右美托咪定通過激活Nrf2/HO-1通路減輕熱應激誘導的人骨骼肌細胞脹亡

摘要：目的 研究右美托咪定（DEX）對于熱打擊誘導人骨骼肌細胞（HSKMC）脹亡的保護作用及可能機制。方法 體外培養HSKMC，熱打擊組（HS組）將細胞置于43 ℃的水浴鍋中熱打擊4 h，構建細胞脹亡模型，設置對照組、HS組、30 μmol/L DEX+HS組、ML385+30 μmol/L DEX+HS組、si-Nrf2+HS組、si-Nrf2+30 μmol/L DEX+HS組。通過CCK-8法檢測細胞活力，透射電子顯微鏡觀察細胞超微結構，Annexin V-FITC/PI免疫熒光流式細胞術檢測細胞脹亡和細胞凋亡，使用谷胱甘肽（GSH）和GSH-px試劑盒檢測細胞中GSH及GSH-px含量，TBA法檢測丙二醛（MDA），比色法檢測乳酸脫氫酶（LDH）、超氧歧化酶（SOD）、三磷酸腺苷（ATP）表達水平，ELISA法檢測腫瘤壞死因子（TNF）-α、白介素（IL）-6、IL-1β 水平，qRT-PCR及Western blotting 法檢測porimin、caspase-3、Nrf2、p-Nrf2、HO-1、NQO1等蛋白表達水平變化，熒光探針法檢測細胞內活性氧（ROS），JC-1熒光染色法檢測線粒體膜電位損傷。結果 與對照組相比，HS組細胞和細胞器腫脹、胞質內空泡化明顯，符合脹亡表現，細胞活力下降，細胞雙陽性細胞率（Annexin-V+/PI+）、porimin 蛋白表達量增加（Plt;0.05），caspase-3 蛋白在各組間的差異無統計學意義（Pgt;0.05），ROS、MDA、LDH、TNF-α、IL-6 和IL-1β 的含量增多（Plt;0.05），ATP、線粒體膜電位、GSH、GSH- px 和SOD水平降低（Plt;0.05）。與HS組相比，30 μmol/L DEX+HS組細胞損傷減輕，細胞活力升高，細胞雙陽性細胞率下降（Plt;0.05），ROS、MDA、LDH、TNF-α、IL-6和IL-1β的含量下降（Plt;0.05），ATP、線粒體膜電位、GSH、GSH- px和SOD含量升高（Plt;0.05），Nrf2、p-Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表達升高（Plt;0.05）。與30 μmol/L DEX+HS 組相比，經ML385 或si-Nrf2 干預后，DEX對HSKMC細胞的保護作用減弱（Plt;0.05）。結論 熱打擊誘導人骨骼肌細胞發生脹亡，DEX抑制熱打擊誘導的脹亡，可能機制是激活Nrf2/HO-1 信號通路減輕HSKMC的氧化損傷以及抑制炎癥因子分泌。

關鍵詞：右美托咪定；橫紋肌溶解癥；脹亡；人骨骼肌細胞；Nrf2/HO-1 通路

創傷、遺傳或中毒等可導致肌肉細胞的急性損傷，即橫紋肌溶解癥，其病理生理學核心是由于細胞膜破壞和三磷酸腺苷（ATP）耗盡而致鈣離子流入細胞［1-4］。……