惠陽區(qū)涉禽場所外環(huán)境禽流感病毒監(jiān)測結果分析

禽流感病毒歸屬正粘病毒科甲型流感病毒屬，其基因組容易出現(xiàn)變異，能通過呼吸道和感染禽類的分泌物或排泄物密切接觸等途徑進行傳播，引發(fā)人感染動物源性流感，對公共衛(wèi)生安全構成嚴重威脅。涉禽場所外環(huán)境是病毒傳播的重要媒介，對其開展禽流感病毒監(jiān)測，是防控人感染禽流感的關鍵所在。惠陽區(qū)家禽養(yǎng)殖業(yè)和活禽交易市場較為活躍，禽流感病毒傳播風險較高。為全面了解惠陽區(qū)涉禽外環(huán)境中禽流感病毒的污染狀況，明確不同場所類型、采樣部位及時間段的病毒分布特點，本研究在2024年11月26日—2025年5月20日期間進行外環(huán)境采樣和實時熒光RT-PCR檢測，目的是為科學防控禽流感、降低人感染風險提供數(shù)據支持。

1材料與方法

1.1樣本來源

擬選取惠州市惠陽區(qū)秋長、淡水、新圩、鎮(zhèn)隆、永湖、良井、平潭、沙田、三和經濟開發(fā)區(qū)等9個鎮(zhèn)街為監(jiān)測范圍，2024年11月26日—2025年5月20日每月對惠陽區(qū)涉禽場所外環(huán)境進行動態(tài)監(jiān)測。監(jiān)測范圍涵蓋家禽養(yǎng)殖場、活禽銷售檔口、農貿市場禽類交易區(qū)等重點區(qū)域。樣本類型有籠框、秤、脫毛機、糞便、污水、刀具、砧板、地面、禽舍、運輸車輛、進食工具等。

1.2樣本采集與保存

參照《廣東省禽類市場環(huán)境禽流感病毒污染季節(jié)性監(jiān)測方案（2015版）》，分別在2024年11月26日、2024年12月31日、2025年2月7日、2025年3月11日、2025年4月16日及2025年5月20日進行周期性采樣，累計采樣240份。在采樣點內，用無菌棉拭子浸潤病毒保存液后，以螺旋式擦拭涂抹的方式采集家禽及鳥類糞便、籠框、砧板等外環(huán)境樣本，把拭子折斷放進含

3mL病毒保存液的螺口凍存管，采樣時注意采樣拭子不要與禽類接觸；所有標本立刻放在4 C 冷藏箱保存，12h內送達實驗室，運輸過程嚴格遵守《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》；樣本采集后做好環(huán)境樣品監(jiān)測信息收集。

1.3禽流感病毒核酸檢測

第一，RNA提取。

取 200μI 樣本使用江蘇碩世生物生產的病毒核酸提取試劑盒（磁珠法），在全自動核酸提取儀（江蘇碩世）中經過裂解、磁珠吸附、混勻、洗滌、洗脫等步驟，完成RNA提取，最終洗脫體積為 60μL 。提取過程設置陰、陽性對照，確保操作規(guī)范。

第二，核酸擴增。

采用熒光定量RT-PCR技術，借助LightCycler？480I實時熒光定量PCR系統(tǒng)（Roche）開展檢測，選用甲型流感病毒通用型檢測試劑盒（上海伯杰），反應體系為 25μL ，其中含 5μL RNA模板， 20μL 反應液。擴增條件設定如下： 50^qC 進行逆轉錄 10min 95^°C 預變性 ?5min ；接著以95 Φ^°Cl0s. 55‰ s的條件變性、退火、延伸，循環(huán)40次。對于陽性樣本，進一步使用禽流感病毒H5/H7/H9單重的分型檢測試劑盒（上海伯杰），反應體系及操作條件均按說明書執(zhí)行，所有試劑均在有效期內使用，實驗全程遵循《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》。

第三，結果判定。

根據試劑盒質量標準，Ct值 ≤35 且存在典型擴增曲線判定為陽性；Ct值 gt;38 或無典型擴增曲線判定為陰性；當 35

1.4統(tǒng)計分析

運用SPSS26.0軟件構建數(shù)據庫，計量資料用實際檢測數(shù)和陽性數(shù)（ n ）呈現(xiàn)，計數(shù)資料以率 （% ）表示。針對不同場所類型、采樣部位及時間分布的陽性率，采用x檢驗進行比較，以 Plt;0.05 作為差異具有統(tǒng)計學意義的判斷標準。

2結果與分析

2.1禽流感病毒通用型核酸檢測情況

第一，總體監(jiān)測情況。

2024年11月26日—2025年5月20日，惠陽區(qū)累計采集外環(huán)境樣本240份，經實時熒光RT-PCR檢測，禽流感病毒核酸陽性樣本64份，總陽性率達 26.67% 0第二，不同場所類型監(jiān)測情況

不同場所監(jiān)測數(shù)據顯示，3類監(jiān)測場所中禽流感病毒核酸陽性率由高至低依次為：活禽銷售檔口（43/130， 33.08% ）、家禽養(yǎng)殖場（19/95， 20.00% ）、農貿市場禽類交易區(qū)（2/15， 13.33% ）。各場所間陽性率差異具有統(tǒng)計學意義（ x²=6.25 ， Plt;0.05 ），具體見表1。

第三，不同采樣部位禽流感病毒檢測情況。

對11種樣本類型進行檢測，不同采樣部位的禽流感病毒監(jiān)測結果顯示，污水樣本的禽流感病毒檢出率最高，為 50.00% ，其次是糞便樣本（ 36.36% ）和脫毛機表面（ 33.33% ）。經統(tǒng)計學分析，不同采樣部位間陽性率差異具有統(tǒng)計學意義（ x²=32.68 ，Plt;0.05 ），具體見表2。

表1不同場所類型禽流感病毒核酸檢測結果

表2不同采樣部位外環(huán)境樣本禽流感病毒檢測結果

表3不同時間段外環(huán)境樣本禽流感病毒檢測結果

第四，不同時間段禽流感病毒檢測情況。

6次采樣結果顯示，2025年2月7日采集樣本的陽性率最高，達 33.33% ，其次為2025年3月11日（ 31.25% ）。各時間段陽性率差異無統(tǒng)計學意義（ x²=5.28 ， Pgt;0.05 ），具體見表3。

2.2禽流感病毒亞型檢出情況

對64份禽流感病毒通用核酸陽性樣本進行H5/H7/H9分型檢測，其余亞型不做檢測。結果如下：H5亞型30份，占比 46.88% ；H9亞型48份，占比 75.00% 14份檢出H5和H9亞型，占比 21.88% ；H7亞型未檢出。

3討論

3.1禽流感病毒污染總體特征及公共衛(wèi)生風險

本研究表明，惠陽區(qū)涉禽場所外環(huán)境禽流感病毒總陽性率達 26.67% ，說明該區(qū)域外環(huán)境病毒污染廣泛存在。活禽銷售檔口（ 33.08% ）和家禽養(yǎng)殖場（ 20.00% ）陽性率較高，成為病毒傳播的高風險源頭。從傳播機制來看，場所內禽類高密度養(yǎng)殖與交易，大大增加了病毒傳播的可能性，部分場所衛(wèi)生管理不善、通風不良，為病毒在氣溶膠中存活提供了條件[1]有研究顯示，禽流感病毒在相對濕度 40%～60% 、溫度 5～25°C 的氣溶膠中可存活數(shù)小時至數(shù)天，這進一步加劇了傳播風險。

3.2不同場所類型的病毒污染差異機制

監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，活禽銷售檔口、家禽養(yǎng)殖場和農貿市場禽類交易區(qū)陽性率差異顯著（ x²=6.25 ， Plt;0.05 ），活禽銷售檔口因禽類周轉快、空間狹小且消毒不徹底，病毒易交叉?zhèn)鞑プ儺悾赎栃月首罡摺＜仪蒺B(yǎng)殖場雖相對封閉，但小型場生物安全管理薄弱，人員車輛進出消毒不嚴易引入外源病毒，糞便清理不及時形成病毒富集，陽性率達 40.00%^[2] 。農貿市場禽類交易區(qū)因交易后及時清掃沖洗，陽性率較低（ 13.33% ），但交易中病毒可能已擴散，仍存隱患，面對這些差異需分級防控：活禽銷售檔口強化每日終末消毒，采用過氧化氫干霧消毒技術；家禽養(yǎng)殖場規(guī)范生物安全管理，引入高溫堆肥結合生物菌劑處理糞便；農貿市場禽類交易區(qū)保持高頻清潔，加強交易后衛(wèi)生管理。

3.3采樣部位與病毒污染的關聯(lián)性

在11種采樣部位里，污水（ 50.00% ）、糞便（ 36.36% ）和脫毛機表面（ 33.33% ）的陽性率明顯高于其他部位，不同采樣部位間陽性率差異具有統(tǒng)計學意義（ x²=32.68 ， Plt;0.05 ）。污水和糞便作為禽類排泄物的載體，含有大量病毒顆粒，污水的流動性和其中的有機物質會增強病毒的抵抗力，容易污染周邊環(huán)境，成為二次傳播源，脫毛機由于接觸禽體且結構復雜，難以清潔，病毒容易在上面存活[3]。在防控工作中，應優(yōu)先對污水排放系統(tǒng)、糞便處理設施及屠宰加工設備進行高頻消毒：在污水排放口添加消毒劑，定期對管道進行沖洗消毒；對糞便采用高溫堆肥或者化學消毒的方式處理；脫毛機在使用后要立即拆卸清洗，并進行高效消毒。

3.4禽流感病毒污染的時間分布特征

時間序列分析表明，不同采樣時段陽性率差異不顯著（ x²=5.28 ， Pgt;0.05 ），2025年2月7日和3月11日陽性率較高，分別達 33.33% 和3 31.25% 。冬春季低溫干燥的環(huán)境有利于病毒在物體表面存活，病毒包膜穩(wěn)定性增強，存活時間可延長至數(shù)天到數(shù)周，冬春季禽類運輸和人員往來更為頻繁，加速了病毒傳播4。需持續(xù)開展季節(jié)性重點防控工作，尤其是在冬春季加強環(huán)境消殺與禽類健康監(jiān)測。

3.5禽流感病毒亞型分布的流行病學意義

亞型檢測結果表明，H5與H9亞型是惠陽區(qū)涉禽場所的優(yōu)勢毒株，在陽性樣本中占比分別為 46.88% 和 75.00% ，有 21.88% 的樣本同時檢出這兩種亞型，H9亞型因致病性較低，容易使家禽出現(xiàn)隱性感染，且持續(xù)排毒的情況會增加監(jiān)測防控的難度；H5亞型的部分變異株呈現(xiàn)亞臨床感染狀態(tài)，存在傳播方面的隱患[5]。兩種亞型的混合感染可能會促進病毒基因重配，進而產生新的變異株。

結語

惠陽區(qū)涉禽場所外環(huán)境顯示出較高程度的禽流感病毒污染，且在場所、部位上存在明顯差異，時間分布上不存在差異。本研究所得結果為制定精準化防控策略提供了關鍵參考，后續(xù)需依靠持續(xù)監(jiān)測與多學科研究，進一步完善禽流感防控體系，以降低人感染動物源性流感的公共衛(wèi)生風險。

參考文獻：

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收稿日期：2025-06-13

作者簡介：徐偉兵（1980一），男，漢族，本科，副主任技師。研究方向：衛(wèi)生微生物檢驗。