性分布，在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織中的陽性表達率為32.00%，而在正常膀胱黏膜與癌旁黏膜組織中的陽性率分別為5%和12.00%，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，HER2蛋白在膀胱癌組織中的表達高于在非癌組織中的表達，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明HER2蛋白在膀胱癌中呈較高表達，也證明了其表達與膀胱癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)HER2的表達與腫瘤的大小、病理分級有關(guān)，直徑>2 cm的腫瘤HER2表達率為42.42%，直徑≤2 cm的腫瘤HER2表達率為11.76%(P<0.05)，隨著腫瘤的增大，HER2表達有逐漸增高的趨勢，腫瘤的大小與生長分?jǐn)?shù)、腫瘤細(xì)胞的生成與丟失的比例及發(fā)病后就診的早晚等諸多因素有關(guān)。HER2過表達能明顯促進細(xì)胞增殖，研究發(fā)現(xiàn)其過表達亦有抑制凋亡的作用[13]，故HER2的表達與腫瘤大小有關(guān)，隨著病理分級增高，HER2表達率也隨之增高(P<0.01)， 說明HER2高表達狀態(tài)與腫瘤細(xì)胞的分化有關(guān)，與其它臨床和病理參數(shù)無關(guān)，腫瘤細(xì)胞分化越低，其陽性表達率越高。

HER2與膀胱癌預(yù)后的關(guān)系目前存在不同看法。Coombs研究86例膀胱癌HER2原癌基因的擴增和過表達，認(rèn)為HER2基因的擴增及過表達為膀胱癌提供了有用的分子標(biāo)志，但作為潛在預(yù)后指標(biāo)尚需進一步觀察[9~10]。Wright等[13]對乳腺癌研究表明HER2蛋白產(chǎn)物的陽性表達可作為人乳腺癌惡性程度和預(yù)后的一項獨立估價指標(biāo)，但也有一些學(xué)者研究報告，HER2表達與乳腺癌惡性程度及預(yù)后的關(guān)系仍不明確。目前，膀胱癌病人的預(yù)后估計仍主要依靠腫瘤的病理分級和臨床分期，HER2蛋白產(chǎn)物的表達是否可作為膀胱癌惡性程度及預(yù)后的一項估價指標(biāo)，還需大量病例的隨機研究和觀察。本試驗中對研究的臨床病例亦做相關(guān)跟蹤調(diào)查，記錄患者術(shù)后治療及腫瘤復(fù)發(fā)情況，但隨訪時間較短，尚無法對HER2與膀胱癌預(yù)后的關(guān)系做正確的判斷分析，需要進一步積累隨訪資料加以總結(jié)。

參考文獻

[1]Lee R，Droller MJ.The natural history of bladder cancer implications for therapy[J].Urol Clin North Am，2000，27:1-13，vii.

[2]Montironi R，Lopez-Beltran A，Mazzucchelli R，et al.Classification and grading of the noninvasive urothelial neoplasms: recent advances and controversies[J].J Clin Pathol，2003，56:91-95.[3]Schintt SJ .Breast cancer in 21st century:neu opportunities and neu challenges[J].Mod Pathol，2001，14(3):1332146.

[4]俞 平，楊兆瑞，路光中，等.乳腺癌Her2/neu的免疫組織化學(xué)檢測[J].中華病理學(xué)雜志，2003，32(5):479-481.

[5]Sliwkowski MX，Lofgren JA，Lewis GD，et al.Nonclinical studies addressing the mechanism of action of trastuzumab(Herceptin)[J].Semin Oncol，1999，26(Suppl 12):60-70.

[6]Pegram MD，Baly D，Wirth C，et al.Antibody dependent cell2 mediated cytotoxicity in breast cancer patients in phaseⅢclinical trials of a humanized antiHER2 antibody[J].Proc Am Assoc Cancer Res，1997，38:602.

[7]Mc CAnn PA，Dervan PA，Johnston PA，et al.CerBb2 oncoprotein expression in primary human tumors[J].Cancer，1990，65:88.

[8]Wood DP，Wartinger DD，ReuterV，et al.DNA RNA and immunohistochemical characterization of the HER2/neu oncogene in transistional cell carcinoma of the bladder[J].J Urol，1991，146:1338.[9]Coombs LM，Pigott DA，Sweeney E，et al.Amplification and over expression of cerB2 in tran- sistion cell carcinoma of the urinary bladder[J].Br J Cancer，1991，63:601.

[10]Moriyama M，Akiyama T，Yamamoro T，et al.Expression of cerbB2 gene product in urinary bladder cancer[J].J Urol，1991，145:423.

[11]Chen AY，Lju LF.DNA topoisomersases:essential enzymes and lethal targets[J].Annu Rev Pharmacol Toxicol，1994，34:191-218.

[12]Leo AD，Larsimont D，Gancberg D，et al.HER2 and topoisomerase Ilalphaas predictive markers in a population of node-positive breast cancer patients randomly treated with adjuvant CMF or epirubicin plus cyclophospIlamide[J].Ann Oneol，2001，12:1081-1089.

[13]Wright C，Angus B，Nicholson S，et al.Expression of cerbB2 oncoprotein:a prognostic indicator in breast cancer[J].Cancer Res，1999，49:2087.

(收稿日期:2009-07-23 修回日期:2009-08-13)

(編輯:潘明志 英文審校:唐雄林)