聯合指紋圖譜和活性綜合評價的荊防顆粒質量控制研究

中圖分類號：R285 文獻標志碼：A 文章編號：1002-4026（2025）05-0022-09

Abstract：Combined fingerprinting and comprehensive assessment of activity techniques were used in this study to determine thequaity control of Jingfang granules.Separation wasperformed usingan Agilent TC-C18 chromatographic column （ 4.6mm×250mm ， 5μm ），gradient elution performed using an acetonitrile- .0.8% formic acid aqueous solution，and ESI-TOF/mass spectrometer was used for analysis.Thechemical constituents of Jingfang granules wereidentified through the precise molecular weightinformationof the parent anddaughter ionsof compoundsandby consulting references. Moleculardocking wasusedtoexamine thebondingabilityof the following fivechemical componentstoneuraminidase （NA）： prim-O-glucosylcimifugin（POG），ferulicacid，hesperidin，naringin，and sec-O-glucosylhamaudol（SOGH）.The antioxidant activityof thefivecomponentswasevaluatedbyanABTSfreeradical scavenginginvitroexperiment. Fingerprintingandquantitative assaywere used toevaluatethequaityof Jingfang granules.Fromtheresults，twenty-four chemicalcomponents wereidentified within the Jingfanggranules.Molecular dockingresultsrevealed the high binding capacity of NA to POG，ferulic acid，naringin，and SOGH，with a minimum recorded binding energy of .Free radicalscavenging invitroexperiments revealedthatal thefivecomponents exhibitedcertainantioxidantactities.The compositional similarityof diferent batches of Jingfang granuleswas foundtoberelativelyclose，but there were some diferenes inthecontentof thefivecomponents，whichmaybeatributedtodiferences inthesources of Chineseherbal medicines.This study provides methodological andconceptual supportforoverallqualityevaluationstudies of Jingfang granules.

Keywords ： Jingfang granules;fingerprinting；comprehensive assessment of activity；molecular docking

流感具有傳染性強、傳播快、易發生變異等特點，對人類健康產生嚴重影響[1-2]。流感主要由甲型和乙型流感病毒引起，其發病過程包括病毒侵襲、炎癥反應、氧化應激等[3-4]。抗流感的主要治療策略包括;抑制神經氨酸酶活性從而有效阻止病毒的復制和釋放;抑制炎癥介質的釋放、調節免疫細胞的增殖和活化[5-6]；另外，抗氧化應激也是一個重要的治療方式，通過補充抗氧化劑，清除自由基和過氧化物，減少炎癥引起的氧化損傷[7]。

荊防顆粒是在“治疫第一方”人參敗毒散的基礎上加減組方而形成的現代中藥制劑[8]。最早記載于明代張時徹的《攝生眾妙方》荊防敗毒散，全方由羌活、柴胡、前胡、獨活、枳殼、茯苓、荊芥、防風、桔梗、川芎、甘草等11味中藥組成。以荊芥、防風、羌活、獨活為君藥，祛風解表、除濕止痛;川芎、柴胡、桔梗、枳殼為臣藥，發揮行血祛風，解表邪，降氣行痰，寬胸利氣等作用;前胡、桔梗、茯苓為佐藥，疏風、宣肺、健脾祛痰;甘草調和諸藥以為使[10-1]。據文獻報道[12]，荊防顆粒在臨床常用于甲型 H1N1 流感、急性病毒性上呼吸道感染等的預防及治療。荊防顆粒可通過抑制流感病毒復制，干預炎癥反應和免疫應答等方式抑制流感作用機制[13]。趙眉眉等[14]研究發現，荊防顆粒能夠抑制肺部炎癥、改善肺部能量代謝和肺微循環、抵抗病毒感染，進而發揮肺保護作用。現代研究表明，荊防顆粒通過多成分、多靶點發揮抗流感作用。至今為止，《中華人民共和國衛生部藥品標準（中藥成方制劑第二冊）》所記錄的荊防顆粒標準，只有性狀、顆粒劑檢查項這方面的描述，難以實現有效的質量控制[15-16]。已有學者采用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）測定了荊防顆粒多種成分含量用于其質量控制[17]，但質控成分與藥理活性的關聯不強。

基于此，本研究提出了指紋圖譜結合活性綜合評價技術對荊防顆粒進行質量控制的研究思路，以期為提高荊防顆粒質量控制水平提供參考。

1 儀器與試劑

UltiMate 3000 高效液相色譜儀（德國 ThermoFisher 公司），Bruker Impact II ESITOF-MS 質譜儀（德國BrukerBsa公司），SBL-10DT超聲波提取器（寧波新芝生物有限公司），CPA225D電子分析天平（德國Sartorius 公司）。

對照品升麻素苷（批號DSTDS006201）亥茅酚苷（批號DSTDH001301），購于德思特生物技術有限公司，質量分數 gt;98% 。對照品阿魏酸、橙皮苷、柚皮苷（實驗室自制，經波譜數據鑒定，純度 ?98% ）。ABTS購買于Sigma 公司。實驗用水為超純水（Millpore Q-Plus 系統，美國）。荊防顆粒（批號 2782301004、0012212068、0012212075、0012212080、0012301077、0012301099、0012301031、0012301032、0012301104、0012301105 由山東新時代藥業有限公司所生產，批號121206-1、121206-2由湖南杏林春藥業有限公司所生產）購于市各大藥店。

AutoDock Tools 1.5.4、AutoGrid 4.2、AutoDock 4.2 軟件;Discovery Studio 2.5 Visualizer、Python 2.5 軟件;CORINA工具（http：//www.molecular-networks.com）;Brookheaven 數據庫（htp：//www.rcsb.org/pdb.com，用于下載靶蛋白的晶體結構）。

2 實驗方法

2.1 對照品溶液配制

分別稱定對照品升麻素苷、亥茅酚苷、阿魏酸、橙皮苷、柚皮苷各 1.0mg 溶于 10mL 容量瓶中，甲醇定容。

2.2 供試品溶液制備

待測品研磨，稱定 2g 于具塞錐形瓶中，加入甲醇 20mL ，超聲 25min ，過 0.22μm 微孔濾膜。

2.3 色譜條件

AgilentTC-C18色譜柱（ 4.6mm×250mm，5μm） ，乙睛（A） .0.8% 甲酸水溶液（B）梯度洗脫 （0～12min ，5%～5% A， 12～18min 5%～8% A，18～45 min， 8%～20% A， 45～55min ， 20%～25% A）。進樣量 10μL ;檢測波長 260nm ;柱溫 20% ;流速 0.8mL/min 。混合對照品、荊防顆粒供試品的HPLC色譜圖見圖1。

圖1混合對照品（A）和荊防顆粒供試品（B）的HPLC色譜圖HPLC chromatogram of mixed reference solution（A） and Jingfang granules （B）

2.4 質譜條件

配備有電噴霧電離源（ESI）接口的飛行時間質譜儀（ESI-Q-TOF/MS）用于質譜及串聯質譜（MS/MS）數據采集分析。儀器分別在正、負離子化模式下進行，操作參數如下：噴霧氣壓 200kPa ，干燥氣流速 10.0L/min 氣溫度 200°C ，裂解電壓 10eV ，毛細管電壓 2.5kV ，掃描范圍為 m/z50～2000 。質譜采集的數據使用DataAnalysis軟件進行分析處理。荊防顆粒成分質譜鑒定結果見OSID開放科學數據與內容附表1。

2.5 線性關系考察

配制一系列質量濃度的5種對照品溶液，在2.3項色譜條件下進樣測定。以進樣量為橫坐標 （X） ，峰面積值為縱坐標（Y）進行線性回歸。結果見表1，各成分線性關系良好。

Table1Linear relationship of each component of Jingfang granules

2.6 精密度實驗

取對照品溶液 10μL ，在2.3項下進樣測6次，測得升麻素苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、亥茅酚苷等5種成分峰面積平均標準偏差（ δ_RSD ）分別為 1.4%，1.1%，0.4%，0.9%，2.4% ，儀器精密度良好。

2.7 穩定性實驗

取同一份供試品溶液，于 0.4，8，12，16，20，24h 在2.3項下進樣測定，測得升麻素苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、亥茅酚苷等5種成分峰面積 δ_RSD 分別為 2.0%.2.4%.1.2%.1.9%.2.0%，24h 內穩定性良好。

2.8 重復性實驗

取本品適量，按2.2項下方法平行制備6份供試品溶液，在2.3項下進樣測定，測得升麻素苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、亥茅酚苷等5種成分含量 δ_RSD 分別為 1.8%.1.6%.0.7%.1.4%.2.2% ，該方法重復性良好。

2.9 加樣回收率實驗

取本品適量，分別精密稱取上述5種對照品，按照相應成分質量的 80%.100%.120% 比例加人，在2.3項進樣檢測計算回收率。測得升麻素苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、亥茅酚苷等5種成分平均回收率分別為95.82% ） 103.57% 97.40% ） 104.75% ） 105.22% ，本方法準確度良好，結果見表2。

表1荊防顆粒各成分線性關系

表2各成分加樣回收率實驗（ n=3 ）

Table 2Sample recovery rate test of each component （ n=3 ））

2.10 樣品質量分數測定

取12批荊防顆粒樣品，按2.2項方法制備供試品溶液，采用標準曲線法計算升麻素苷、阿魏酸、橙皮苷、柚皮苷、亥茅酚苷的質量分數，結果見表3。

表3各成分質量分數測定結果

單位： mg/g

Table 3Assay results of the content of each component

2.11 分子對接

使用分子對接軟件AutoDock4用于探索篩選出化合物配體與受體結合的相互作用。使用 Brookheaven數據庫進行檢索，獲取受體去甲腎上腺素結構文件，pdb代碼為1A4G。通過Pymol將1A4G 去除蛋白水分子與多余配體，導出為 PDB 文件;在 PubChem 中下載小分子配體 SDF 文件，在OpenBabel 中轉化為 Mol2 格式;Autodock4進行分子對接，計算蛋白質與配體結合能;Pymol可視化，繪制分子對接圖。

2.12 抗氧化成分驗證實驗

將ABTS 溶液（ 7.0mmol/L 和過硫酸鉀（ 4.9mmol/L 在 4°C 黑暗下反應 12h ，制備ABTS工作液。配制一系列濃度的對照品溶液，取待測液 50μL 、工作液 100μL 于96孔板中，避光 6min 后在酶標儀 734nm 處測定吸光度（A）值。甲醇為空白組，抗壞血酸（Vc）為陽性對照組，重復進行3次。按照公式（1）計算 ABTS自由基清除率。

其中， 分別為樣品組、空白組的 A 值。

以質量濃度為橫坐標 （X） ，清除率為縱坐標 （Y） 繪制標準曲線，計算各對照品ABTS自由基半數清除濃度（ IC₅₀ ）值。

2.13 指紋圖譜分析

采用國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”（2012版）對荊防顆粒的指紋圖譜進行相似度分析。

3 結果與討論

3.1 色譜條件優化

實驗發現采用為乙腈 水作為流動相時，色譜峰較多，分離較好。水相中加入不同比例的甲酸（ 0.2% 、0.4%，0.6%，0.8%，1.0%） ，結果表明乙腈 .0.8% 甲酸水體系，色譜峰對稱性較好、峰型尖銳。同樣，考察了不同的流速 （0.6，0.8，1.0mL/min） ）和不同的柱溫 （15，20，25，30^°C） ）對色譜峰的影響，實驗最終確定使用乙腈-0.8% 甲酸水， 0.8mL/min 流速下， 20% 柱溫得到較好分離且基線平穩、峰型對稱的色譜圖。此外，供試品溶液在 260nm 處色譜峰形較好，信號強度整體較高綜合考慮，確定檢測波長為 260nm 用于荊防顆粒指紋圖譜研究。

3.2 質譜分析

在正、負離子模式下，通過對照品、準分子離子峰、二級譜圖等信息，結合文獻數據、數據庫等信息進行比對，從荊防顆粒中共鑒別出24個化學成分。其中，對部分成分的質譜分析如下。

升麻素苷的鑒定：正離子模式下產生母離子 469.1716[M+H]⁺ ，負離子模式下產生 ，此化合物相對分子質量為468，查閱相關文獻[18]對照分子量確定為升麻素苷。

阿魏酸的鑒定：正離子模式下產生母離子 ，此化合物相對分子質量為194，二級質譜分析，丟失一分子 H₂O 得到 177.0569[M+H-H₂O]⁺ 碎片離子，查閱相關文獻[19]對照分子量確定為阿魏酸。

橙皮昔的鑒定：正離子模式下產生母離子 611.1999[M+H]⁺ ，此化合物的相對分子質量為610，二級質譜分析，準分子離子丟失一分子 C₆H₁₀O₅ 后得到 m/z449.1446[M+H-C₆H₁₀O₅]⁺ 碎片離子，再脫去一分子（20號 C₆H₁₀O₄ 得到 m/z303.0876[M+H-C₆H₁₀O₅-C₆H₁₀O₄]⁺ 的碎片。查閱相關文獻[20]對照分子量確定為橙皮苷。

柚皮昔的鑒定：正離子模式下產生母離子 581.1887[M+H]⁺ ，此化合物的相對分子質量為580，二級質譜分析產生離子碎片 m/z 為273.0777，分子質量減少308，其準分子離子丟失一分子 C₆H₁₀O₅ 后再脫去一分子 C₆H₁₀O₄ 得到m/z 273.0777[ M+H-C₆H₁₀O₅-C₆H₁₀O₄]⁺ 的碎片，查閱相關文獻[21]對照分子量確定為柚皮苷。

3.3 分子對接

分子對接是一種預測可能的配體與受體蛋白結合親和力的計算方法。圖2（a）顯示出升麻素苷與1A4G蛋白對接情況，主要與蛋白活性位點處 ARG-146、GLY-346、LYS-342、ASP-341等氨基酸殘基發生相互作用，形成5個氫鍵，氫鍵鍵長分別為 2.1，2.5，2.1，1.8，1.9AA 。圖2（b）顯示出阿魏酸與1A4G蛋白對接情況，主要與蛋白活性位點處LYS-159、GLU-207、TYR-209等氨基酸殘基發生相互作用，形成鍵長分別為2.9、2.1、2.2 A的氫鍵。圖2（c）顯示出柚皮苷與1A4G蛋白對接情況，主要與蛋白活性位點處LYS-417、GLU-186、GLU-207、LYS-204、LYS-159、PHE-171、LYS-127等氨基酸殘基發生相互作用，形成9個氫鍵，氫鍵鍵長分別為2.0、2.5、1.6、2.0、3.2、2.5、2.2、2.4、2.1A。圖2（d）顯示出亥茅酚苷與1A4G蛋白對接情況，主要與蛋白活性位點處PHE-171、TYR-134等氨基酸殘基發生相互作用，形成鍵長分別為 3.5AA.1.9AA.2.8AA 的氫鍵。

通過Autodock計算主要成分與關鍵靶點結合能（見表4），結合能小于 $- 5 ＼ ＼mathrm { k c a l / m o l （ 1 ＼ k c a l / m o l } = 4 . 1 9 ＼ ＼mathrm { k J / m o l } ＼$ 表示兩者有良好結合活性，值越小，對接結果越理想，結合親和力越高。對接結果顯示靶點蛋白1A4G與升麻素苷、阿魏酸、柚皮苷、亥茅酚苷對接結果理想，最低對接能分別為 -8.79_?-5.33_?-5.57_?-5.89kcal/mol_? 可視化分析結果表明升麻素苷、阿魏酸、柚皮苷、亥茅酚苷都能與靶點蛋白形成穩定、數目在3～9個之間的氫鍵。分子對接結果表明荊防顆粒中的活性成分對NA具有一定抑制作用，為荊防顆粒防治流行性感冒提供一定理論依據。

Table 4Docking interaction between active ingredients and their targets

圖2分子對接可視化圖

Fig.2Visualization of molecular docking

注： 1kcal/mol=4.19kJ/mol_c 2

3.4 抗氧化活性驗證

本研究采用體外ABTS自由基清除實驗對篩選出的活性成分進行驗證。結果如表5所示，5種活性成分均具有一定的抗氧化活性。相比較而言，升麻素苷、阿魏酸、橙皮苷具有強抗氧化活性， 50μg/mL 時對ABTS的清除率分別為 74.10%.80.16%.78.48% IC₅₀ 分別為（ 2.37±0.008 、 （0.64±0.053） ）、 ?3.27±0.457 ） μg/mL ，其中阿魏酸抗氧化活性及清除率優于對照組抗壞血酸（ 50μg/mL 時對 ABTS 的清除率 79.56% ， IC₅₀ 值為（ 0.83±0.043^? ） μg/mL 。柚皮苷、亥茅酚苷抗氧化活性較弱， 50μg/mL 時對ABTS 的清除率分別為 42.76% ！43.23% IC₅₀ 分別為（ 9.46±0.291 ）、 13.73±1.849 ） μg/mL 。

表4活性成分與作用靶點對接情況

表5抗氧化活性驗證結果

Table 5Results of antioxidant activity verification

注：a表示樣品質量濃度為 50μg/mL 時對ABTS的清除率;b表示陽性對照

3.5 相似度評價

選定不同批次荊防顆粒的上述31個成分作為共有峰進行譜峰匹配，采用夾角余弦法用于其相似度計算，結果見表6。

表6各樣品HPLC指紋圖譜相似度評價結果

Table 6Results of the evaluation of HPLC fingerprint similarity for each sample

由表6可以看出，12批荊防顆粒藥品的相似度均在0.99以上，較為接近，說明其整體質量差別較小，不同批次制備工藝較為穩定。

3.6 質量分數測定

根據表3各成分質量分數測定結果分析，升麻素苷、阿魏酸、橙皮苷、柚皮苷及亥茅酚苷5種活性成分質量分數平均值分別為 （0.09±0.02） 、 （0.12±0.01 ）、 （1.80±0.39 、 1.36±0.26 ）、 0.020±0.003 ） mg/g 。5種成分中，橙皮苷、柚皮苷的含量較高，質量分數范圍分別在 1.28～2.50.0.96～1.71mg/g 之間。此外，部分批號（121206-1、121206-2、2782301004）的荊防顆粒5種成分質量分數與其他批號含量存在一定差別，這也許是由于生產廠家不同，其原料或是樣品制備工藝某些環節有差別，值得進一步探究。

4結論

本研究初步探索了指紋圖譜結合活性綜合評價技術用于荊防顆粒質量控制研究的可行性。采用HPLC-DAD-ESI-TOF/MS技術分析鑒別荊防顆粒化學成分，鑒別出24個化學成分。在此基礎上建立了荊防顆粒的化學指紋圖譜，相似度分析表明不同批次荊防顆粒化學一致性較好。分子對接表明，靶點蛋白神經氨酸酶與荊防顆粒中5種成分（升麻素苷、阿魏酸、橙皮苷、柚皮苷、亥茅酚苷）均有一定的結合。其中，升麻素苷、阿魏酸、柚皮苷、亥茅酚苷最低結合能小于 ，結合親和力高。體外ABTS抗氧化活性實驗表明，5種成分均具有一定的抗氧化活性，其中，阿魏酸抗氧化活性最強。在此基礎上測定了不同批次荊防顆粒中5種活性成分（升麻素苷、阿魏酸、橙皮苷、柚皮苷、亥茅酚苷）的質量分數，發現不同廠家5種活性成分質量分數存在一定差別，有待進一步研究。本研究的目的在于提出一種中成藥質量控制研究策略，并結合代表性藥理模型進行初步探索，但研究方法和藥理活性并不局限于此。隨著現代分析技術和藥理學的發展，后續可以進一步改進分析手段或增加藥理學評價模型以及對更多的化學成分進行評價，以提高質量評價的整體性和客觀性。本研究為荊防顆粒的質量控制研究提供了方法和思路支持，并為相關中成藥的質量控制提供了參考。

參考文獻：

[1]林裕貴，李程頤，李培群，等.流感病毒感染中炎癥小體的激活和調控機制[J].中國人獸共患病學報，2021，37（8）：741-747.DOI：10.3969/j.issn.1002-2694.2021.00.084.

[2]MAJUMDER J，MINKO T.Recentdevelopments on therapeutic and diagnostic aproaches for COVID-19[J].The AAPS Joual，2021，23（1）： 14. D0I：10.1208/s12248-020-00532-2.

[3]李文鵬，張驍慧，徐菡，等.薯皂苷抗氧化應激機制研究進展[J]．中國醫藥導刊，2024，26（2）：160-164.D0I：10.3969/j.issn.1009-0959.2024.02.017.

[4]趙琰，胡杰，張貴民，等.荊防敗毒散的源流與應用[J]．環球中醫藥，2020，13（11）：1996-2002.DOI：10.3969/j.isn.1674-1749.2020.11.042.

[5]DENG D，ZHAOMF，LIUHW，et al. Xijiao Dihuang Decoction combined with Yinqiao Powder promotes autophagy-dependentROS derease toinhibitROS/NLRP3/pyroptosisregulationaxisin influenzavirusinfection[J].Phytomedicine：InterationalJourmal of Phytotherapy and Phytopharmacology，2024，128： 155446. DOI： 10.1016/j.phymed.2024.155446.

[6]馮群，孫成宏，李市榮，等.基于網絡藥理學和實驗驗證的荊防合劑有效成分抗炎作用機制研究［J].中國中藥雜志，2022，47（20） ： 5481-5487. DOI： 10.19540/j.cnki.cjcmm.20220414.401.

[7]HAQUE MM，MURALEDP，LEEJS.Roleof microRNA and oxidative stressininfluenza Avirus pathogenesis[J]. InteationalJournal of Molecular Sciences，2020，21（23） ：8962.DOI： 10.3390/ijms21238962.

[8]倪雯婷，侯林，馬大龍，等.基于p38MAPK/NF- σ_κB 通路探索荊防合劑治療甲型H1N1流感的作用機制［J]．中藥藥理與臨床，2023，39（1）：12-17.

[9][明］張時徹編.攝生總論［M].［清]王梅增補.李玉清校注.北京：中國中醫藥出版社，2015：194.

[10]馮雪，高玉喬，范瓊瑛，等.采用LC-ESI/MS方法同時測定荊防敗毒口服液中4個有效成分含量[J].藥物分析雜志，2017，37（8） ： 1489-1496. D01： 10.16155/j.0254-1793.2017.08.19.

[11]黃煌.基于經方醫學對新型冠狀病毒肺炎的思考［J]．南京中醫藥大學學報，2020，36（2）：152-156.DOI：10.14148/j.issn.1672-0482.2020.0152.

[12]彭旋鈴，張志玲，謝更鐘.荊防敗毒散加減治療登革熱疑似病例1例[J]．中醫藥導報，2018，24（6）：102-103.

[13]黃佳奇，譚影影，陳美琳，等.基于網絡藥理學及分子對接技術探討荊防顆粒治療流感的作用機制[J].中國醫院用藥評價與分析，2021，21（11）：1291-1297. D0I：10.14009/j.issn.1672-2124.2021.11.003.

[14]趙眉眉，姚璐，姚景春，等.荊防顆粒抗感染性肺炎的靶點發現及分子機制研究[J].中國中藥雜志，2023，48（3）：789-796.DOI： 10.19540/j.cnki.cjcmm.20220929.402.

[15]梁紅寶，姜宇珺，袁曉梅，等.基于GC-MS 和UPLC-Q-Exactive MS 技術的荊防顆粒化學成分研究[J].中草藥，2022，53（6） ： 1697-1708. DO1： 10.7501/j.issn.0253-2670.2022.06.012.

[16]李紹平，趙靜，錢正明，等.色譜技術在中藥有效成分辨識中的應用進展[J]．中國科學B輯，2010，40（6）：651-667.

[17]劉雯，李峰，孫春亮，等.HPLC 同時測定荊防顆粒中6種成分[J].中國實驗方劑學雜志，2016，22（17）：55-58.DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.2016170055.

[18]高紅梅，張淼，曹文正，等.基于HPLC-IT-TOF-MS 分析的防風凈制去蘆研究[J]．中藥材，2022，45（6）：1383-1387.DOI： 10.13863/j.issn1001-4454.2022.06.019.

[19]邵怡，楊玉佩，李家宇，等.HPLC-Q-TOF-MS/MS 分析防風芍藥湯水煎液的化學成分[J]．中國實驗方劑學雜志，2018，24（8） ： 54-59. D0I： 10.13422/j.cnki.syfjx.20180811.

[20]祝婧，袁恩，牟俊雍，等.基于UPLC-Q/TOF-MS 分析江西特色炮制工藝對枳殼化學成分的影響［J]．中國實驗方劑學雜志，2020，26（16）：142-153.D0I：10.13422/j.cnki.syfjx.20201069.

[21]MIAO W，LIUXJ，LIN，etal.Poarity-extendedcomposition profilingvia LC-MS-based metabolomicsapproaches：Akeytofunctional investigationofCitrus urantiumL[J].Food Chemistry，2023，405：134988.DOI：10.1016/j.foodchem.2022.134988.