針灸對化療小鼠骨髓粒系細胞動態變化的影響

●趙喜新　王和平　田開宇　黃喜梅

(河南中醫學院針推系,鄭州450003;1河南省醫學科學研究所)

摘要為了分析針灸對抗化療藥物所致骨髓抑制,用環磷酰胺(CY)建造小鼠骨髓抑制模型,隨機分為CY加艾灸組、CY對照組、CY加針刺組,并與正常小鼠對照。每隔48小時檢測股骨髓有核細胞總數、骨髓細胞分類計數。結果顯示:灸、刺可加快造血細胞分裂增殖,促進白細胞向外周血釋放,尤其對粒系作用明顯。

主題詞骨髓/針灸效應骨髓細胞/針灸效應粒細胞/針灸效應

針灸能夠升高化療藥物環磷酰胺(CY)所致小鼠外周血降低的白細胞。筆者曾觀察了白細胞的動態變化并做了報道^[1]。為了進一步闡明針灸升高白細胞的機制,我們觀察了針灸對CY化療小鼠骨髓造血細胞及粒系細胞動態變化的過程,現報告如下。

1材料及方法

1.1實驗動物及化療藥物

健康雄性昆明種小鼠,7周齡,體重20～30g(河南醫科大學實驗動物中心提供)。CY(上海第十二制藥廠產品)。

1.3動物分組及造模

64只小鼠隨機分為4組:A組19只為CY加艾灸治療組(艾灸組);B組19只為CY對照組(對照組);C組19只為CY加針刺治療組(針刺組);D組7只為正常對照組(正常組)。A、B、C組小鼠按200 mg/kg腹腔一次性注射CY,CY用生理鹽水配制成10 mg/ml;D組則腹腔注射同體積生理鹽水。

1.4針灸治療

各組小鼠于腹腔注射后立即開始針灸治療或對照處理,每日1次,連續6天,各組配對同時進行。將A組小鼠伏臥固定于木板上,在"大椎"、"膈俞"穴(模擬大鼠穴位定位法^[2])上涂醫用凡士林少許,制小艾炷(稍大于綠豆,重約1.5 mg),直接放在"大椎"、"膈俞"穴上,用線香點燃,待艾炷燃至小鼠掙扎時,即用鑷子夾去,每穴4壯。同法固定C組小鼠,取雙側"足三里"、"三陰交"穴,用直徑為0.22 mm,長13 mm毫針,刺入3 mm左右,留針5 min。B、D組小鼠僅陪同固定,不治療。

1.5檢測

從對小鼠注射時算起的第3,5天,A、B、C組各頸椎脫位處死6只,第7天將4組全部脫頸處死,查股骨髓有核細胞總數,骨髓細胞分類計數,方法參照文獻^[3]。

2結果

2.1骨髓有核細胞

各組小鼠骨髓有核細胞數見表1。

從表1可見,小鼠用CY后的第3天,各組間股骨髓有核細胞總數差異無統計學意義,但較正常動物明顯減少(正常組第7天數據作為正常對照指標,后同)。第5天,有核細胞呈現A>C>B,差異有統計學意義,說明針灸刺激了造血細胞增殖,艾灸效果最好。第7天,A、B、C組骨髓有核細胞又較第5天明顯增加,灸、刺組仍優于對照組,但數量少于正常組。

2.2骨髓細胞分類

各組小鼠骨髓細胞分類計數見表2(僅列出粒系)。

3討論

小鼠注CY的第3天,各組有核細胞總數相近,但粒系百分數合計呈現B>C>A,差異具有顯著統計學意義。進一步觀察可見成熟池(晚幼、桿狀、分葉)細胞所占百分比均呈現B>C>A,似可說明,在骨髓有核細胞相近的前提下,灸、刺使成熟池百分比減少,是由于向外周血中釋放的原故,實際上第3天灸、刺已經顯示出了促進造血細胞增殖的效果。

小鼠注CY的第5天,粒系百分數合計由第3天的B>C>A而變為A>C>B,盡管〖WTBX〗P>0.05,由于①對比發生逆轉,②骨髓有核細胞總數此時呈現A>C>B,所以具有醫學意義,進一步說明艾灸和針刺加速了骨髓粒細胞的分裂增殖和成熟。另外從造血細胞分裂增殖的時相分析:由于第3天灸、刺組骨髓成熟池細胞百分比少于對照組,反饋性調節增殖池(原始、早幼、中幼)細胞加速分裂成熟,相隔48h的第5天,這個效應通過中幼百分比印證,呈現A>C>B,并且A>B有極顯著統計學意義。相隔早幼時相,原始粒細胞的百分比呈現B>C>A,這可能是處理方法造成的假象,如將各組原始粒細胞參照表1換算為絕對數:艾灸組=1246.7萬×17.5%=218萬;針刺組=816.7萬×26.8%=219萬;對照組=616.7萬×28.0%=173萬。結果仍是刺、灸組多。

小鼠注CY的第7天,粒系百分數合計A>C>B,A>B差異有顯著統計學意義,C>B差異不顯著。由于骨髓有核細胞針刺組同樣高于對照組,參照表1換算成絕對數,仍具有醫學意義。第7天,3組注CY小鼠各類粒細胞百分比均高于正常組(有類白血病反應,此處不討論),提示小鼠注CY后,粒系細胞立即被殺滅,百分比減少,以后迅速的反饋性調節,使粒系增高并超越正常小鼠。借助文獻^[1]數據,當外周血白細胞低于正常水平時,艾灸和針刺加強這種負反饋,可使外周血白細胞較快的回升。當第7天外周血白細胞已接近或超越正常水平時,從骨髓粒系增殖池和成熟池的百分比分析,艾灸和針刺仍起到較好的負反饋調節作用,使增殖池百分比低于對照組,從而抑制外周血白細胞過高的反跳,因此說明,針灸還可治療外周血白細胞增高癥。從我們的預實驗看到^[4],單純造模,可使外周血白細胞的反跳(高于正常小鼠)持續相當長一段時間。第7天的數據提示,灸刺可減輕反跳。

4結論

臨床上用針灸治療化療所致白細胞減少癥,通過本實驗可以證明3點作用機制:第1,灸、刺提高骨髓有核細胞的絕對數,并在第5天開始提高中性粒系的相對數,即是促進了骨髓造血細胞的分裂增殖,尤其對粒系作用明顯。第2,在骨髓有核細胞絕對數相近的條件下,灸、刺組成熟池細胞百分比下降,似說明是灸、刺促使其向外周血中釋放所致。第3,提示灸、刺可以調整白細胞生成過程中負反饋調節的力度,從而可防止因化療藥物所致白細胞過高的反跳,推測灸、刺還有可能治療白細胞增多癥。

5參考文獻

1趙喜新.針灸對化療小鼠白細胞動態變化的影響.河南中醫,1996;16(4):216

2華興邦,等.大鼠穴位圖譜的研制.實驗動物與動物實驗,1991;(1):2

3施新猷,等.醫學動物實驗方法.北京:人民衛生出版社,1980:279

4趙喜新,等.環磷酰胺引致的小鼠白細胞減少模型及動力學分析.上海實驗動物科學.1998;18(1):12

(收稿日期:19990320,齊淑蘭發稿)