p16在宮頸癌組織中的表達及臨床意義

周 莉，孔 敏，李海霞，馬曉艷

（1.吉林大學第一醫院 婦產科，吉林 長春130021；2.濟寧醫學院附屬醫院 婦產科，山東 濟寧272029；3.吉林省婦幼保健院，吉林 長春130061；4.吉林大學第二醫院 婦產科，吉林 長春130041）

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，宮頸癌的發生、發展歷經慢性宮頸炎、CINⅠ—CINⅢ級、浸潤性宮頸癌，是一個慢性、持續性及漸進性的過程[1]。宮頸活檢、病理組織學檢查是診斷宮頸癌及CIN的金標準。該方法的侵害性及取材和HE染色分辨微小病灶的局限性，導致其重復性低，漏診率高。細胞學技術的應用，使該方法重復性好，但對于一些細胞學圖像中的不明來源細胞（AS—CUS）無法做出正確判斷。近年來免疫組織化學染色對于目的蛋白篩查已成為重要的病理診斷學輔助手段。

p16基因又叫 MTS1（multiple tumor suppressor）基因，直接參與細胞周期的調控，擔負調節細胞增殖與分裂的作用。其產物p16基因蛋白是細胞周期素依賴性激酶（CDK）抑制物，對Rb基因控制的細胞增殖周期起負調控作用[2]，近年來，出現了p16與宮頸癌及CIN相關研究報道[3，4]，本實驗通過免疫組織化學定位研究，為促進免疫細胞化學應用于臨床宮頸癌及CIN的篩查奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 研究對象 （1）隨機選取2009年6月至2010年12月在吉林大學第二醫院經病理確診的宮頸病變患者169例，其中，浸潤性宮頸癌102例（包括宮頸鱗癌79例，宮頸腺鱗癌20例，宮頸腺癌3例），平均年齡46.20歲（32－68歲）；CINI級11例，平均46.15歲（30－56歲）；CINⅡ—CINⅢ 35例，平均48.03歲（36－56歲）；慢性宮頸炎組織21例，平均38.93歲（28－58歲）。（2）對照組：因子宮內膜息肉和功能失調性子宮出血行全子宮切除的正常宮頸的婦女17例，平均45.91歲（39－53歲）。術后切取大小約1 cm×1cm×1cm宮頸組織一塊，4%甲醛溶液固定，24h后常規石蠟包埋，連續切片，制成2.5μm厚的切片，65℃烤箱450min，室溫保存待免疫組化研究[5]。

1.2 檢測方法 嚴格按照免疫組織化學法按GBI免疫組化二步法試劑盒說明書進行。

1.3 結果判定 p16陽性染色為細胞核和胞漿出現棕黃色顆粒。判定標準：鏡下選取5－10個高倍視野，分別計數100－200個細胞，結果采用半定量計數法，我們判定：－／＋為陰性表達；＋＋／＋＋＋為陽性過表達；＋為陽性表達。上皮細胞數的計數方法：采用每張切片隨機觀察5個高倍視野（40×10），計數每個高倍視野的增殖的上皮細胞數量及有p63蛋白陽性表達的上皮細胞數量，分別取每個視野的平均數，結果以（±s）表示。

1.4 統計學方法 采用SPSS18.0統計軟件包進行統計學分析。數據用（±s）表示，配對資料的統計學分析采用t檢驗，組間比較及分類資料采用χ2檢驗，顯著性界限為P＝0.05。

2 結果

2.1 p16蛋白的陽性表達情況

p16蛋白在正常宮頸組織、慢性宮頸炎組織、CINⅠ級、CINⅡ—CINⅢ級和宮頸癌組織中的陽性表達率分別為 0%、23.81%、45.46%、68.57%及96.08%。見表1。

表1 p16蛋白在宮頸病變組織中的陽性表達

2.2 p16蛋白在宮頸病變中的陽性表達情況與上皮細胞增殖狀態的關系

2.2.1 p16蛋白在宮頸癌（鱗癌和腺鱗癌）、CINⅡ—CINⅢ組、CINⅠ組及慢性宮頸炎組上皮細胞中陽性表達與上皮細胞增殖狀態的關系

p16蛋白在慢性宮頸炎組、CINⅠ組、CINⅡ—CINⅢ組和宮頸癌（鱗癌和腺鱗癌）組中的上皮細胞中的陽性表達數量分別為（58.42±5.24）、（155.83±5.53）、（362.22±7.47）、（749.44±6.43），其表達差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖1。

圖1 p16蛋白在宮頸癌組（鱗癌和腺鱗癌）、CINⅡ—CINⅢ組、CINⅠ組及慢性宮頸炎組中上皮細胞陽性表達與上皮細胞增殖狀態的關系

2.2.2 p16蛋白在宮頸癌組、CINⅡ—CINⅢ組、CINⅠ組、慢性宮頸炎組上皮細胞中陽性表達與上皮細胞分化狀態的關系

經統計學分析：發現p16蛋白在宮頸癌、CINⅡ—CINⅢ組、CINⅠ組、慢性宮頸炎組上皮細胞中陽性表達情況與上皮細胞分化狀態無關。

2.3 p16蛋白在各組宮頸病變間質組織中的表達情況

在各組宮頸病變間質中，可觀察到在一些宮頸柱狀上皮細胞、間質細胞（這里主要包括間質中的成纖維細胞、淋巴細胞）、子宮內膜腺上皮細胞中存在p16蛋白陽性表達的現象。見表2。

表2 p16蛋白在各組宮頸病變間質組織中的陽性表達

2.4 p16蛋白在微小癌灶中的陽性表達

本研究發現：在2例慢性宮頸炎組織的間質中見到p16蛋白陽性表達的微小癌灶。提示，對宮頸組織進行p16蛋白檢測，有助于發現微小浸潤癌。

3 討論

p16基因又稱多腫瘤抑制基因MTS1、CDRN2或者INR4I，其編碼的p16蛋白通過抑制細胞周期蛋白依賴性激酶（CDR）對細胞周期起負調控作用。p16蛋白在人類惡性腫瘤中存在相當普遍。一些研究表明，p16蛋白在宮頸上皮內瘤變及宮頸癌組織中陽性表達率顯著增高[6，7]，與我們的研究結果相符。

本研究結果還表明，在CINⅡ—CINⅢ和宮頸癌（包括鱗癌、腺癌和腺鱗癌中）p16呈現中等或強陽性胞漿、胞核表達，與文獻報道相符[8，9]。p16蛋白陽性細胞數隨CIN及宮頸癌細胞數量增加而增加，提示：p16蛋白表達水平增高可能反映其抑制細胞周期的作用被阻斷以及反映CIN和宮頸癌異常增殖的細胞呈反饋刺激P16基因高表達現象。

在各組中，可觀察到一些宮頸柱狀上皮細胞、間質成纖維細胞、淋巴細胞、子宮內膜上皮細胞表達p16蛋白的現象，其機制不詳，需進一步研究。有趣的是，p16蛋白可在宮頸癌微小病灶中呈強陽性表達，提示其有助于發現這種微小宮頸浸潤癌。

通過免疫組織化學定位研究，尋找與宮頸CIN和宮頸癌異常增殖失分化及HPV感染有關，又可表明鱗狀細胞來源的生物學標記物，可能有助于降低微小宮頸癌及CIN的漏診率，也可能有助于細胞學技術與免疫細胞化學技術相結合進而提高AS—CUS的診斷率。

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