源自蛇毒的蛋白C激活劑通過調控HIF-1α抑制BNIP3活性氧生成保護人臍靜脈內皮細胞免受缺氧-復氧損傷

摘要：目的 探究蛇毒天然組分蛋白C激活劑（PCA）抑制ROS生成發揮抗血管內皮細胞損傷作用及機制。方法 體外培養人臍靜脈血管內皮細胞系（HUVECs），建立內皮細胞氧糖剝奪/再復氧（OGD/R）模型，檢測PCA和2-ME2（HIF1α 抑制劑）單獨處理及合用對細胞ROS 生成和HIF-1α、BNIP3、Beclin-1 蛋白表達的影響。OGD/R細胞模型轉染BNIP3 特異性siRNA，分為空載組、干擾組、PCA 組、干擾+PCA 組，檢測各組HIF1α、BNIP3、Beclin-1 蛋白表達量及ROS含量。結果 抑制HIF1α表達研究結果表明，PCA處理后蛋白HIF-1α、BNIP3、Beclin-1表達水平增高（Plt;0.05）而ROS含量明顯降低（Plt;0.05），2-ME2+PCA組與PCA組相比，蛋白HIF-1α、BNIP3、Beclin-1表達水平降低（Plt;0.05），而ROS含量增高（Plt;0.05），與之相反，PCA+DMOG組與PCA組相比，蛋白HIF-1α、BNIP3、Beclin-1 表達水平增高（Plt;0.05），而ROS 含量降低（Plt;0.05）。BNIP3 干擾研究結果顯示，干擾組+PCA組與干擾組相比，蛋白BNIP3 表達增高（Plt;0.05），HIF-1α 沒有變化（Pgt;0.05），ROS 含量降低（Plt;0.05）；干擾+PCA 組與PCA組相比蛋白 BNIP3、Beclin-1 蛋白表達水平降低（Plt;0.05），而ROS含量都增高（Plt;0.05）。結論 蛇毒PCA通過調控HIF-1α上調BNIP3抑制OGD/R誘導HUVECs 產生的ROS，發揮抗損傷作用。

關鍵詞：內皮細胞氧糖剝奪/再復氧；蛋白C激活劑；線粒體自噬；HIF-1α

治療缺血性腦卒中的主要方式是通過溶栓恢復缺血組織供血，但缺血組織血流復灌會引起腦缺血/再灌注損傷（IRI）［1， 2］。有研究表明IRI的發病與ROS生成、炎癥反應、細胞鈣離子超載、自噬及細胞死亡等有關［3］，但其具體機制尚未研究清楚。因此通過減少細胞ROS生成可能是治療IRI 的潛在方式。ROS生成的發生與細胞供養狀態有關，在正常供氧情況下，線粒體進行氧化磷酸化產生能量不影響機體的活性氧（ROS）的生成［4］。在缺氧條件下，細胞進行無氧呼吸，ATP產量降低，離子交換通道失效進而導致細胞酶活的降低［5］，再復氧時，由于受損線粒體無法恢復完整的氧化磷酸化過程，產生氧自由基，從而引起ROS生成［6］。……