ＨＰＬＣ法測(cè)定復(fù)方丹參滲透泵型控釋片中丹參酮ＩＩＡ的含量

摘 要：目的：建立以HPLC法測(cè)定復(fù)方丹參滲透泵型控釋片中丹參酮IIA的含量的方法。方法：色譜柱為Hypersil ODS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇∶水(85∶15)；流速為1.0 mL#8226;min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。結(jié)果：丹參酮IIA在1.6～14.4μg#8226;mL-1濃度范圍之間線(xiàn)性良好，r=0.9998；平均回收率為98.41%，RSD =164%。結(jié)論:本法準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)便，主峰與雜質(zhì)峰分離完全，可用于復(fù)方丹參滲透泵型控釋片的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；復(fù)方丹參；滲透泵片；丹參酮IIA

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2008）02-042-03

復(fù)方丹參片收載于《中國(guó)藥典》2005版一部［1］，由丹參、三七、冰片三味藥組成，用于心絞痛、心肌梗塞等疾病的治療。方中丹參最主要的脂溶性成分為丹參酮Ⅱ（TanshinoneⅡA），其量約為藥材的0.1% ～0.9%，具有廣泛的生理作用，如天然抗氧化、抗心腦血管疾病、抗菌消炎、抗腫瘤及抗肝纖維化和抗肝損傷作用等［2］。筆者將其改劑型制成滲透泵型控釋片，并采用高效液相色譜(HPLC)法，對(duì)復(fù)方丹參滲透泵片中脂溶性成分丹參酮IIA的含量進(jìn)行了測(cè)定。本方法準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)便，可用于復(fù)方丹參滲透泵片的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀(日本島津)；SPD—10AVP型紫外檢測(cè)器；HL-1恒流泵（上海青浦滬西儀器廠(chǎng)）；6010型可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)(安捷倫科技上海有限公司)；AS10200A型超聲波清洗機(jī)(天津奧特賽恩斯儀器公司)；METTLER AG285電子天平。

1.2 試藥

丹參酮ⅡA對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：0766-200610)；復(fù)方丹參滲透泵型控釋片(實(shí)驗(yàn)室自制，批號(hào)：070928，071012，071020)；甲醇(色譜純)；雙蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODSCl8柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇∶水(85∶15)；流速：1.0mL#8226;min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取丹參酮IIA對(duì)照品10 mg，置50mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。(每1mL溶液中含丹參酮ⅡA 40μg)。

2.2.2 供試品溶液的制備

取樣品5片，仔細(xì)剝?nèi)ケ∧ひ拢谘欣徶醒兴椋芊Q(chēng)取粉末（相當(dāng)于丹參酮IIA 200μg），精密稱(chēng)定，置磨口錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，塞緊，稱(chēng)定重量。超聲處理15分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，收集續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備

用缺丹參的其余藥材，按處方比例和工藝制成陰性制劑，按“2.2.2”項(xiàng)方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)色譜條件記錄色譜圖。結(jié)果，丹參酮ⅡA對(duì)照品的保留時(shí)間約為11.6min；供試品色譜中丹參酮ⅡA與雜質(zhì)峰分離良好，分離度不低于1.5，保留時(shí)間約為11.6min，理論塔板數(shù)按丹參酮IIA峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；陰性對(duì)照色譜在丹參酮ⅡA相應(yīng)位置上無(wú)干擾峰。色譜詳見(jiàn)圖1。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品溶液0.4，1.2，2.0，2.8，36mL，分別置于10mL的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別吸取上述各液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積值A對(duì)進(jìn)樣濃度X(μg#8226;mL-1)作線(xiàn)性回歸，得回歸方程：A=44755X+1167.5，r=09998，結(jié)果表明，丹參酮ⅡA進(jìn)樣濃度在線(xiàn)性范圍為1.6～14.4μg#8226;mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果，丹參酮ⅡA峰面積的RSD=153％(n=5)。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別放置0、4、8、16、24、48h后，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果，峰面積的RSD=0.92％，表明供試品溶液在48h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的滲透泵片5份，按“2.2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果，丹參酮ⅡA含量的RSD=1.06％(n=5)，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取9份已知含量的復(fù)方丹參滲透泵型控釋片粉末適量（約含丹參酮ⅡA 200μg），每3份為一組，每組分別精密加入40μg#8226;mL-1 的丹參酮ⅡA對(duì)照品溶液4.0、5.0、6.0mL，按“2.2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果加樣回收率(n=9)為98.41%，RSD為164%。

2.9 樣品含量測(cè)定

取3批復(fù)方丹參滲透泵型控釋片樣品(批號(hào)：070928、071012、071020)，按“2.2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)峰面積法計(jì)算樣品中丹參酮IIA的含量，結(jié)果詳見(jiàn)表1。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)紫外分光光度計(jì)對(duì)丹參酮Ⅱ 在200nm～400nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)丹參酮Ⅱ在270nm 處吸收度最大，故檢測(cè)波長(zhǎng)選擇270nm。本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)條件與《中華人民共和國(guó)藥典》(2005年版)中對(duì)復(fù)方丹參片中丹參酮Ⅱ 的含量測(cè)定的HPLC條件相符。

因丹參酮ⅡA對(duì)光熱敏感、易分解變質(zhì)，不穩(wěn)定，在制備過(guò)程中應(yīng)加以注意，標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)置于棕色容量瓶中，配制溶液時(shí)應(yīng)注意低溫避光操作。

本實(shí)驗(yàn)試用了不同比例的流動(dòng)相及不同的流速進(jìn)行篩選優(yōu)化后，結(jié)果當(dāng)流動(dòng)相為甲醇∶水為85∶15，流速為1.0 mL#8226;min-1時(shí)，樣品中丹參酮IIA峰與雜質(zhì)峰完全分離，出峰時(shí)間短，峰形好。選擇0.6，0.8，1.0，1.2 mL#8226;min-1的流速進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)流速為10 mL#8226;min-1時(shí)峰形好，結(jié)果最為滿(mǎn)意。進(jìn)樣濃度在1.6～14.4μg#8226;mL-1范圍內(nèi)線(xiàn)性良好，r=09998，回收率高。選定上述色譜條件的流動(dòng)相，可作為該制劑丹參酮IIA含量的測(cè)定。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2005年版一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

［2］ 石 遠(yuǎn)，姜同英，王思玲.丹參酮ⅡA及其制劑開(kāi)發(fā)［J］.世界臨床藥物，2007，28（7）：439-441，443.



(責(zé)任編輯：王尚勇)

Determination of Tanshinone ⅡA in Compound Danshen

Osmotic Pump Controlled Release Tablets by HPLC

Su Dan，Hu Rongfeng，Yang Min，Zhao Hong，Zhu Jinyan

(1.Anhui College of Traditional Chinese Medicine，College of Pharmacy；Hefei， Anhui230038，China； 

2.Anhui Province Key Laboratory of R D of Chinese Medicine，Hefei， Anhui， 230038，China)

Abstract:Objective:To develop a HPLC method for the determination of Tanshinone ⅡA in Compound Danshen osmotic pump controlled release tablets.Methods： Chromatography was carried out on a Hypersil ODS C18(4.6mm×250mm，5μm)，using a mobile phase of alcohol-water(85：15) with a flow rate at 1.0 mL#8226;min-1. The UV detective wavelength was 270 nm.Results：Within1.6～14.4μg#8226;mL-1Tanshinone ⅡA had a good 1inearity (r=0.9998)，the average recovery was 98.41% with RSD of 1.64%. Conclusion： The method is accurate，sensible， reproducible，simple and can be used in the quality control of Compound Danshen osmotic pump controlled release tablets. 

Key words: HPLC；Compound Danshen；Osmotic pump controlled release tablets；Tanshinone