林下栽培大球蓋菇對大籽弼猴桃根結線蟲的防治效果

獼猴桃根結線蟲是危害獼猴桃根部的一種重要病害，從幼苗到成株均可受害。受害植株的根部腫大呈瘤狀或根結狀，后期整個瘤狀物和病根均變為褐色，并逐漸腐爛。果樹受害后，植株矮小、新梢短細、葉片發黃易落，樹勢弱，結果少且小，嚴重時整株萎蔫死亡。弼猴桃根結線蟲在土溫 20～27^°C 適宜傳播危害，土溫低于 12^°C 時不易侵入，高于 28^°C 時線蟲活動受抑制。有多位學者做過國內獼猴桃的根結線蟲分離鑒定，危害弼猴桃的根結線蟲主要有南方根結線蟲、爪哇根結線蟲、花生根結線蟲和北方根結線蟲[1-2]。

大球蓋菇屬擔子菌門、傘菌綱、傘菌目、球蓋菇科。大球蓋菇抗逆性強，適應范圍廣，其菌絲具有極強的抗雜菌能力[。大量研究表明大球蓋菇具有殺線蟲作用。如程李瑜等探究“食用菌-黃瓜\"套作栽培模式，試驗結果表明黃瓜與大球蓋菇套作的根結線蟲病病情指數顯著降低。大球蓋菇生長代謝過程中產生的揮發性有機化合物和水溶性化合物對線蟲有引誘作用，并能提高線蟲死亡率[5。李玉中以小桿目腐生線蟲為靶標，觀察到大球蓋菇通過星狀體降解蟲體，處理 48h 后，線蟲 100% 死亡且被分解為許多小泡。林下栽培大球蓋菇可提高土壤有機質含量，增加土壤中放線菌豐度。放線菌對根結線蟲侵染也有抑制作用，放線菌通過分泌多種酶作用于線蟲外殼、誘導植物產生免疫防御等方式防治根結線蟲[8。

大籽弼猴桃屬弼猴桃科弼猴桃屬，中型落葉藤本植物。大籽弼猴桃根系發達，比美味弼猴桃、對萼獼猴桃及軟棗弼猴桃更耐澇[]。采用大籽獼猴桃作砧木能提高嫁接獼猴桃的單果質量、干物質含量等內在品質]。而根據王莉等[試驗，大籽弼猴桃極易感根結線蟲，病情指數超過64。作者檢索了國內文獻，關于在田間開展大球蓋菇防治弼猴桃根結線蟲的研究較少，為測試大球蓋菇對弼猴桃根結線蟲的防治效果，2021一2022年，開展了大籽弼猴桃樹下栽培大球蓋菇防治根結線蟲試驗。

1 材料與方法

1.1 試驗地

試驗地位于江蘇省淮安市洪澤區東雙溝鎮濱湖社區，處淮河下游洪澤湖東部平原，土壤類型為滲育型水稻土，土壤pH值6.7。試驗地原栽種美味系弼猴桃砧的海沃德弼猴桃，2017年秋施基肥時發現根部有大量根結，表明可能存在根結線蟲感染。為進一步確認，采用貝爾曼漏斗法從土壤中分離線蟲，用光學顯微鏡觀察分離液，可見到大量活體線蟲。另將弼猴桃根部大的瘤體剖開后，肉眼可見瘤體組織內有白色粒狀物，在光學顯微鏡下觀察，可見乳白色梨形具尖凸端雌成蟲。參照線蟲種類鑒定文獻，確認根瘤為根結線蟲感染所致。2018年春季，挖除栽植此地塊中的海沃德，按株行距 2m×4m 南北方向栽種2年生大籽弼猴桃扦插苗，用作采穗圃（圖1）。2020年秋季，隨機選擇的3株大籽獼猴桃根系上都長有根瘤。

1.2 試驗菌種

大球蓋菇二級菌種購自福建省莆田市，經作者擴繁成三級栽培種。栽培種質量約 500g/ 袋。

1.3 栽培基質

2021年10月下旬，試驗地周邊水稻收割后，收集棄在田埂上已被收割機切段成 5～40cm 的稻草作為栽培基質。

1.4大球蓋菇栽培方法與步驟

1.4.1浸濕稻草11月18日，將稻草浸沒在注滿水的桶中，翻動稻草使水能均勻浸透稻草，撈出堆垛。2d后，再浸濕稻草1次。

1.4.2開溝11月21日，選擇試驗地中同行且相鄰6株南北向栽種的大籽弼猴桃，在距大籽弼猴桃基部 0.4m 平行種植行西側挖一道長 12m 、寬 0.5m ，深 0.15m 的淺溝。大籽弼猴桃根系分布較淺，在開溝過程中部分根被切斷。檢查暴露在溝中的根系，發現6株大籽弼猴桃都已感染根結線蟲。

1.4.3鋪草播撒菌種在溝中鋪放之前已浸濕透的稻草，底層稻草厚度約 15cm ，將大球蓋菇種菌塊成杏核大的塊狀，按 10cm×10cm 的間距均勻點播于底層稻草上。再鋪上 10cm 厚上層稻草，剩余菌種捏碎，播撒在上層稻草上，每 m² 播撒栽培種用量1.5袋。

1.4.4覆土保溫保濕種菌完成后，將開溝時堆放在溝兩側的堆土敲碎后均勻覆蓋在上層稻草上，厚度約 2cm 。12月5日，寒潮來臨前澆1遍透水，再蓋上塑料膜保溫保濕。2022年3月30日，見有少數菇蕾破土，揭去塑料膜，蓋上草簾保濕遮陽。之后，根據天氣情況，及時澆水保濕。澆水需少澆勤澆，防止栽培基質濕度過大致菌絲腐爛。4月10日第1次出菇高峰(圖2)，2022年5月8日大球蓋菇出菇結束。2021年11月21日至2022年11月24日期間，保持大球蓋菇種植帶原狀，不施用農藥和肥料，人工割除樹下雜草1次。

1.5 調查樣方布設與統計方法

2022年11月24日，大籽獼猴桃落葉后，選擇6株大籽弼猴桃中間相鄰的4株布設調查樣方。在每株邊上設A、B、C共3類不同位置 40cm×40 cm正方形調查樣方。A樣方位于大籽弼猴桃西側的大球蓋菇栽培帶中，樣方正對大籽弼猴桃，東邊距大籽獼猴桃基部 40cm 。B樣方位于大籽獼猴桃西南，北邊與大籽弼猴桃基部垂直距離 40cm ，東、西邊分別與C樣方、大球蓋菇種植帶相接，中心點距大球蓋菇種植帶 20cm 。C樣方位于在大籽弼猴桃東南，與B樣方平齊且相接，中心點距大球蓋菇種植帶 60cm （圖3）。

4株共設A、B、C樣方各4個，12個樣方。挖取根系前先用膩子粉劃出每個樣方邊界，在樣方內，挖取從地表向下深度約 15cm 范圍內的大籽弼猴桃根系，按A、B、C分類裝袋后帶回實驗室。在實驗室，各編號樣方根系的處理與統計方法如下：根系放入清水浸泡 10min 后，用軟毛刷輕輕刷凈根系上附著的泥土，再用清水沖洗并用吸水紙吸去根系上的水分，清點3類樣方中根系上根結數量。然后擦凈A4幅面掃描儀玻璃面板，將根系平展在掃描儀玻璃面板上，覆上潔凈的白色A4復印紙，掃描并存儲根部圖像為JPG格式文件。大的根系，需剪成段，分段掃描，確保A4紙可完全覆蓋根系。存儲的每幅圖像用Photoshop軟件處理，刪除A4紙背景邊緣以外部分，再用自由變換工具對影像糾偏后存儲為24色BMP格式圖像文件（圖4左），查看BMP格式圖像不同部位像素RGB值，歸納出根系像素RGB值范圍。編寫python代碼，通過根系影像像素RGB值范圍篩選出根系影像（圖4右），并累計每幅BMP圖像根系影像像素數量。各類樣方投影面積和根結密度算式如下：

根系投影面積 (cm²)=( 根系影像像素數量BMP圖像像素數量） × 標準A4紙面積 (263.7cm²) 。根結密度（個 /cm²)=Σ 根結數量/ Σ 根系投影面積。

采用根結密度衡量A、B、C樣方中根系感染根 結線蟲輕重程度，根結密度小，表明根系受感染程 度輕。

2 結果與分析

各類樣方根系清點的根結數量、根部投影面積、根結密度見表1。根結密度排序為A樣方2 。B樣方與大球蓋菇栽培帶相鄰，共6條根系有324個根結，根結密度0.898個 /cm² ，根結數量、根結密度分別是A樣方的108倍、82倍，與A樣方差異極顯著。C樣方與大球蓋菇栽培帶間隔B樣方，共6條根系有537個根結，根結密度1.240個 /cm² ，分別是A樣方的179倍、113倍。C樣方根結數量、根結密度也高于B樣方，分別是B樣方1.7倍、1.4倍。C樣方與B樣方在根結數、根結密度間的差距明顯小于A樣方。

A樣方與B、C樣方在根結數量和根結密度上的差異，顯著大于B、C樣方之間的差異。表明在栽培帶內，大球蓋菇對大籽弼猴桃根結線蟲有極佳的防治效果，遠離栽培帶，其防治效果便迅速減弱。究其原因，可能是大球蓋菇菌絲生長最適溫度范圍與根結線蟲活動和繁殖的最適溫度范圍基本重合。在20～27^°C 的土溫區間，大球蓋菇菌絲生長迅速，而該溫度區間與根結線蟲活動和繁殖的最適溫度區間基本重合。適溫區內，大球蓋菇菌絲在栽培帶土攘中產生了大量化學物質以及星狀體細胞，驗證了Bian等的研究結果，這些物質起到了引誘并擊殺栽培帶土壤大量活躍根結線蟲的作用。此外，作為大球蓋菇栽培基質的稻草，為土壤提供了豐富的能量和養分，促使栽培帶土壤中的放線菌大量繁殖。曹艷茹等證實，放線菌不僅能分泌多種酶，還會產生次級代謝產物，這些物質一方面可誘導根系對根結線蟲產生免疫防御，另一方面也能直接抑制根結線蟲。相比之下，栽培帶外因B、C樣方無稻草輸入，上述作用則相對較弱。

B、C樣方之間存在差異（ B

3 討論與結論

在大球蓋菇栽培帶內的A樣方中大籽弼猴桃根系感染根結線蟲極少，證實了在大籽獼猴桃樹下栽培大球蓋菇對栽培帶中的根結線蟲有顯著的防治效果，同時能夠減輕大球蓋菇栽培帶周邊根結線蟲危害，防治效果隨著與大球蓋菇栽培帶距離增大而迅速減弱。本次試驗結果對其他弼猴桃種為砧木的果園防治根結線蟲也具有參考價值，且收獲的大球蓋菇還可以增加果農收入。

大籽弼猴桃根系發達，須根數量龐大，采用常用的弼猴桃根結線蟲病分級標準需清點根的數量，統計工作量大。所以本試驗統計方法中沒有采用常用的獼猴桃根結線蟲病分級標準進行統計并計算病情指數，而是采用根結數/根系投影面積計算出的根結密度描述病情。筆者認為此方法更為簡便，可以具體反映出弼猴桃根部受根結線蟲病感染的程度。

通過分子生物學方法結合根結中分離出的雌成蟲會陰花紋可以更準確地鑒定出根結線蟲種名。因筆者所在的基層實驗室不具備上述條件，故不能給出準確的根結線蟲種名。

參考文獻

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