胃癌及癌前病變中ＰＣＮＡ和Ｃａｓｐａｓｅ－３的表達及其與Ｈｐ感染的關系

李　杰　李登欣　馬起龍

【摘要】 目的 探討PCNA和Caspase-3在胃癌及癌前病變中的表達及其與Hp感染的關系。方法 應用快速尿素酶試驗與吉姆斯染色法將各種病變分為Hp感染陽性組和陰性組，應用免疫組化法對各種病變胃組織PCNA和Caspase-3的表達進行檢測。 結果 ①胃癌及癌前病變組PCNA表達及Hp感染率明顯高于慢性淺表性胃炎組( P<0．05)，而Caspase-3的表達顯著低于慢性淺表性胃炎組(P<0．05) ；②Hp感染陽性組PCNA及Caspase-3表達明顯高于Hp感染陰性組(P<0．05)。結論 Hp感染可能通過促進PCNA及Caspase-3基因蛋白的過度表達,從而使胃黏膜細胞增生與凋亡平衡失調誘發癌變。

【關鍵詞】胃癌；癌前病變；幽門螺桿菌(Hp)

胃癌的發生、發展是一個多因素、多步驟的過程，涉及到細胞增值和凋亡平衡異常等多方面機制。進年研究發現幽門螺桿菌（Hpylori） 感染與胃癌的關系密切。本研究應用免疫組化方法檢測增殖相關基因蛋白PCNA及凋亡蛋白酶系統中關鍵酶Caspase-3在胃癌發生過程中的表達變化，探討其在胃黏膜癌變過程中所起的作用及Hp感染致癌的可能機制。

1 資料和方法

1．1 一般資料 選擇2008年6-10月來本院就診的患者110例，包括慢性淺表性胃炎組40例，癌前病變組（萎縮性胃炎、腸上皮化生及不典型增生病變）40例及胃癌組30例，其中Hp陽性者63例,Hp陰性者47例,所有患者均經胃鏡檢查診斷并經病理組織學檢查證實并未服用非幽體消炎藥、抗生素及抑酸藥。

1．2 方法

1．2．1 Hp感染檢測 采用快速尿素酶試驗及吉姆斯染色法,二者均陽性為Hp陽性，均陰性為Hp陰性，單一陰性退出試驗。

1．2．2 免疫組織化學 兔抗人PCNA及Caspase-3多克隆抗體、SP染色試劑盒、DAB顯色試劑盒等均購自北京中杉生物技術公司。試驗嚴格按照SP染色試劑盒操作步驟說明進行，以PBS代替一抗為陰性對照,以已知陽性切片為陽性對照。

1．3 統計學方法 采用SPSS 12．0軟件進行統計分析，相關因素的差異性比較采用χ²檢驗及確切概率法。

2 結果

2．1 PCNA檢測結果以細胞核內出現明顯的棕褐色顆粒者為陽性標記，Caspase-3蛋白陽性表達定位于胃黏膜上皮及胃癌細胞質,胞核或胞質顯示為淡黃至黃棕色者為陽性標志，在組織切片中不顯色為陰性。PCNA在淺表性胃炎-癌前病變-胃癌的病變過程中陽性率分別為45%、75%、83．3%，表達逐漸增加,在胃癌組表達最高（P<0．05）；Caspase-3在胃黏膜癌變過程中表達依次降低（P<0．05），胃癌組表達率為23．3%。

2．2 Hp在淺表性胃炎-癌前病變-胃癌組的感染率分別為30%、70%、76．67%，各組與慢性淺表性胃炎組比較HP陽性率差異有統計學意義(P<0．05)。

2．3 在同一病變組Hp感染陽性組PCNA、Caspase-3的表達高于Hp陰性組，在所有試驗對象中63例Hp陽性組各基因的表達與陰性組比較差異有統計學意義（P<0．05）。

3 討論

3．1 胃黏膜癌變過程中PCNA及Caspase-3的表達 PCNA是DNA聚合酶δ的輔助蛋白,是細胞增殖周期中DNA合成的必要蛋白，在G1期表達逐漸增加,S期達到高峰，G2/M期迅速降低,可作為S期的特異性標記，其含量多少可以反映細胞增殖程度^[2]。本研究顯示:PCNA表達從CSG到GC逐漸增加,提示GC演變過程中,胃黏膜細胞增殖程度逐漸增加,從而增加內外源性DNA受損機會,增加胃癌發生的危險性。Caspase-3可看作是調控胃上皮細胞凋亡最重要的執行者之一,它的激活能使許多細胞結構、細胞周期及DNA修復等相關蛋白或激酶失活,在細胞凋亡信號轉導啟動途徑中起著關鍵性作用。本研究發現隨著胃黏膜的癌變進展Caspase-3的表達下降，這與徐進等^[2]研究一致，表明Caspase-3介導的細胞凋亡參與了胃黏膜的癌變過程。

3．2 胃黏膜癌變過程中PCNA、Caspase-3的表達與Hp感染的相關性 鑒于Hp與GC關系的大量研究,國際癌癥研究會已把Hp列為GC的Ⅰ類致癌原。本研究顯示Hp感染率隨著癌變的進展而明顯升高,HP陽性組PCNA的表達高于HP陰性組，表明HP感染促進細胞增殖,使黏膜處于高增殖狀態,從而增加細胞DNA的損傷，這可能是HP感染引起胃癌的機制之一^[1]。在同一病變中HP陽性組Caspase-3的表達高于HP陰性組,表明HP感染通過調控Caspase-3基因的表達而促進細胞凋亡。Hp感染引起胃黏膜細胞凋亡、增殖的機制仍不明確，可能與Hp產生的毒素、細胞因子、氧自由基等有關,還與bak、fas、p53等基因表達增強有關^[4]。總之，Hp感染可能參與胃癌癌前病變乃至胃癌的發生,近來研究顯示Hp感染促進胃黏膜細胞凋亡、增殖作用主要發生在胃癌癌前病變早期階段。因此胃癌癌前病變早期階段抗Hp治療可能能預防胃癌的發生。

參 考 文 獻

［1］ Preston MS，Pike MC，Ross RK，et al.Increased cell division as a cause of human cancer.Cancer Res，1990，50 (23):7415.

［2］ 徐進,文繼航,鄭暉,等.Caspase-3蛋白在胃癌及非典型增殖中的表達及其細胞凋亡的關系.湖南醫科大學學報,2002，27(2):181-182.

［3］ 劉海峰,劉為紋,房殿春,等.幽門螺桿菌感染對胃粘膜上皮細胞增殖和凋亡的影響.中華消化內鏡雜志，1998,15(2):91.