一例牛布魯氏桿菌病的實驗室診斷與防治建議

現(xiàn)階段在牛養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴大的背景之下，布魯氏菌的危害愈發(fā)加大，所以需要加強對該種疾病的科學認知，注重做好實驗室診斷，完善相應的診斷方法，并構建針對性的防控體系，以此來降低布魯氏菌病的發(fā)生流行率。

1病例探討

某肉牛養(yǎng)殖場（存欄量200頭）在春季發(fā)現(xiàn)3頭妊娠中后期（6～8個月）母牛突然流產(chǎn)，流產(chǎn)胎兒呈自溶狀態(tài)，胎衣滯留并伴有灰黃色分泌物。隨后1周內(nèi)，又有5頭母牛流產(chǎn)，部分公牛出現(xiàn)單側或雙側睪丸腫脹、觸痛（睪丸炎），少數(shù)牛表現(xiàn)關節(jié)腫大（關節(jié)炎）和間歇性發(fā)熱（ 39.5～41°C ）。發(fā)生疫情之后，養(yǎng)殖戶并未及時隔離病牛，導致健康牛通過接觸流產(chǎn)分泌物、污染的飼料或飲水感染，2個月內(nèi)，累計23頭母牛流產(chǎn)（占繁殖母牛的 35% ），6頭公牛睪丸炎，犢牛成活率下降至 70% 。獸醫(yī)接到求助后，到達養(yǎng)殖場進行了流行病學調查，通過與養(yǎng)殖戶溝通得知本年度該養(yǎng)殖戶從外地引進了3頭未經(jīng)檢疫的種公牛（經(jīng)檢測為隱性帶菌），成為初始傳染源。發(fā)病初期誤判為普通流產(chǎn)，未及時送檢，隔離區(qū)與健康牛舍共用排污通道，交叉污染風險高，未對流產(chǎn)場地進行深度消毒（如火焰焚燒地面），殘留病原體持續(xù)傳播，同時該養(yǎng)殖場未進行有效的封閉養(yǎng)殖管理，外來人員和動物能夠隨意在養(yǎng)殖場中活動。

2 臨床癥狀

妊娠母牛流產(chǎn)多發(fā)生于妊娠中后期（6～8個月），流產(chǎn)胎兒呈自溶狀態(tài)，胎衣滯留并伴有灰黃色或膿性分泌物。胎膜水腫、出血，覆蓋纖維素性滲出物。部分感染牛無流產(chǎn)癥狀，但長期排菌（乳汁、陰道分泌物）。公牛表現(xiàn)為單側或雙側睪丸腫大、觸痛，后期可能萎縮硬化，腕關節(jié)、膝關節(jié)腫脹，跛行，精子活力降低，不育。出生犢牛虛弱，存活率低，青年牛大多表現(xiàn)為無明顯癥狀，但血清學檢測陽性。

3病理變化

流產(chǎn)的胎兒皮下水腫、出血，腹腔積液。胎兒解剖后可以觀察到肝臟、脾臟有灰白色壞死灶（直徑 1～3mm ），胎衣增厚、壞死，表面覆蓋纖維素性滲出物。母牛子宮內(nèi)膜炎，子宮內(nèi)膜充血，有化膿性滲出物，公牛睪丸出血化膿性炎癥，切面可見黃色壞死灶。淋巴結腫大（如髂下淋巴結、乳房淋巴結），關節(jié)滑膜充血、增厚，關節(jié)腔積液。

4實驗室診斷

當前在布魯氏菌病實驗室診斷過程中，常用到的方法是血清診斷方法，推薦應用虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗以及補體結合試驗來判定病情。虎紅平板凝集試驗（RBPT）原理是酸性緩沖抗原（虎紅染色）與血清中抗體反應，操作過程中取 30μL 待檢血清與 30μl L抗原于玻片混勻，室溫（ 20～25^°C ）旋轉搖動 4min ，10份血清出現(xiàn)明顯凝集顆粒，將檢測為陽性的血清進行試管凝集試驗，其技術原理是定量檢測抗體效價，血清稀釋（ 1：25～1：800 ），每管加 10.5mL 抗原（滅活布魯氏菌懸液）， 37^°C 水浴 24h ，觀察凝集程度，效價 ≥1：80 為陽性（國際標準）， ≥1：160 為強陽性。補體結合試驗的技術原理主要是檢測IgG抗體，特異性高于SAT，效價 ≥1;10 為陽性（國際動物衛(wèi)生組織OIE推薦）[1]。

5疫情處置方案

依據(jù)2023年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《布魯氏菌病防控技術要點（第一版）》，要注重加強疫情發(fā)生后的針對性處置。

5.1疫情處置措施

以發(fā)病場為中心，半徑 3km 內(nèi)的所有養(yǎng)牛場劃為疫區(qū)；疫區(qū)外延 5km 為受威脅區(qū)[2。疫區(qū)禁止牛、相關產(chǎn)品及飼料調運，發(fā)病場戶出入口設立消毒池，24h 專人值守，病牛立即隔離至獨立封閉欄舍，與健康牛群物理隔離（間距 ≥50m ），對所有血清學陽性牛（無論是否表現(xiàn)癥狀）以及同群中與陽性牛密切接觸的疑似感染牛（經(jīng)風險評估確定）進行嚴格的無害化處理，尸體、流產(chǎn)胎兒、胎衣等采用焚燒或深埋（深埋深度 ≥3m ，撒生石灰 1kg/m² ）。同時要加強環(huán)境的有效消毒，環(huán)境消毒推薦使用 2% 氫氧化鈉、10% 漂白粉或 0.5% 過氧乙酸，器械消毒可以應用 75% 乙醇或 2% 戊二醛，每日對發(fā)病欄舍、排污溝、飼槽噴灑消毒1次，連續(xù)消毒21d。撲殺后對場地進行終末消毒（先清理有機物 $$ 噴灑消毒劑 $$ 火焰焚燒地面）。持續(xù)加強流行病學調查，對養(yǎng)殖場近6個月內(nèi)引種記錄（重點關注未檢疫牛）進行詳細分析，明確場內(nèi)人員、車輛流動史及鄰近養(yǎng)殖場疫情，追溯傳染源（如帶菌種牛）及傳播鏈。對受威脅區(qū)所有牛場進行全群血清學篩查（RBPT+ELISA），采樣比例 12% ，暫停疫區(qū)及受威脅區(qū)活牛交易、配種活動至少3個月，對受威脅區(qū)陰性牛群緊急接種布魯氏菌活疫苗S2株，每頭牛口服5頭份。

5.2疫區(qū)解封與后續(xù)監(jiān)測

最后1頭病牛撲殺后，全場徹底消毒并空欄21d，解封前對場內(nèi)環(huán)境（地面、排污溝）及器械采樣檢測，PCR結果陰性。解封后6個月內(nèi)，每月對存欄牛進行血清學檢測（SAT或ELISA），連續(xù)3次全群檢測陰性，方可視為凈化合格[3。養(yǎng)殖場解封6個月后，方可引入新牛，且需來自非疫區(qū)、具備檢疫證明（SAT效價 lt;1：50 ），每年開展2次全群血清學檢測，淘汰陽性牛，持續(xù)使用活疫苗免疫新生特牛（3～6月齡接種）。在疫情處置過程中可得知該養(yǎng)殖場繁殖母牛流產(chǎn)率達35% （23/65頭）公牛睪丸炎發(fā)病率達 15% （ 6/40 頭），全群血清陽性率（后續(xù)檢測）達 48% （96/200頭），隱性感染普遍，成年牛死亡率 lt;2% （4頭死于繼發(fā)子宮內(nèi)膜炎或敗血癥），犢牛死亡率達 30% （因母牛流產(chǎn)或乳汁帶菌導致弱犢死亡）。

6預防措施

6.1免疫預防

疫苗免疫接種是防控布魯氏菌病發(fā)生流行的最有效措施，但需要注意的是，該種疫苗一般應用于發(fā)病養(yǎng)殖場或受到威脅的養(yǎng)殖地區(qū)進行免疫接種，未受到布魯氏菌威脅的養(yǎng)殖場，通常不能夠進行免疫接種，S2株活疫苗（口服型）適用于3月齡以上特牛及成年牛，安全性高，每頭牛口服5頭份，免疫期24個月，A19株活疫苗僅限犢牛3～8月齡使用，每頭牛皮下注射1頭份，必要時可以在第1次配種前2～3個月再接種1/60頭份。疫苗免疫前后15d禁用抗生素，疫苗稀釋后2h內(nèi)用完，避免高溫和陽光直射，免疫后21d進行抗體檢測，SAT效價≤1：50為合格。

6.2嚴格落實生物安全管理方案

在日常養(yǎng)殖管理過程中，要引導養(yǎng)殖戶加強引種檢疫。對外引種期間應該優(yōu)先選擇國家級布魯氏菌病凈化場，需查驗《動物防疫條件合格證》編號，禁止從布魯氏菌病Ⅱ類及以上地區(qū)（年發(fā)病率 5% ）引種。人場前隔離30d，專用隔離舍（距離生產(chǎn)區(qū) ），間隔21d進行2次SAT檢測，確保效價均 lt;1：50 ），PCR檢測流產(chǎn)胎兒樣本，保證BCSP31基因陰性。另外要加強養(yǎng)殖環(huán)境控制，產(chǎn)房、犢牛舍采用實體墻隔離，配置獨立通風系統(tǒng)，空氣過濾效率 290% 。牧場入口設消毒池，內(nèi)部設置4%NaOH溶液，深度 ，每日更換。另外養(yǎng)殖場地也需要落實嚴格的消毒規(guī)范制度，牛舍地面推薦使用 12% 氫氧化鈉，每周2次，飲水系統(tǒng)可以應用 0.1% 過氧乙酸浸泡 30min ，每月1次，車輛輪胎使用 5% 次氯酸鈉噴灑至濕潤，每次出入場都需要進行消毒，工作服推薦使用121 °C 高壓蒸汽消毒 30min ，1次/d。養(yǎng)殖場存在不明原因的流產(chǎn)情況，要注重做好流產(chǎn)胎兒的無害化處理工作，用密封袋包裝，標注“生物危害”標識，無害化處置過程中優(yōu)先推薦化制操作方法，條件是 134^°C 、3bar、20min ，次選深埋，坑深 3m ，底層鋪 2kg/m² 生石灰，處理人員穿戴三級防護裝備，事后徹底消毒。

6.3監(jiān)測預警體系

養(yǎng)殖場所有種公牛選擇使用SAT+PCR監(jiān)測手段，每季度1次； 30% 的繁殖母牛推薦使用RBPT初篩，每半年1次； 10% 的商品育肥牛推薦使用SAT監(jiān)測手段，年度普查；RBPT陽性率 gt;2% 或SAT效價≥1：100 時，啟動緊急流行病學調查。

結語

綜上所述，在牛布魯氏菌病防控過程中，應從實驗室診斷角度入手，通過應用完善的實驗室診斷方法判定病情，然后選擇相應的方案對疫情進行有效處理，在養(yǎng)殖管理過程中要注重加強該種疾病的科學防范，通過妥善有效的防治方案，能夠有效切斷布魯氏菌病病原傳播渠道，確保養(yǎng)殖安全。

參考文獻：

[1]魏瓊.羊布病防治工作中存在的問題及對策[J].農(nóng)民致富之友，2023（9）：96-98

[2]沈召偉，宋金艷，潘銀玲.牛羊布病防治中的問題與應對策略研究[J].吉林畜牧獸醫(yī)，2023，44（3）：67-68.

[3]李洪芹，黃建云.牛羊養(yǎng)殖中布病防治存在的主要問題與對策[J].中文科技期刊數(shù)據(jù)庫（全文版）自然科學，2021（7）：4.

收稿日期：2025-05-30

作者簡介：霍紅莉（1996一），女，漢族，本科，助理獸醫(yī)師。研究方向：動物疾病治療。